Утверждены

Министерством здравоохранения СССР

29 июля 1991 г. N 6161-91

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ 2-АМИНО-4-ДИМЕТИЛАМИНО-6-ХЛОР-1,3,5-ТРИАЗИНА

В ВОДЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов в продуктах питания, кормах и объектах окружающей среды.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика вещества

             N

           // \                                       C H N Cl.

    Cl--C //   \ C--NH                                 5 8 5

         │     ││     2

         │     ││                                     М.м. 173,61.

        N \\   / N

           \\ /C

             │

             N

            / \

          H C  CH

           3     3

2-Амино-4-диметиламино-6-хлор-1,3,5-триазин (АДХТ) - метаболит и полупродукт синтеза грамекса. Белое кристаллическое вещество без запаха с Т пл. 210 - 211 °C. Растворимость в воде - 0,049% (25 °C), ацетоне - 1,94%, хлороформе - 0,34%.

ПДК в воде водоемов - 0,02 мг/куб. дм.

2. Методика определения

2-амино-4-диметиламино-6-хлор-1,3,5-триазина в воде

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на экстракции АДХТ из воды хлороформом с последующим определением газожидкостной (ГЖХ) и тонкослойной (ТСХ) хроматографией. Минимально детектируемое количество с помощью пламенно-ионизационного детектора 0,01 мкг, минимально обнаруживаемое количество на тонкослойных хроматограммах 1 мкг. Предел обнаружения АДХТ в воде 0,008 мг/л (ТСХ) и 0,006 мг/л (ГЖХ).

2.1.2. Избирательность метода

Определению АДХТ не мешают другие триазины - полупродукты производства пестицидов - производных сульфанилмочевин.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода приведена в таблице.

Таблица

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон чда, ТУ 6-08-3513-75.

Бензол чда, ГОСТ 5955-75.

Натрий сернокислый б/в, ч, ГОСТ 4106-76.

Этиловый эфир уксусной кислоты чда, ГОСТ 22300-76.

Серебро азотнокислое чда, ГОСТ 1277-75.

Бромфеноловый синий чда, ТУ 6-09-37-9-83.

Лимонная кислота осч, ТУ 6-09-584-75.

Хлороформ хч, ТУ 6-09-4263-76.

Калий иодистый чда, ГОСТ 4232-74.

Крахмал растворимый чда, ГОСТ 10163-76.

Дистиллированная вода, ТУ 6-09-2502-77.

Калий марганцовокислый чда, ГОСТ 20490-75, 3-процентный водный раствор.

Хлористоводородная кислота хч, ГОСТ 18290-72, 12-процентный водный раствор.

Кальций сернокислый чда, ГОСТ 3210-66.

Кальций хлористый ч, ГОСТ 4460-77.

Силикагель КСК N 2, ГОСТ 3956-76, ТУ 6-09-2523-72.

Силикагель ЛС 5/40 для тонкослойной хроматографии с 13% гипса (Хемапол, ЧССР).

Пластинки для тонкослойной хроматографии "Силуфол" (Хемапол, ЧССР).

Гидроксид натрия хч, ГОСТ 4328-77.

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Хроматон N-AW, 0,20 - 0,25 мм, с 5% XE-60.

Хромосорб W-HP, 80/100 меш, с 3% OV-17.

2.3. Приборы и посуда

Газовый хроматограф с пламенно-ионизационным детектором ("Цвет-106" и т.п.).

Мерные колбы на 25 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Аппарат для встряхивания, ТУ 69-1-081-73.

Водяная баня, ТУ 46-22-60375.

Электроплитка, ТУ 92-275-76.

Стеклянные пластинки, 15 х 15 см.

Сито капроновое, 100/120 меш.

Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок.

Камера для обработки пластинок, ТУ 10565-63.

Эксикатор, ГОСТ 6371-73.

Сушильный шкаф, ТУ 69-1-1411-76.

Делительная воронка на 500 мл, ГОСТ 100054-75.

Микрошприц емкостью 10 мкл МШ-10М.

Фарфоровая ступка.

Ротационный испаритель.

Стеклянный водоструйный вакуумный насос, МРТУ 42961-64.

Весы лабораторные ВЛА-200М.

Колбы конические НШ, ГОСТ 1170-74.

