Утверждаю

Начальник Главного

санитарно-эпидемиологического

управления Министерства

здравоохранения СССР

В.Е.КОВШИЛО

4 декабря 1974 г. N 1201-74

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОМУ КОНТРОЛЮ В АПТЕКАХ

Разработаны - Лабораторией санитарной бактериологии Санэпидстанции г. Москвы.

Рассмотрены и рекомендованы к утверждению Лабораторным Советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Министерства здравоохранения СССР.

Методические указания предназначены для работников лабораторий санитарно-эпидемиологических станций и лечебно-профилактических учреждений.

При осуществлении текущего санитарного контроля за режимом работы в аптеках санитарно-эпидемические станции и лечебно-профилактические учреждения руководствуются Приказами Министерства здравоохранения СССР N 79 "Об утверждении инструкции по санитарному режиму в аптеках" от 25 февраля 1975 г., N 573 "Об утверждении временных нормативов предельно допустимого содержания непатогенных микроорганизмов в лекарственных формах аптек" от 30 ноября 1962 г. и N 768 "Об утверждении инструкции по контролю качества лекарств и основных требований по их изготовлению в аптеках" от 26 октября 1968 г.

При этом объектами бактериологического исследования являются:

а) дистиллированная вода;

б) инъекционные растворы (до стерилизации);

в) глазные капли;

г) аптечная посуда, пробки, прокладки и прочие вспомогательные материалы, инвентарь, оборудование и руки персонала (контроль осуществляется методом смывов).

Отбор проб для исследования производят работники санэпидстанций, а при проведении исследований в лечебно-профилактических учреждениях - работники лабораторий.

Пробы дистиллированной воды, используемой для приготовления лекарственных форм (кроме лекарств для инъекций и глазных капель), отбирают в количестве 500 мл в стерильные бутылки, закрытые ватными пробками и бумажными колпачками. Пробы отбирают из бюретки, предварительно обжигают ватой, смоченной спиртом.

При наличии в аптеке трубопровода для дистиллированной воды, отбор проб осуществляют из бюретки над столом ассистента и дефектара.

Для оценки санитарного содержания трубопровода, выемки производят непосредственно из трубопровода и затем из бюреток.

Норм качества воды из трубопровода по бактериологическим показателям в настоящее время не имеется, в связи с чем оценка результатов бактериологического исследования дистиллированной воды из трубопроводов производится в соответствии с требованиями ГОСТа 2874-73 "Вода питьевая, методы санитарно-бактериологического анализа".

Пробы дистиллированной воды, используемой для приготовления инъекционных растворов и глазных капель, отбирают в стерильные флаконы лаборатории в количестве 15 - 20 мл непосредственно из баллона сразу же после перегонки или сосудов, в которых стерилизуется вода.

Инъекционные растворы (до стерилизации) отбирают не позднее полутора часов после их приготовления и доставляют в лабораторию в тех же флаконах, в которых они будут подвергнуты стерилизации.

В случае необходимости проведения анализа инъекционных растворов на стерильность, руководствуются указаниями Приказа Министерства здравоохранения СССР N 79 "Об утверждении инструкции по санитарному режиму в аптеках" от 25.02.1957, используя при этом методику, приведенную в приложении N 2 (не приводится).

Глазные капли доставляют в лаборатории непосредственно во флаконах, отпускаемых населению, и в лечебно-профилактические учреждения. Целесообразно отбирать глазные капли 3 - 4-х наименований с продажи и со стола ассистента.

Аптечную посуду (чистые флаконы), приготовленную для розлива лекарственных форм, отбирают в количестве трех штук одинаковой емкости. Флаконы доставляют в лабораторию в укупоренном виде, используя при этом пробки и прокладки, заготовленные для отпуска лекарственных форм.

Пробки (корковые, полиэтиленовые) и прокладки отбирают отдельно прожженным пинцетом и помещают по пять штук в широкогорлые стерильные колбы или банки, закрытые ватно-марлевыми пробками и бумажными колпачками.

Фильтровальные воронки, пипетки, мерные колбы, цилиндры, используемые для приготовления инъекционных растворов, контролируют путем их ополаскивания непосредственно в аптеке 10 мл стерильной водопроводной водой, полученной в пробирках из лаборатории.

Используемые в аптеках пипетки прополаскивают несколько раз в пробирке, содержащей 10 мл стерильной водопроводной воды, пробирки со смывной жидкостью доставляют в лабораторию.

