Утверждены

Министерством здравоохранения СССР

29 июля 1991 г. N 6181-91

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЦИПРОКОНАЗОЛА (АЛЬТО) В ВОДЕ, ПОЧВЕ,

РАСТЕНИЯХ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Ципроконазол (альто) - 2-(4-хлорфенил)-3-циклопропил-1(1H-1,2,4,-триазол-1-ил)бутан.

                  OH

         ---      │                           C  H  N O.

    Cl-//   \\ ---C----CH -N--N                15 18 3

       \ ___ /    │      2 /  \\

         ---      CH       \\N /              М.м. 291,78.

                 /  \

                CH   CH

                  3  / \

                    CH -CH

                      2   2

Растворим в хлороформе, ацетоне, метаноле, хлористом метилене.

МДУ в зерновых (пшеница, ячмень) - 0,05 мг/кг.

ПДК в почве - 0,2 мг/кг, ПДК в воде водоемов - 0,03 мг/л.

2. Методика определения ципроконазола (альто)

хроматографическими методами в воде, почве, растениях

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на определении ципроконазола (альто) методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии после извлечения из анализируемой пробы органическими растворителями (хлороформ, смеси ацетон - вода, метанол - вода).

2.1.2. Метрологическая характеристика

    Диапазон определяемых концентраций    0,005 - 0,5 мг/кг (мг/л)

    Предел обнаружения                    ТСХ - 2 мкг

┌─────────────┬──────────────┬───────────┬──────────────┬────────────────────┐

│Анализируемый│   Среднее    │Стандартное│Относительное │   Доверительный    │

│    объект   │   значение   │отклонение │ стандартное  │интервал среднего, %│

│             │определения, %│   S, %    │отклонение Sr,│  P = 0,95, n = 5   │

│             │              │           │      %       │                    │

├─────────────┴──────────────┴───────────┴──────────────┴────────────────────┤

│                                    ГЖХ                                     │

│                                                                            │

│Вода         │90,1          │3,5        │3,9           │+/- 4,2             │

│Почва        │83,7          │3,6        │5,2           │+/- 6,0             │

│Растения     │78,2          │3,3        │4,3           │+/- 5,0             │

│                                                                            │

│                                    ТСХ                                     │

│                                                                            │

│Вода         │85,0          │4,73       │5,0           │+/- 5,8             │

│Почва        │80,0          │6,36       │7,5           │+/- 9,2             │

│Растения     │75,0          │7,5        │9,3           │+/- 12,4            │

└─────────────┴──────────────┴───────────┴──────────────┴────────────────────┘

2.1.3. Избирательность метода

Метод избирателен в присутствии фосфорорганических, хлорорганических пестицидов. Определению могут мешать препараты из группы замещенных триазолов.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, хч, ГОСТ 2603-79.

Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.

Метиловый спирт, чда, ГОСТ 6995-77.

Натрий сульфат безводный, чда, ГОСТ 4166-76.

Хлороформ, чда, ГОСТ 20015-74.

Фильтры "синяя лента".

Стандартный раствор в ацетоне концентрации 100 мкг/мл. Готовят растворением 10 мг препарата в 100 мл ацетона. Срок хранения до 3-х месяцев. Для ГЖХ готовят стандартные растворы последовательным разведением исходного раствора. Срок хранения до 5 дней.

К методу ГЖХ

Носитель для колонки - Хроматон N-AW с 5% SE-30.

К методу ТСХ

Серебро азотнокислое, чда, ГОСТ 1277-81.

Пластинки "Силуфол" (ЧССР).

Бромфеноловый синий, чда, ТУ 6-09-1058-76.

Проявляющий реактив - раствор бромфенолового синего. 0,05 г бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона, доводят до 100 мл 0,5% водно-ацетоновым (1 часть воды + 3 части ацетона) раствором азотнокислого серебра.

2.3. Приборы и посуда

Ротационный испаритель с набором колб (типа ИР-1), ТУ 26-11-917-77.

Водяная баня, ТУ 64-1-2850-76.

Посуда стеклянная лабораторная по ГОСТ 1770-74, ГОСТ 25336-82.

К методу ГЖХ

Хроматограф с термоионным детектором (типа "Цвет", "Кристалл-2000" или другой).

Колонка стеклянная, длина 1 м, диаметр 3 мм.

Микрошприц на 10 мкл МШ-10.

К методу ТСХ

Камера хроматографическая, ГОСТ 25336-82.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.

2.4. Отбор, хранение и доставка проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукций, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения остаточных количеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР 21.08.1979, N 2051-79.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов

Вода. Пробу (500 мл) воды помещают в делительную воронку на 1 л, добавляют 10 г хлорида натрия, перемешивают и экстрагируют ципроконазол трижды по 50 мл хлороформа, предварительно насыщенного водой. Объединенные хлороформные экстракты сушат безводным сульфатом натрия, упаривают до объема ~ 0,2 - 0,3 мл. Досуха удаляют растворитель на воздухе. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, 3 - 5 мкл вводят в хроматограф.

