Утверждены

Министерством здравоохранения СССР

29 июля 1991 г. N 6145-91

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЭФАЛЯ В ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУРАХ

МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

(Дополнение к Методическим указаниям N 6132-91)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика метода

Эфаль - смесевой препарат:

(I) трис-O-(этилортофосфит)алюминия (аналог альетта):

          O

          \\                                     C H  AlO P .

    (C H O-PO) Al.                                6 18   9 3

      2 5  \  3

            H                                    М.м. 354,0.

    (II) фосфит алюминия:

    AlPO .                                       М.м. 106,0.

        3

    (III) фосфористая кислота:

    H PO .                                       М.м. 82,02.

     3  3

Эфаль - 66,6% к.э. - вязкая прозрачная жидкость, хорошо растворима в воде. Компоненты препарата I, III в воде растворимы, II - труднорастворимы; в органических растворителях практически не растворимы.

МДУ эфаля в огурцах - 0,5 мг/кг, винограде - 0,8 мг/кг, в воде - 0,3 мг/л.

2. Методика определения эфаля в зерновых культурах

(пшеница, рожь) методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении эфаля из исследуемого объекта водой, концентрировании и последующем определении методом реакционной газожидкостной хроматографии в виде метилпроизводных.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Минимально детектируемое количество:

этилфосфита алюминия - 0,1 нг;

фосфористой кислоты - 0,1 нг.

Предел обнаружения в пробе - 0,2 мг/кг.

Среднее значение определения при n = 5, %, - 73 и 71 соответственно.

Размах варьирования, %, - 70 - 78 и 64 - 76.

Стандартное отклонение, %, - 3,6 и 5,7.

Доверительный интервал среднего при P = 0,95, n = 5 - +/- 6,8% и +/- 10%.

2.1.3. Избирательность метода

Условия экстракции и последующего газохроматографического определения эфаля (этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты) позволяют избирательно определять препарат в присутствии фосфорорганических и пестицидов других групп.

2.2. Реактивы и материалы

Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-87.

Метилгликоль (метилцеллозоль), чда, МРТ 6-09-6347-69.

Гидразингидрат, чда.

Кали едкое, ч, ГОСТ 24363-80.

Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.

Кислота уксусная (ледяная), хч, ГОСТ 18270-81.

Кислота серная, хч, ГОСТ 4204-77, 20-процентный раствор.

Метиловый спирт, хч, ГОСТ 6996-77.

Диэтиловый эфир, хч, ГОСТ 6262-79.

Азот в баллоне, особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Водород в баллоне, ГОСТ 3022-88.

Неподвижная фаза - 15% Карбовакс 20 М на хроматоне N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм).

Этилфосфит алюминия, хч.

Фосфористая кислота, хч.

Основные стандартные растворы (ОСР) этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты с концентрацией по 100 мкг/мл готовят взятием навески каждого вещества 10 мг (0,0100 г) хч и растворением в дистиллированной воде в мерных колбах емкостью 100 мл. Хранить в холодильнике не более 10 дней.

Рабочие стандартные растворы с содержанием 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 2 мкг/мл готовят разбавлением ОСР водой. Хранить не более 2 дней.

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Газовый хроматограф серии "Цвет" или аналогичный с пламенно-фотометрическим (фосфорным) детектором (ПФД).

Колонка стеклянная, длина 2 м, диаметр 3,5 мм.

Мельница ручная типа РСТ УССР 1913-82 или электрическая, позволяющая измельчать зерно до 1 - 3 мм.

Ротационный испаритель типа ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Колбы грушевидные (круглодонные), ГОСТ 25336-82, вместимостью 500 мл, 100 мл, 50 мл ОКШ 500-29/50-14.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, вместимостью 50, 100 мл.

Пробирки мерные на шлифах, ГОСТ 1770-74, вместимостью 5 мл.

Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1; 0,2; 1; 5; 10 мл.

Микрошприц на 10 мкл МШ-10, ТУ SE-2.833.024.

Прибор для получения диазометана (рис. 1 - не приводится):

- колба круглодонная, емкостью 500 мл на шлифах (реакционный сосуд);

- холодильник Либиха на шлифах;

- делительная воронка на шлифе (капельница);

- П-образный переходник на шлифах;

- капилляр.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Отбор проб

Отбор проб и доставка проб производятся в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР, N 2051-79 от 21.08.79.

2.4.2. Подготовка колонки для ГЖХ

Колонку заполняют стандартной фазой (15% Карбовакс 20 М на хроматоне N-AW-DMCS), подключив ее к вакууму водоструйного насоса. Заполненную колонку кондиционируют в термостате колонок в течение 6 часов без подключения к детектору, продувая азотом (20 - 24 мл/мин.) и постепенно поднимая температуру от 100 °C до 150 °C. Затем колонку присоединяют к детектору.