Смывы с инвентаря, оборудования, рук персонала берут стерильными ватными тампонами, помещенными в пробирки с 2 мл физиологического раствора.

Методика исследования

1. Исследование дистиллированной воды, используемой для изготовления лекарственных форм (кроме лекарств для инъекций и глазных капель), производят в целях определения общего количества микроорганизмов (бактерий, плесневых грибов) в 1 мл и наличия кишечной палочки и бактерий рода Proteus.

а) Определение общего количества микроорганизмов в 1 мл.

Исследуемую воду вносят по 1 мл в две параллельные чашки Петри, которые затем заливают питательным агаром и выдерживают 24 часа при 37 °C и 24 часа при комнатной температуре. После этого подсчитывают число выросших колоний микроорганизмов как на поверхности, так и внутри агара. Подсчет колоний проводится обязательно с помощью лупы, так как колонии бактерий, даже после 48-часового инкубирования, могут быть настолько мелкими, что невооруженным глазом не видны.

При вычислении результатов анализа выводят среднее арифметическое из числа колоний, выросших на обеих чашках.

Кроме того, для выявления плесневых грибов по 0,5 мл исследуемой воды засевают на поверхность двух чашек Петри со средой Сабуро и инкубируют при 20 - 22 °C в течение 3 - 4 суток. Затем подсчитывают число колоний плесневых грибов на обеих чашках. После этого суммируют число бактерий и число грибов, содержащихся в 1 мл воды.

Примечание: При приготовлении питательного агара берут 5 г сухого питательного агара, производства Дагестанского НИИПС, 50 мл бульона и 100 мл воды.

Приготовление среды Сабуро: к одному литру дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 40 г глюкозы или мальтозы, 1,5% агар-агара, PH не устанавливают. Стерилизуют при 110 °C в течение 30 мин.

б) Определение титра группы кишечных палочек.

При определении титра бактерий группы кишечных палочек пользуются методикой действующего ГОСТа 2874-74 (Вода хозяйственно-питьевого водоснабжения. Методы санитарно-бактериологического анализа).

2. Исследование дистиллированной воды для приготовления инъекционных растворов и глазных капель, инъекционных растворов (до стерилизации) и глазных капель осуществляют с целью установления содержания микроорганизмов (бактерий, грибов) в 1 мл, выявления бактерий группы кишечных палочек, определения патогенных стафилококков по эпидпоказаниям.

а) Определение общего количества бактерий производят в соответствии с пунктом "1а";

б) Определение наличия бактерий группы кишечных палочек.

Исследуемые лекарственные формы засевают в количестве 1 мл на 8 - 9 мл разведенной среды Эйкмана. Дальнейший ход исследования и идентификацию бактерий группы кишечных палочек проводят по общепринятой методике. При необходимости количественного определения бактерий групп кишечных палочек: 1 мл лекарственных форм засевают на чашку со средой Эндо глубинным методом. После инкубации чашки при 37 °C в течение 24 часов учитывают колонии, типичные для кишечной палочки.

3. Исследование сухих лекарственных веществ, используемых для изготовления инъекционных растворов и глазных капель.

Из доставленных сухих лекарственных веществ в лаборатории на стерильной дистиллированной воде готовят растворы в тех же концентрациях, что и инъекционные растворы и глазные капли, изготовляемые в аптеках. Объем и методика исследования приготовленных растворов в соответствии с пунктом "2".

4. Исследование аптечной посуды, пробок, прокладок и смывной жидкости с фильтровальных воронок, пипеток, мерных колб и цилиндров.

В один из трех доставленных флаконов наливают 10 мл стерильной водопроводной воды. Флакон ополаскивают в воду над пламенем горелки, последовательно переливают во 2-й и 3-й флаконы для тщательного их ополаскивания. В банки или широкогорлые колбы, доставленные с пробками, прокладками и т.д., наливают 10 мл воды и тщательно ополаскивают.

В полученной смывной жидкости определяют микробное число и наличие бактерий группы кишечной палочки.

а) Определение общей микробной обсемененности - определяют в соответствии с пунктом "1а". При вычислении результатов - число колоний, установленное в 1 мл смывной жидкости, умножают на 10, что соответствует содержанию колоний микробов на всей смывной поверхности 3-х одноименных предметов.