Растительный материал. 50 г измельченной пробы помещают в коническую колбу, заливают 200 мл смеси метанол - вода 7:3 (ацетон - вода 7:3). Встряхивают 1 часть. Экстракцию повторяют дважды. Объединяют фильтрат, переносят в делительную воронку, прибавляют 10 г хлорида натрия, перемешивают. Препарат из водного раствора реэкстрагируют трижды по 50 мл хлороформа. Объединяют хлороформный экстракт, сушат безводным сульфатом натрия и упаривают растворитель. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и 3 - 5 мкл вводят в хроматограф.

Если экстракт содержит большое количество коэкстрактивных веществ, сухой остаток в колбе растворяют в 10 мл ацетона и помещают колбу в морозильную камеру. Через 2 - 3 часа после выпадания осадка раствор фильтруют через бумажный фильтр "красная лента", смывая стенки колбы и фильтр холодным ацетоном. Фильтрат упаривают и далее проводят определение хроматографическими методами.

Почва. 50 г почвы помещают в коническую колбу, смачивают 10 - 15 мл дистиллированной воды, затем приливают 100 - 150 мл смеси метанол - вода (7:3) (ацетон - вода 7:3) и далее проводят анализ так, как описано выше для растительного материала.

Определение методом ГЖХ

Хроматограф с термоионным детектором.

Колонка длиной 1 м, диаметр 3 мм.

Носитель - Хроматон N-AW с 5% SE-30.

Температура колонки - 210 °C.

Температура испарителя - 230 °C.

Расходы газов: азот - 30 - 32, водород 11 - 13, воздух - 100 - 150 мл/мин.

                                        -10

    Рабочая шкала электрометра - 32 x 10   .

Объем вводимой пробы - 3 мкл.

Время удерживания - 1 пик - 2,8 мин.; 2 пик - 5 - 6 мин.

Количественный расчет ведут методом соотношения со стандартом.

Концентрацию ципроконазола в пробе определяют по формуле (по сумме двух пиков):

                        C x h   x V   x V

                             пр    ст    общ

                    X = --------------------,

                           h   x V   x P

                            ст    пр

    где:

    X - содержание ципроконазола в пробе, мг/кг (мг/л);

    C - концентрация ципроконазола в стандартном растворе, мкг/мл;

    h   - высота пика пробы, мм;

     пр

    h   - высота пика стандартного раствора, мм;

     ст

    V   - объем пробы, введенный в хроматограф, мкл;

     пр

    V   - объем  стандартного  раствора,  введенный в хроматограф,

     ст

мкл;

    V    - общий объем пробы, мл;

     общ

    P - навеска пробы, (г, мл).

Определение методом ТСХ

Пробу после упаривания количественно наносят при помощи капиллярной пипетки на хроматографическую пластину так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Центр пятна должен быть на расстоянии 2 см от нижнего края пластинки. Колбу с экстрактом 2 - 3 раза смывают небольшими порциями ацетона, который также наносят в центр пятна. Справа и слева от пробы наносят серию стандартов, содержащих 2, 5, 7 и 10 мкг препарата. Пластинку с нанесенными растворами помещают в хроматографическую камеру, в которую за 30 минут до хроматографирования залита смесь хлороформ - ацетон 9:1. После поднятия фронта подвижной фазы на 10 см пластинку вынимают и оставляют на несколько минут для испарения растворителя. После этого пластинку обрабатывают из пульверизатора раствором бромфенолового синего.

    После  высушивания  пластинку  обрабатывают  для удаления фона

растворителя  2-процентным  раствором лимонной (уксусной) кислоты.

Альто проявляется в виде пятен (2 изомера) ярко-голубого  цвета на

                              1          2

светло-желтом фоне. Величина R  - 0,45, R  - 0,60.

                              f          f

Количественное определение пестицида проводят путем сравнения интенсивности (по сумме) окраски и площадей пятен пробы и стандартного раствора. Прямолинейная зависимость между площадью пятна и содержанием препарата соблюдается в интервале 1 - 10 мкг. Если содержание препарата в пробе превышает верхнюю границу диапазона 10 мкг, то для нанесения на пластинку необходимо брать аликвотную часть экстракта (0,1 - 0,2 мл) параллельной пробы.

Концентрацию препарата в пробе вычисляют по формуле:

                                  A

                              X = -,

                                  P

где:

X - содержание препарата в пробе, мг/кг (мг/л);

A - количество препарата, найденное в анализируемой пробе, мкг;

P - навеска пробы (г, мл).

3. Требования безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами.