Утверждено

заместителем Главного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

31 июля 1973 года

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СЕВИНА

В ПЛОДОВО-ЯГОДНЫХ КУЛЬТУРАХ И КОНСЕРВАХ

(МЕТОДИЧЕСКОЕ УКАЗАНИЕ)

Севин (1-нафтил-N-метилкарбамат) обладает широким диапазоном инсектицидного действия. Рекомендуется для опрыскивания садов в очагах массового размножения плодожорки, а также для борьбы с вредителями хлопчатника и кукурузы. Норма расхода 85-процентного смачивающегося порошка севина 1 - 2,5 кг/га.

Краткие сведения о физико-химических свойствах препарата

Химически чистый севин - кристаллическое вещество белого цвета, без специфического запаха, имеющее температуру плавления 142 °C, давление паров менее 0,005 мм рт. ст. при 26 °C. Севин слаборастворим в воде (менее 0,1%), несколько лучше в углеводородах и спиртах, умеренно (до 40%) в органических растворителях (ацетоне, циклогексаноле), хорошо - в полярных растворителях, таких как диметилформамид и диметилсульфоксид. Устойчив к воздействию ультрафиолетового излучения. В щелочной среде севин быстро гидролизуется, образуя 1-нафтол, метиламин и соответствующий карбонат.

Принцип метода

Севин извлекают из растительных пищевых продуктов хлороформом. Освобождение от примесей осуществляют в метаноловом растворе добавлением водного раствора хлористого аммония с последующим фильтрованием через бумажный фильтр и хроматографированием через слой окиси алюминия.

Выделенный севин гидролизуют едким кали, и образующийся 1-нафтол сочетают с хлористым п-нитрофенилдиазонием, в результате чего образуется азосоединение - в кислой среде оранжевого, в щелочной - синего цвета.

Чувствительность определения в щелочной среде 0,05 мг, в кислой - 0,1 мг/кг. Точность метода +/- 5 - 10%.

Реактивы и растворы

Хлороформ, х.ч.

Метанол, х.ч.

Аммоний хлористый, х.ч. 2-процентный водный раствор.

Уксусная кислота ледяная, х.ч.

Смесь метанола и 2-процентного водного раствора хлористого аммония (1:1).

Алюминия окись для хроматографирования П активности.

Натрий сернокислый безводный, х.ч.

Калий едкий 0,1 н. растворов в метаноле.

Натрия нитрит, х.ч., 0,8-процентный водный раствор.

п-Нитроанилин.

п-Нитрофенил хлористый, свежеприготовленный. К 0,02-процентному раствору п-нитроанилина в 0,1 г соляной кислоте доливают в 10 раз меньшее количество 0,8-процентного водного раствора нитрита натрия. Раствор готовят в колбе, погруженной в ледяную воду.

Стандартный раствор севина: 10 мг севина, х.ч., растворяют в 100 мл хлороформа. 10 мл этого раствора переносят в мерную колбу емкостью 100 мл и доводят до метки хлороформом. 1 мл раствора содержит 10 мкг севина.

Химически чистый севин можно получить путем перекристаллизации технического. Для этого последний растворяют в горячем этиловом спирте (растворимость препарата около 40%), фильтруют через бумажный фильтр, используя воронку для горячего фильтрования, фильтрат охлаждают до 0°. Выпавшие кристаллы отделяют от маточного раствора, промывают холодным спиртом и сушат. В случае необходимости перекристаллизацию можно повторить.

Приборы и посуда

Фотоэлектроколориметр.

Устройство для отгона растворителей.

Установка для хроматографирования, состоящая из колонки (стеклянная трубка, зауженная книзу, 17 х 400 мм) и колбы Бунзена. В колонку помещают ватный тампон, затем слой окиси алюминия 5 - 7 см и затем слой безводного сульфата натрия 1,5 - 2 см. Подготовленную колонку промывают хлороформом (10 - 15 мл).

Центрифуга.

Аппарат для встряхивания.

Воронки делительные емкостью 150 - 250 мл.

Колбы конические емкостью 50, 100 и 250 мл.

Цилиндры мерные на 25, 50, 250 и 500 мл.

Пипетки на 1, 5 и 10 мл.

Сосуды для экстракции емкостью 1,5 - 2 л.

Ход анализа

Пробку исследуемого растительного продукта весом 1 - 1,5 кг измельчают, тщательно перемешивают и навеску в 200 г (для 2-х параллельных анализов) заливают хлороформом и оставляют на 16 - 18 часов. Полученный экстракт фильтруют через бумажный фильтр, измеряют объем фильтра и часть его, соответствующую 100 г пробы, помещают в колбу и отгоняют хлороформ. Последние порции растворителя отгоняют без нагревания.

Для растворения сухого остатка в колбу приливают 10 мл метанола, осторожно потирая дно стеклянной палочкой. Затем добавляют 10 мл 2-процентного раствора хлористого аммония и помещают колбу в холодильник (лучше в замораживатель) на 20 - 30 минут.

В результате добавления водного раствора хлористого аммония растворимость восков и пигментов в метаноле резко уменьшается и они выделяются в виде хлопьев. После охлаждения содержимое колбы фильтруют через бумажный мелкопористый фильтр. Фильтрование лучше проводить с помощью водоструйного насоса. Для этого стеклянную воронку с пробкой и плотно прилегающим фильтром (лучше двойным) вставляют в пробирку с отводом, которую подключают к водоструйному насосу.

