Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

В.Е.КОВШИЛО

23 марта 1978 г. N 1829-78

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТОКСИЧНОСТИ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР И ПРОДУКТОВ

ИХ ПЕРЕРАБОТКИ, ПОРАЖЕННЫХ ГРИБАМИ РОДА ФУЗАРИУМ

СЕКЦИИ SPOROTRICHIELLA

Методические указания подготовлены Институтом питания АМН СССР и Оренбургским медицинским институтом.

Методические указания рекомендуются для использования в работе лабораторий санэпидстанций.

В зерновых культурах, убранных или произраставших в неблагоприятных метеорологических условиях (обильные дожди, ранний снег), запоздалой уборки урожая, поздно осенью вывезенных с поля, а также своевременно убранных, но недостаточно просушенных или хранившихся в условиях повышенной влажности, может отмечаться повышенная их пораженность токсигенными микроскопическими грибами из рода Фузариум и вследствие этого зерно приобретает ядовитые свойства. Продукты жизнедеятельности этих грибов не теряют своих свойств при термической обработке: выпечке хлеба, варке пищи и т.д. Поэтому употребление в пищу такого зерна и продуктов его переработки может стать причиной в некоторых случаях протекающих очень тяжело заболеваний людей (алиментарно-токсическая алейкия, расстройства функции кишечного тракта и др.).

В последние годы в урожае хлебов иногда обнаруживают зерна с розовым и красным оттенками, особенно в зерне ржи, имеющие внешние признаки, характерные для зерна, пораженного Фузариум. Однако следует иметь в виду, что окраска зерна не всегда связана с его токсичностью. Такое зерно является лишь "подозрительным" на токсичность.

С целью профилактики зерновых пищевых микотоксикозов людей зерно, подозрительное по вышеуказанным показателям, должно исследоваться на токсичность биологическими методами. Обязательным является испытание зерна на голубях. Биопроба с культурой дрожжей желательна в качестве подтверждающего теста.

I. Материал для исследования

Исследованию подлежат:

1. Зерно нормальных сроков уборки, но имеющее окрашенные в розовый или красный цвет зерна, что вызывает подозрение на обсеменение их микроскопическими грибами из рода Фузариум, а также продукты переработки такого зерна.

2. Зерно нормальных сроков уборки, но хранившееся при неблагоприятных условиях, имеющее следы плесневения (подозрительное при визуальном осмотре), а также продукты переработки такого зерна.

II. Отбор зерна и его паспортизация

Пробы отбираются от каждой поступающей партии зерна, в соответствии с ГОСТом 3040-55.

Отобранные образцы должны быть паспортизованы. На этикетках указывается:

а) место отбора зерна (область, район, колхоз, совхоз и т.д.);

б) наименование зерновой культуры (пшеница, рожь, просо и др.);

в) количество зерна, от которого взята проба (или размер партии);

г) откуда взят образец (снят на корню, из валков, со склада);

д) дата отбора пробы;

е) вес взятого образца;

ж) фамилия ответственного за отбор проб.

Отобранные образцы направляют на исследование в ближайшую санитарно-эпидемиологическую станцию.

III. Подготовка материала для исследования

и получение экстракта липидов

Из поступившего на исследование зерна отбирают среднюю пробу около 200 г, подсушивают ее при температуре 40 - 50°, из них 100 г измельчают на лабораторной мельнице в течение двух минут и экстрагируют диэтиловым эфиром в аппарате Соколета в течение 6 часов. Эфирный экстракт высушивают безводным сернокислым натрием, отфильтровывают и эфир отгоняют на водной бане при температуре не выше 40 - 50 °C. Полученный масляный остаток - свободные липиды - используют для определения токсичности.

В каждом случае при проведении анализа необходимо ставить контрольную пробу с доброкачественным зерном.