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79 за N 2051-79.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Приготовление пластинок с тонким слоем силикагеля для ТСХ

35 г силикагеля КСК, просеянного через сито 100/120 меш, смешивают с 2 г сернокислого кальция и 90 мл дистиллированной воды в фарфоровой ступке или на аппарате для встряхивания в течение 15 минут. Около 10 г сорбционной массы наносят на стеклянную пластинку 15 х 15 см и, покачивая, равномерно распределяют по поверхности. Пластинки сушат на воздухе в горизонтальном положении при комнатной температуре 12 часов и затем активируют в сушильном шкафу при 190 °C в течение 30 минут. Хранят в эксикаторе над слоем хлористого кальция. При использовании для приготовления пластинок силикагеля ЛС 14 г этого силикагеля смешивают с 38 мл дистиллированной воды. На одну пластинку наносят 5 - 7 г сорбционной массы и далее поступают так, как это описано выше.

2.5.2. Приготовление стандартного раствора

Стандартный раствор АДХТ в ацетоне с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 10,0 мг вещества в мерной колбе на 100 мл.

2.5.3. Приготовление проявляющих реактивов для ТСХ

Проявляющий реактив N 1:

раствор N 1 - в мерную колбу на 100 мл помещают 0,4 г бромфенолового синего и доводят до метки дистиллированной водой;

раствор N 2 - в мерную колбу на 100 мл помещают 2 г. азотнокислого серебра и доводят до метки дистиллированной водой;

пластинку обрабатывают смесью (1:1) растворов N 1 и N 2 и затем 4-процентным водным раствором лимонной кислоты.

Проявляющие растворы при хранении в плотно закрытых склянках без доступа света годны для применения в течение месяца.

Проявляющий реактив N 2:

раствор N 1 - в мерную колбу на 25 мл помещают 0,25 г иодистого калия и доводят до метки дистиллированной водой;

раствор N 2 - 0,75 г растворимого крахмала заваривают в 25 мл дистиллированной воды и затем охлаждают;

пластинку обрабатывают смесью (1:1) растворов N 1 и N 2.

Проявляющий реактив готовят перед употреблением.

2.5.4. Построение градуировочного графика для определения АДХТ методом ГЖХ

Для построения градуировочного графика в пробы воды (250 мл) вносят 1,5; 2,5; 5,0 и 7,5 мкг АДХТ в виде раствора в ацетоне и далее осуществляют извлечение АДХТ из проб и хроматографирование так, как описано в п. 2.6.2. Хроматографирование одной пробы проводят дважды, измеряют на хроматограммах высоты пиков АДХТ и строят график зависимости высоты пика АДХТ от его содержания в воде. Полученные данные обрабатывают по методу наименьших квадратов и получают уравнение калибровочного графика в виде:

H = A + B x X,

где:

H - высота пика АДХТ на хроматограмме, мм;

X - содержание АДХТ в воде, мг/л;

A и B - коэффициенты, которые получают при обработке калибровочного графика по методу наименьших квадратов.

2.6. Описание определения

2.6.1. Тонкослойная хроматография

    Пробу  воды  (250 мл) помещают в делительную воронку, доводят pH до 8 с

помощью  1М  водного  раствора  гидроксида  натрия  и  трижды  экстрагируют

хлороформом  (3  x  25  мл).  Объединенный  хлороформный экстракт сушат над

безводным  сульфатом  натрия  (5  -  10  г)  в  течение  0,5  -  1 часа при

периодическом   перемешивании   и   удаляют   растворитель  на  ротационном

испарителе  при  температуре  водяной  бани 45 °C до объема ~ 1 мл. Остаток

количественно  наносят  на  хроматографическую  пластинку  с  тонким  слоем

силикагеля   (могут   быть   использованы   пластинки,   приготовленные   в

лабораторных  условиях, и пластинки "Силуфол"). На эту же пластинку наносят

стандартные  количества  (1  и  2  мкг)  АДХТ  в  виде раствора в ацетоне и

проводят хроматографирование в системе растворителей этилацетат - хлороформ

(1:1)  в  хроматографической  камере,  насыщенной  в течение 2 часов парами

подвижных   растворителей.   Для   насыщения   стенки   камеры  обкладывают

фильтровальной    бумагой,    которая    пропитывается   смесью   подвижных

растворителей.   После  окончания  процесса  хроматографирования  пластинку

извлекают  из  камеры  и сушат на воздухе в вытяжном шкафу. Для обнаружения

АДХТ  пластинку  обрабатывают  смесью  N 1 и N 2 (1:1) и затем 4-процентным

водным раствором лимонной кислоты. АДХТ обнаруживается  в  виде синих пятен

на желтом фоне с величиной R  = 0,61 +/- 0,05.

