Утверждены

Министерством здравоохранения СССР

29 июля 1991 г. N 6176-91

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ФЕНОКСИКАРБА (ИНСЕГАРА) В РАСТИТЕЛЬНОМ

МАТЕРИАЛЕ, ВОДЕ И ПОЧВЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Инсегар - этил-2-(4-феноксифенокси)этилкарбамат.

      /\\         /\\

     /  \\---O---/  \\

    ││   │      ││   │                              C  H  NO .

    ││   │      ││   │                               17 19  4

     \  //       \  //---OCH CH NHCOOCH CH .

      \//         \//       2  2       2  3         М.м. 301,3.

Феноксикарб (инсегар) - кристаллическое вещество, пл. Т. пл. 53 - 54 °C. Растворим в большинстве органических растворителей, в гексане 5 г/л, в воде при 20 °C 6 ppm. Не гидролизуется в водном растворе при pH 3,7 и 9 при 35 °C.

                                          -5             -7

    Давление  пара  при  25  °C - 1,7 x 10   Pa (1,3 x 10   мм рт.

ст.).

2. Методика определения феноксикарба в растительном

материале, воде и почве методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении феноксикарба из исследуемого объекта ацетоном или хлороформом и последующем определении методом реакционной газожидкостной хроматографии в виде ацильного производного.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Нижний предел определения ГЖХ - 0,1 нг, ТСХ - 0,3 мкг.

┌────────────┬───────────────┬───────────┬─────────────┬──────────────────┐

│Исследуемый │    Предел     │  Среднее  │ Стандартное │Доверит-й интервал│

│   объект   │  обнаружения, │ значение  │отклонение, %│    сред-го, %    │

│            │     мг/кг     │ определ-я │             │                  │

├────────────┼───────┬───────┼───────────┼─────────────┼──────────────────┤

│            │  ГЖХ  │  ТСХ  │           │             │                  │

├────────────┼───────┼───────┼───────────┼─────────────┼──────────────────┤

│Растительный│0,005  │0,01   │89,2       │4,5          │+/- 4,49          │

│материал    │       │       │           │             │                  │

│Почва       │0,001  │0,006  │90,3       │4,99         │+/- 4,95          │

│Вода        │0,001  │0,001  │90,5       │4,5          │+/- 7,51          │

└────────────┴───────┴───────┴───────────┴─────────────┴──────────────────┘

2.1.3. Условия концентрации, очистки и последующего газохроматографического определения феноксикарба позволяют избирательно определять препарат в присутствии ФОС, пиретроидов.

2.2. Реактивы и материалы

Ацетон, осч, ТУ 3513-86.

Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.

Бензол, хч, ГОСТ 5955-81.

Трифторуксусный ангидрид, ТУ 6-09-4135-75.

Пиридин, ч, ГОСТ 13647-78.

Сульфат натрия, безводный, ч, ГОСТ 4166-76.

Азот в баллоне, особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Неподвижная фаза 5% SE-30 на хроматоне N-AW-DMCS.

о-Толидин, ТУ 6-09-2232-75, 1-процентный раствор в ацетоне.

Уголь активированный, марки ОУ-"А".

Уксусная кислота, чда, ледяная, ГОСТ 61-75.

Калий марганцевокислый, чда, ГОСТ 20490-75.

Кислота соляная, хч, ГОСТ 4232-74.

Проявляющий реактив: 1% раствор о-толидина в ацетоне.

Основной стандартный раствор (ОСР) феноксикарба с концентрацией 100 мкг/мл готовят взятием навески 10 мг (0,0100 г) хч и растворением в ацетоне в мерной колбе емкостью 100 мл. Хранить в холодильнике в течение 2-х месяцев.

Рабочие стандартные растворы с содержанием 10 мкг/мл, 1 мкг/мл, 0,5 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением ОСР ацетоном.

Хранить в холодильнике в течение 2-х месяцев.

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Газовый хроматограф серии "Цвет" с ДПР.

Колонки стеклянные длиной 1 м, диаметр 3,5 мм.

Ротационный испаритель типа ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Колбы грушевидные, ГОСТ 25336-82, емкостью 500, 250, 100, 50 мл.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, емкостью 50, 100 мл.