IV. Биологическая проба на голубях

В качестве тест-объекта используют голубей породы "Сизарь" в количестве не менее трех птиц на каждый образец зерна. Кормление голубей проводят испытуемым зерном натощак из расчета 5 г зерна на 1 кг веса птицы в течение 14 дней (кормят из чайной ложки, насильственно открывая клюв). После кормления ставят в клетку воду, а через 2 часа обязательно обычный корм <*>.

    --------------------------------

    <*> Нормы питания голубей:

    1. Вика    - 30%

    2. Горох   - 20%

    3. Ячмень  - 10%

    4. Просо   - 20%

    5. Пшеница - 15%

    6. Конопля - 5%

    -----------------

                 40 г

    При отсутствии указанных ингредиентов можно использовать следующие:

    1. Пшено   - 20 г

    2. Семечки - 10 г

    3. Конопля - 5 г

    4. Пшеница - 5 г

    -----------------

                 40 г

Каждый голубь содержится в отдельной клетке, на дно которой стелится светлая бумага, чтобы не пропустить выделения рвотных масс и наличия жидкого стула.

В течение опыта следят за общим состоянием и весом птицы. При отсутствии положительной реакции голубей в течение опытного периода птиц забивают методом декапитации и производят макро- и микроскопические изучения органов тканей (слизистых оболочек клюва, гортани, пищевода, желудочно-кишечного тракта, обращая особое внимание на состояние печени, почек, селезенки).

При наличии симптомов заболевания голубей (рвота, понос) или гибели испытуемое зерно оценивается как токсичное.

При отсутствии клинической картины заключение о зерне дают уже по патоморфологическим данным, исключая интеркурентные заболевания.

V. Определение токсичности зерна при помощи чувствительного

к фузариотоксину штамма дрожжей Saccharomyces fragilis 25Д

(ориентировочный метод)

В качестве тест-организма для определения фузариотоксинов этот штамм дрожжей был предложен Институтом микробиологии и вирусологии им. Д.К. Заболотного АН УССР.

Для анализа используют 24-часовую культуру дрожжей на сусловом агаре. В пробирку с культурой дрожжей наливают 5 - 10 мл стерильной водопроводной воды. Пробирку взбалтывают до образования суспензии. Суспензию готовят по эталону N 5, что соответствует 5 единицам мутности (0,5 млрд./1 мл) стандарта мутности. 1 - 2 мл суспензии наливают в заранее приготовленные чашки Петри и заливают расплавленным и охлажденным до 60° сусло-агаром из расчета 20 мл на чашку и тщательно перемешивают. На застывшую поверхность среды помещают стерильные диски, вырезанные из фильтровальной бумаги, диаметром 5 мм, на которые наносят 0,01 мл липидов, выделенных из исследуемого зерна.

Чашки Петри помещают в термостат при температуре 35 °C на сутки, после чего определяют результаты опыта. Степень токсичности липидов определяют по диаметру стерильных зон: диаметр стерильной зоны до 15 мм - зерно слаботоксичное; 15 - 25 мм - среднетоксичное; выше 25 мм - резкотоксичное; контроль - отсутствие стерильных зон.

VI. Заключение по результатам исследования образца зерна

Заключение о пригодности исследуемого образца зерна в питании дается на основании результатов биологических проб на голубях и дрожжевых грибах.

1. Отсутствие клинической картины заболевания у голубей и отсутствие зон задержки роста дрожжей на чашках Петри - зерно нетоксичное.

2. Наличие симптомов заболевания у голубей и наличие задержки роста дрожжей - зерно токсичное.

3. Наличие симптомов заболевания у голубей при отсутствии зон задержки роста дрожжей - зерно токсичное.

4. Отсутствие симптомов заболевания у голубей, но наличие зон задержки роста дрожжей - зерно сомнительное.

Необходимо повторить исследования с новой пробой зерна данного образца.

Настоящие методические указания издаются временно сроком на 2 года взамен "Методических указаний по определению токсичности зерновых культур и продуктов их переработки в связи с поражением их токсигенными грибами Фузариум", утвержденных заместителем Главного санитарного врача СССР от 12.01.1967 за N 661-67.