                            f

    Для  повышения  надежности идентификации АДХТ хроматографирование может

быть  также  проведено  в  системе растворителей ацетон - бензол (3:2). Для

обнаружения  АДХТ пластинку предварительно помещают в эксикатор (камера для

хлорирования)  на  2  минуты,  на  дно   которого   наливают   смесь  (1:1)

3-процентного водного раствора  марганцовокислого  калия  и  12-процентного

водного раствора хлористоводородной кислоты (камера насыщается парами хлора

через 5 - 10 минут после помещения в нее растворов марганцовокислого  калия

и хлористоводородной кислоты).  Затем  пластинку  вынимают  из  эксикатора,

помещают   в  вытяжной  шкаф  на  40  минут  для  удаления  паров  хлора  и

обрабатывают  проявляющим  реактивом  N 2. АДХТ обнаруживается в виде синих

пятен  на  светло-голубом  фоне  с  величиной R  = 0,82 +/- 0,05 (пластинки

                                               f

"Силуфол").

2.6.2. Газожидкостная хроматография

Извлечение АДХТ из пробы воды проводят так, как это описано в п. 2.6.1. Объединенный хлороформный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (5 - 10 г) в течение 0,5 - 1 часа при периодическом перемешивании и удаляют растворитель на ротационном испарителе при температуре водяной бани 45 °C до объема ~ 0,5 мл. Остаток растворителя удаляют потоком теплого воздуха досуха и сухой остаток количественно переносят ацетоном (~ 1 мл) в градуированную центрифужную пробирку. Потоком теплого воздуха упаривают содержимое пробирки до 0,2 мл и вводят в хроматограф 2 мкл.

    Условия   хроматографирования   (хроматограф   "Цвет-106"  с  пламенным

ионизационным  детектором):  стеклянная  колонка  (длина  1  м,  внутренний

диаметр  3  мм),  заполненная  хромосорбом  W-HP  с  3%  OV-17; температура

термостата  колонки  и  испарителя  150  и  260 °C соответственно; скорость

газа-носителя  (азот  особой  чистоты)  через  колонку  40  мл/мин.,  шкала

                       -12

электрометра  10  x  10     А, скорость диаграммной ленты потенциометра 240

мм/час.  Время  удерживания  АДХТ  в  этих  условиях 6 минут. Для повышения

надежности  идентификации  АДХТ  может быть использовано хроматографическое

определение  на  колонке  (длина 2 м, внутренний диаметр 3 мм), заполненной

хроматоном  N-AW  с  5%  XE-60.  Температура  термостата  колонки  180  °C,

остальные  условия хроматографирования те же. Время удерживания АДХТ в этом

случае 4 минуты 26 сек.

Содержание АДХТ в воде определяют с помощью предварительно построенного калибровочного графика.

2.7. Обработка результатов анализа

Содержание АДХТ в пробах при определении с помощью тонкослойной хроматографии рассчитывают по формуле:

                                     5

                                   10  x A

                               X = -------,

                                    V x P

где:

X - содержание в пробе АДХТ, мг/л;

A - количество АДХТ в анализируемом объеме пробы, мг;

V - объем пробы, мл;

P - процент определения, % (см. табл.).

Количественную оценку АДХТ на хроматограммах проводят путем сравнения интенсивности окраски и площадей пятен пробы и стандартных растворов или по величине площади пятен по формуле:

                                A  - A

                                 2    1

                       A = A  - ------- x (S  - S),

                            2   S  - S      2

                                 2    1

    где:

    A, S - количество (мкг) и площадь (кв. мм) пятна АДХТ  в  анализируемой

пробе;

    A , A , S  и S  - количество (мкг) и площадь (кв. мм) пятен стандартных

     1   2   1    2

растворов АДХТ с большим и меньшим содержанием по сравнению с анализируемой

пробой.

Величину площади пятен определяют, накладывая на пластинку прозрачную бумагу или кальку; очерчивают контур пятна, переносят его на миллиметровку и подсчитывают число кв. мм, входящих в контур.

Содержание АДХТ в пробах (X, мг/л) при определении с помощью газожидкостной хроматографии рассчитывают по формуле:

                                    H - A

                                X = -----,

                                      B

где:

H - высота пика АДХТ на хроматограмме анализируемой пробы, мм (среднее значение из двух параллельных определений).

3. Требования безопасности

Соблюдаются требования безопасности, рекомендуемые при работе в химических лабораториях.