б) Определение наличия бактерий группы кишечных палочек. 8 мл оставшейся смывной жидкости засевают в 1 мл концентрированной среды Эйкмана и инкубируют в термостате 24 часа при 43 °C.

Дальнейший ход исследования и идентификацию бактерий группы кишечных палочек проводят по общепринятой методике.

5. Исследование смывов с инвентаря, оборудования, рук персонала.

Ориентировочный перечень объектов, подлежащих контролю методом смывов:

1. Рабочее место дефектара.

2. Стол для приготовления инъекционных растворов.

3. Стол для приготовления глазных капель.

4. Руки персонала во время приготовления лекарственных форм.

5. Весы для взвешивания сухих веществ у дефектара.

6. Тара для хранения прокладок и пробок для инъекционных растворов и глазных капель.

7. Ступки.

8. Пластинки пластмассовые.

9. Бюретки.

10. Штанглазы.

11. Весы роговые.

12. Кран водопроводный в ассистентской.

13. Руки персонала.

14. Полотенце.

15. Халат.

Объем исследования:

а) определение наличия бактерий группы кишечных палочек;

б) определение наличия патогенных стафилококков (по показаниям).

а) Определение наличия бактерий группы кишечных палочек.

Доставленный тампон помещают в среду Кесслера. Дальнейший ход исследования и идентификации бактерий группы кишечных палочек проводят по общепринятой методике исследования смывов.

б) Определение наличия патогенных стафилококков.

Смывную жидкость в количестве 3 - 4 капель засевают в 6% солевой бульон. Дальнейший ход исследования и идентификацию проводят по общепринятой методике.

Примечание:

а) При исследовании дистиллированной воды, инъекционных растворов, глазных капель, смывов с аптечного стекла, инвентаря, оборудования и рук персонала иногда отмечается рост синегнойных палочек, для выделения которых специальные посевы можно не производить, так как рост колоний удается обнаружить на среде Эндо и питательном агаре. На среде Эндо колонии плоские, желто-красные, без металлического блеска, со специфическим запахом. На питательном агаре колонии широкие, расплывчатые, с просвечивающим краем, неправильные, среда приобретает зеленоватый цвет. При окраске мазков по Граму - они грамотрицательны.

Одним из важных диагностических признаков синегнойной палочки является пигментообразование. С целью обнаружения способности продуцировать пигмент культуры нанесением на питательный агар с 2 - 5% глицерина или маннита.

Для выявления гемолитической способности синегнойной палочки высевы на чашки с кровяным агаром. Колонии дают четкую зону гемолиза, что позволяет их дифференцировать от других флуоресцирующих бактерий рода.

б) При исследовании дистиллированной воды и лекарственных форм необходимо обращать внимание на возможность выявления бактерий рода Proteus. Специального посева для этого можно не проводить, т.к. их удается обнаружить на среде Эндо в виде ползучего вуалеобразного роста.