Пробирки мерные на шлифах, ГОСТ 1770-74, вместимостью 5 и 10 мл.

Аппарат для встряхивания, ТУ 25-11-917-79.

Колба Бунзена, ГОСТ 25336-82.

Воронка Бюхнера, ГОСТ 9147-80.

Делительная воронка, ГОСТ 25336-82, емкостью 500 мл.

Колбы конические, ГОСТ 25336-82, емкостью 500 мл.

Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1; 0,2; 1; 5; 10 мл.

Микрошприц на 10 мкл МШ-10, ТУ SE-2833.024.

Секундомер СД Спр. 1.2000, ГОСТ 5072-79.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Отбор проб

Отбор, хранение и доставка проб производятся в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР, N 2057-79 от 21.08.79.

2.4.2. Подготовка колонки для ГЖХ

Колонку заполняют стандартной фазой (5% SE-30 на хроматоне N-AW-DMCS), подключив ее к вакууму водоструйного насоса. Заполненную колонку кондиционируют в термостате колонок в течение 6 часов без подключения к детектору, продувая азотом (~= 60 мл/мин.) и постепенно поднимая температуру от 100 °C до 250 °C. Затем колонку присоединяют к детектору.

2.4.3. Приготовление камеры для хроматографирования

    На  дно  эксикатора  помещают  чашку  Петри  с 3 - 5 г KMnO  и

                                                               4

добавляют  туда 8  - 10 мл концентрированной HCl. Через 3 - 4 мин.

камера готова для проведения хлорирования.

2.5. Описание определения

2.5.1. Экстракция, очистка и получение ацильного производного феноксикарба

Почва. I. 50 г анализируемой пробы помещают в плоскодонную колбу емкостью 500 мл, заливают 100 мл ацетона и 5 - 10 мл воды. Смесь перемешивают на аппарате для встряхивания в течение 1 час., фильтруют на воронке Бюхнера с фильтром "синяя лента". Фильтрат сушат безводным сульфатом натрия и упаривают в вакууме водоструйного насоса досуха. К сухому остатку прибавляют 2 мл смеси ацетон:бензол (3:1) и 0,1 г угля марки ОУ-"А", встряхивают в течение 3 - 5 мин. Фильтрат упаривают в вакууме водоструйного насоса при температуре водяной бани 50 °C досуха. К сухому остатку прибавляют 100 мкл трифторуксусного ангидрида, 20 мкл пиридина. Выдерживают реакционную смесь в течение ~ 40 мин., затем к ней прибавляют 1 мл бензола и 5 мл дистиллированной воды, встряхивают в течение ~ 2-х мин. После разделения фаз проводят хроматографический анализ бензольного верхнего слоя.

II. 50 г анализируемой пробы помещают в плоскодонную колбу емкостью 500 мл, заливают 100 мл хлороформа и 15 - 20 мл воды. Смесь перемешивают на аппарате для встряхивания в течение ~ 1 час., после чего фильтруют на воронке Бюхнера. Фильтрат разделяют в делительной воронке. Нижний слой хлороформа сушат безводным сульфатом натрия и упаривают в вакууме водоструйного насоса досуха при температуре бани 60 °C. Дальше - как I вариант.

Растительный материал. Вариант I. 25 г измельченных плодов помещают в плоскодонную колбу емкостью 500 мл, заливают 100 мл ацетона и 10 мл воды. Смесь перемешивают на аппарате для встряхивания в течение 1 часа, затем фильтруют на воронке Бюхнера с бумажным фильтром "синяя лента". Фильтрат сушат безводным сульфатом натрия и затем упаривают в вакууме водоструйного насоса досуха. К сухому остатку прибавляют 2 мл смеси ацетон - бензол (3:1) и 0,1 г активированного угля марки ОУ-"А", встряхивают в течение 3 - 5 мин. Фильтруют через бумажный фильтр, тщательно промывая 30 мл смеси ацетон - бензол (3:1). Фильтрат упаривают в вакууме водоструйного насоса при температуре водяной бани 50 °C досуха. К сухому остатку прибавляют 100 мкл трифторуксусного ангидрида, 20 мкл пиридина сухого. Реакционную смесь выдерживают в течение ~ 40 мин., затем к ней прибавляют 1 мл бензола и 5 мл дистиллированной воды, встряхивают в течение 2-х минут. После разделения фаз проводят хроматографический анализ бензольного верхнего слоя.