Содержимое колбы количественно переносят на воронку, ополаскивая колбу дважды по 3 - 5 мл охлажденной смесью метанола и 2-процентного раствора хлористого аммония (1:1). Фильтрат из пробирки переносят в делительную воронку и экстрагируют севин хлороформом, энергично встряхивая первый раз с 25 мл, второй - с 15 мл. Хлороформный экстракт хроматографируют через колонку, заполненную окисью алюминия и б/в сульфатом натрия, предварительно промытую хлороформом. Сначала пропускают первую порцию экстракта - 25 мл, затем вторую - 15 мл и промывают колонку 15 мл хлороформа. Полученный фильтрат количественно переносят в колбу и отгоняют хлороформ досуха.

К сухому остатку прибавляют 5 мл 0,1 н. метанолового раствора едкого кали и, помешивая стеклянной палочкой, оставляют на 5 мин.

Полученный в результате гидролиза севина 1-нафтол может быть определен двумя способами: а) в щелочной и б) в кислой среде.

При определении 1-нафтола в щелочной среде в колбу, где протекал гидролиз севина, добавляют 1 мл солянокислого раствора п-нитрофенилдиазония, приготовленного перед употреблением, как указано в разделе "Реактивы и растворы". При взаимодействии в щелочной среде 1-нафтола и хлористого п-нитрофенилдиазония образуется азосоединение синего цвета. В колбочку доливают еще 5 мл метанола и помещают ее в холодильник на 30 мин. Затем раствор фильтруют через бумажный фильтр и колориметрируют при оранжевом светофильтре и длине волны 590 ммк в кювете с расстоянием между гранями 1 см.

В случае, если конечная окраска искажена до фиолетовой или красной, определение рекомендуется проводить в кислой среде. Для этого в колбу, где протекал щелочной гидролиз севина, приливают 14 мл ледяной уксусной кислоты и 1 мл свежеприготовленного солянокислого раствора п-нитрофенилдиазония. В кислой среде образуется азосоединение оранжевого цвета. Полученный раствор оставляют на 30 мин. при комнатной температуре, затем фильтруют через бумажный фильтр и колориметрируют при зеленом светофильтре и длине волны 475 ммк в кювете с расстоянием между гранями 2 см.

В качестве холостой пробы при колориметрировании в обоих случаях используется дистиллированная вода.

Определение севина в фруктово-ягодных компотах и маринадах

100 г исследуемой пробы (учитывать соотношение сиропа и ягод) после измельчения и тщательного перемешивания количественно переносят в колбу с притертой пробкой и заливают хлороформом с таким расчетом, чтобы покрыть навеску. Экстрагируют севин путем встряхивания в течение 30 мин. В случае образования стойкой эмульсии для разделения слоев следует воспользоваться центрифугой. Центрифугирование проводят в течение 30 мин. со скоростью 2500 об./мин. После центрифугирования удаляют верхний слой (сироп и ягоды) с помощью пипетки Мора и резиновой груши, а нижний - хлороформный - сушат с помощью безводного сульфата натрия. Высушенный экстракт помещают в колбу для отгона растворителей и удаляют хлороформ. Дальнейший ход анализа аналогичен определению содержания севина в сырых ягодах и фруктах.

Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в колбы вносят последовательно 0,5; 1,0; 2,5; 5,0; 7,5 и 10 мл стандартного раствора, содержащего 10 мкг севина в мл. Растворитель осторожно удаляют и далее поступают, как описано для определения севина в растительной пробе, начиная с гидролиза пестицида.

Содержание севина в мг/кг продукта вычисляют по следующей формуле:

                                      С

                                  Х = -,

                                      Р

где:

Х - количество севина в продукте, мг/кг;

С - количество севина, найденное по калибровочному графику, мкг;

Р - навеска исследуемого продукта, г.

Таблица

ПРОЦЕНТ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕВИНА В ЯБЛОКАХ (НАВЕСКА 100 Г)

┌────────────────────────────────┬─────────────────────────────────┐

│       В щелочной среде         │         В кислой среде          │

├────────┬─────────┬─────────────┼─────────┬─────────┬─────────────┤

│количес-│количес- │% определения│количес- │количес- │% определения│

│тво вне-│тво обна-│             │тво вне- │тво обна-│             │

│сенного │руженного│             │сенного  │руженного│             │

│севина  │севина   │             │севина   │севина   │             │

├────────┴─────────┤             ├─────────┴─────────┤             │

│      в мкг       │             │       в мкг       │             │

├────────┬─────────┼─────────────┼─────────┬─────────┼─────────────┤

│5       │5        │100          │20       │19       │94           │

│5       │5        │100          │20       │20       │100          │

│10      │9        │90           │20       │21       │105          │

│10      │10       │100          │40       │40       │100          │

│20      │18       │92           │40       │40       │100          │

│20      │19       │95           │80       │80       │100          │

│40      │38       │95           │80       │82       │102          │

│40      │40       │100          │100      │100      │100          │

│50      │47       │94           │100      │97       │97           │

│50      │46       │92           │         │         │             │

└────────┴─────────┴─────────────┴─────────┴─────────┴─────────────┘

Метод может быть использован для определения остаточного содержания севина в землянике, черной смородине, крыжовнике, сливах, яблоках, а также компотах и маринадах из плодов перечисленных культур.

Подготовлено в Институте питания АМН СССР.