Выписка

Приложение N 1

к Приказу

по Министерству

здравоохранения СССР

от 30 ноября 1962 г. N 573

ВРЕМЕННЫЕ НОРМАТИВЫ

ПРЕДЕЛЬНО ДОПУСТИМОГО СОДЕРЖАНИЯ НЕПАТОГЕННЫХ

МИКРООРГАНИЗМОВ В ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ АПТЕК

┌────┬─────────────────────────────────────────┬──────────┬───────────────┐

│ N  │               Наименование              │Предельно │   Примечание  │

│п/п │                                         │допустимое│               │

│    │                                         │содержание│               │

│    │                                         │микроорга-│               │

│    │                                         │низмов    │               │

│    │                                         │в 1 мл    │               │

├────┼─────────────────────────────────────────┼──────────┼───────────────┤

│ 1  │                    2                    │    3     │       4       │

├────┼─────────────────────────────────────────┼──────────┼───────────────┤

│I.  │Раствор для инъекций до стерилизации, не │          │               │

│    │позднее 1 - 1,5 часов после изготовления:│          │               │

│    │1) глюкозы 5% и 40%                      │20 - 30   │               │

│    │2) натрия хлорида 0,9%                   │          │               │

│    │3) новокаина 0,25% и 2%                  │          │               │

│    │4) натрия хлорида 5,0                    │          │               │

│    │5) калия хлорида 0,07                    │          │               │

│    │   кальция хлорида 0,12                  │В виде    │               │

│    │                                         │исключения│               │

│    │   новокаина 2,5                         │До 50     │               │

│    │   воды для инъекций по 1000,0           │          │               │

│    │6) Рингера-Локка                         │          │               │

│    │7) сергозина 40%                         │          │               │

│II. │Глазные капли:                           │          │               │

│    │1) раствор сульфацила растворимого       │          │               │

│    │2) альбуцид 20% и 30%                    │          │               │

│    │3) раствор атропина сульфата 1%          │          │               │

│    │4) раствор дикаина 1%                    │          │               │

│    │5) раствор этилморфина гидрохлорида      │5 - 7     │               │

│    │(дионина) 1%                             │          │               │

│    │6) раствор синтомицина 0,25              │          │               │

│    │7) раствор цинка сульфата 0,25%          │          │               │

│    │8) раствор борной кислоты 2% - 10,0      │          │               │

│    │9) раствор цинка сульфата 0,25 - 10,0    │          │               │

│    │10) раствор пилокарпина гидрохлорида 1%  │10 - 15   │               │

│    │    глюкозы 0,2                          │-"-       │               │

│    │    воды дистиллированной 10,0           │-"-       │               │

│    │11) раствор рибофлобина 0,002            │-"-       │               │

│    │    калия йодида 0,3                     │-"-       │               │

│    │    аскорбиновой кислоты 0,05            │-"-       │               │

│    │    воды дистиллированной 10,0           │-"-       │               │

│III.│Дистиллированная вода:                   │          │               │

│    │1) используемая для приготовления        │10 - 15   │При получении и│

│    │стерильных растворов сразу же после      │          │хранении дис-  │

│    │перегонки                                │          │тиллированной  │

│    │2) используемая после стерилизации для   │0 - 3     │воды в условиях│

│    │изготовления асептическим способом       │          │максимально    │

│    │глазных капель и концентрированных       │          │ограничивающих │

│    │растворов (концентратов)                 │          │возможность    │

│    │                                         │          │загрязнения ее │

│    │                                         │          │микробами (см. │

│    │                                         │          │приложение N 3 │

│    │                                         │          │к настоящему   │

│    │                                         │          │Приказу)       │

└────┴─────────────────────────────────────────┴──────────┴───────────────┘

Примечание: Содержание кишечной палочки и протея в дистиллированной воде и лекарственных формах не допускается.

В соответствии с методическим документом Минздрава СССР решений от 29.03.1966 за N 622-66 "Нормы работы бактериологических лабораторий учреждений здравоохранения", проведение исследований лекарственных форм и материалов из аптек следует расценивать в следующих нормативных единицах:

1. Исследование дистиллированной воды из трубопровода:

а) определение общей бактериальной обсемененности - 0,6 лаб. ед.;

б) определение титра бактерий группы кишечных палочек - 1,5 лаб. ед.;

в) определение количества плесневых грибов - 0,6 лаб. ед.

Для выполнения 100 проб - 270 лаб. единиц.

2. Исследование глазных капель, инъекционных растворов и дистиллированной воды для их приготовления:

а) определение общей бактериальной обсемененности - 0,6 лаб. ед.;

б) определение наличия бактерий группы кишечных палочек - 0,5 лаб. ед.;

в) определение количества плесневых грибов - 0,6 лаб. ед.

Для выполнения 100 проб - 170 лаб. единиц.

3. Исследование сухих лекарственных веществ, используемых для изготовления инъекционных растворов и глазных капель:

а) подготовка к анализу - 2,9 лаб. ед.;

б) определение общей бактериальной обсемененности - 0,6 лаб. ед.;

в) определение наличия бактерий группы кишечных палочек - 0,5 лаб. ед.;

г) определение количества плесневых грибов - 0,6 лаб. ед.

Для выполнения 100 проб - 460 лаб. единиц.

4. Исследование аптечной посуды, пробок, прокладок:

а) подготовка к анализу - 0,6 лаб. ед.;

б) определение общ. бактериальной обсемененности - 0,6 лаб. ед.;

в) определение наличия бактерий группы кишечных палочек - 0,5 лаб. ед.

Для выполнения 100 проб - 170 лаб. единиц.

5. Исследование смывов:

Определение бактерий кишечных палочек - 0,5 лаб. ед.

Для выполнения 100 проб - 50 лаб. единиц.