II вариант - аналогично подготовке анализируемого образца почвы.

Вода. 200 мл анализируемой пробы воды помещают в плоскодонную колбу емкостью 500 мл, заливают 100 мл хлороформа. Смесь перемешивают на аппарате для встряхивания в течение ~ 1 часа, затем отделяют в делительной воронке нижний слой хлороформа. Его сушат безводным сульфатом натрия и упаривают в вакууме водоструйного насоса досуха при температуре бани 60 °C. К сухому остатку прибавляют 100 мкл трифторуксусного ангидрида, 20 мкл пиридина. Реакционную смесь выдерживают в течение ~ 40 минут, затем к ней прибавляют 10 мл бензола и 5 мл дистиллированной воды, встряхивают в течение ~ 2-х мин. После разделения фаз проводят хроматографический анализ верхнего бензольного слоя.

2.5.2. Хроматографический анализ

Газовый хроматограф серии "Цвет" с ДПР.

Колонка хроматографическая стеклянная 1 м с внутренним диаметром 3,5 мм. Неподвижная фаза 5% SE-30 на хроматоне N-AW-DMCS.

Температура колонки - 220 °C.

Температура испарителя - 250 °C.

Температура детектора - 270 °C.

Газ-носитель - азот с расходом 65 - 70 мл/мин.

Вводимый объем - 3 мкл.

                             12

    Шкала множителя - 20 x 10  .

Скорость диаграммной ленты - 600 мм/час.

Время удерживания - 2,20 мин.

Количественную оценку проводят методом соотношения со стандартом феноксикарба, из которого получено ацильное производное, по схеме, указанной для рабочих проб.

Расчет результатов анализа проводят по формуле:

                          C x H  x V  x V

                               2    1    3

                      X = ----------------,

                            H  x V  x P

                             1    2

    где:

    X  -  содержание  феноксикарба  в  анализируемой пробе, мг/кг,

мг/л;

    C  -  концентрация  стандартного раствора для ГЖХ, вводимого в

хроматограф, мкг/мл;

    H  - высота пика стандартного раствора, мм;

     1

    H  - высота пика пробы, мм;

     2

    V  - объем анализируемого экстракта пробы, мл;

     1

    V   - объем стандартного ацилированного раствора, введенного в

     2

хроматограф, мкл;

    V  - объем ацилированной пробы, введенный в хроматограф, мкл;

     3

    P - навеска анализируемой пробы, г.

    2.5.3. Метод тонкослойной хроматографии

    Пробу, сконцентрированную до 0,5 мл,  количественно  переносят

на пластинку "Силуфол".  Параллельно   наносят  серию  стандартных

растворов  с  содержанием  0,3; 0,5; 1,0 мкг действующего вещества

феноксикарба.    Хроматографируют    в    системе    растворителей

гексан:атилацетат:уксусная  кислота  (66:35:1).  После высушивания

пластинку  помещают  на 1 - 2 с в камеру с хлором. Затем пластинку

вынимают  из  камеры и оставляют на воздухе до исчезновения запаха

хлора. После обработки пластинки 1-процентным раствором о-толидина

в ацетоне феноксикарб проявляется  в  виде  голубых пятен на белом

фоне,  при нагревании пластинки в сушильном шкафу при 60 - 80 °C в

течение  20  мин. цвет пятен изменяется. Феноксикарб проявляется в

виде коричневых пятен на горчичном фоне. R  = 0,42 +/- 0,04.

                                          f

    Содержание инсегара в исследуемой пробе вычисляют по формуле:

                           A

                       X = - мг/кг (мг/л),

                           P

где:

A - количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;

P - навеска пробы в мл.

3. Техника безопасности

Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях, а также Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемиологического режима и личной гигиены при работе в лабораториях, отделениях, отделах санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР, N 2455-81 от 20.10.81.