2.5. Описание определения

2.5.1. Экстракция

    Зерно измельчают и просеивают через сита 1 - 3 мм. Для анализа

берут  25 г средней пробы подготовленного зерна. Приливают к зерну

50  мл  хлороформа и 50 мл воды. Встряхивают пробу на аппарате для

встряхивания  30  минут.  Дают 15 минут отстояться. Сливают жидкую

фазу,  фильтруя под вакуумом на воронке Бюхнера через тройной слой

марли. К остатку в колбе прибавляют 25 мл хлороформа и 25 мл воды,

энергично  встряхивают  и  фильтруют, как  описано  выше. Фильтрат

переносят  в делительную воронку и отбрасывают нижний хлороформный

слой. Водную фазу переносят в колбу для отгонки и концентрируют до

10  мл  под  вакуумом водоструйного насоса при температуре бани не

более  45  °C. Измеряют точно объем сконцентрированной пробы (V ),

                                                               1

отбирают  0,2  мл,  переносят  в мерную пробирку и доводят до 2 мл

смесью растворителей  метилгликоль - ацетонитрил (1:1). Полученную

смесь  переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют при 3000

об./мин.  в  течение 15 минут, после чего отбирают для дальнейшего

метилирования  1  мл  центрифугата; либо фильтруют через небольшой

бумажный фильтр "красная лента" и также отбирают для метилирования

точно   1  мл  смеси,  что  соответствует  аликвоте  0,1  мл  (V )

                                                                2

сконцентрированного (V ) экстракта.

                      1

    2.5.2.  Получение метилпроизводных эфаля (этилфосфита алюминия

и фосфористой кислоты)

    Подготовленные    аликвоты    экстрактов    (V )    метилируют

                                                  2

диазометаном.   Одновременно   метилируют   стандартные   растворы

этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты. Для этого берут 0,1 мл

рабочих стандартных растворов (10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 2 мкг/мл) и по

0,9  мл смеси растворителей метилгликоль - ацетонитрил (1:1), т.е.

подготовленные       к       метилированию      и      дальнейшему

газохроматографическому  анализу  стандарты содержат 1 мкг/мл, 0,5

мкг/мл, 0,2 мкг/мл этилфосфита алюминия или фосфористой кислоты.

2.5.2.1. Получение диазометана

Вследствие токсичности и раздражающего действия диазометана прибор должен быть установлен в вытяжном шкафу. При работе использовать индивидуальные средства защиты: экран, перчатки, очки.

В реакционную колбу (см. рис. 1) помещают 6 г кали едкого, 3 мл метанола и 3 мл гидразингидрата. Через смесь продувают азот с расходом ~ 100 мл/мин. Из капельницы подают хлороформ со скоростью 1 капля за 1 - 2 с.

2.5.2.2. В подготовленные пробы и стандарты вводят по 5 - 6 мкл ледяной уксусной, 3 - 5 мкл 20-процентной серной кислоты и продувают получаемый в описанном выше приборе диазометан до появления интенсивной желтой окраски раствора пробы или стандарта. Затем немедленно нейтрализуют избыток диазометана в пробе (стандарте) прибавлением нескольких микролитров уксусной кислоты до исчезновения окраски. Пробы и стандарты готовы к газохроматографическому определению.

После окончания метилирования прекращают подачу в реакционную колбу хлороформа, отключают азот, остатки в реакционной колбе заливают водой и тщательно промывают колбу и все части прибора водой.

2.5.3. Хроматографический анализ

Газовый хроматограф серии "Цвет" с пламенно-фотометрическим (фосфорным) детектором (ПФД).

Колонка хроматографическая стеклянная длиной 2 м, внутренним диаметром 3,5 мм.

Неподвижная фаза 15% Карбовакс 20 М на хроматоне N-AW-DMCS.

Температура колонки 145 °C.

Температура испарителя 180 °C.

Газ-носитель - азот с расходом 50 мл/мин.

Расход водорода - 65 мл/мин.

Вводимый объем - 1 - 3 мкл.

                               -9

    Шкала множителя 2 x 64 x 10  .

Скорость диаграммной ленты 240 мм/час.

Время удерживания:

диметилфосфоната (метилирование фосфористой кислоты): 2,1 мин.;

метилэтилфосфоната (метилирование этилфосфита алюминия): 2,6 мин.

Предел определения:

диметилфосфоната - 0,1 нг;

метилэтилфосфоната - 0,1 нг.

Количественную оценку проводят методом соотношения со стандартом по сравнению со стандартами этилфосфита алюминия и фосфористой кислоты.

Расчет результатов анализа проводят по формуле:

                          C x H  x V  x V

                               2    3    1

                      X = ----------------,

                          H  x V  x V  x P

                           1    2    4

    где:

    X  -  содержание  этилфосфита алюминия (фосфористой кислоты) в

анализируемой пробе, мг/кг;

    C  -  концентрация  стандартного раствора для ГЖХ, вводимого в

хроматограф, мкг/мл;

    H  - высота пика стандартного раствора, мм;

     1

    H  - высота пика пробы, мм;

     2

    V  - конечный объем сконцентрированного экстракта пробы, мл;

     1

    V  - часть экстракта V , взятая для метилирования, мл;

     2                    1

    V   -  объем  стандартного раствора, введенного в хроматограф,

     3

мкл;

    V  - объем пробы, введенной в хроматограф;

     4

    P - масса анализируемой пробы, г.

3. Техника безопасности

Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях, а также Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях, отделениях, отделах санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР, N 2455-81 от 20.10.81.

Особое внимание обратить при работе с гидразингидратом и диазометаном. Соблюдать требования безопасности, описанные в методике. Гидразингидрат - токсичная, пожароопасная жидкость (температура воспламенения 59°, самовоспламенения - 267°). При попадании гидразингидрата на окружающие предметы, руки, одежду его немедленно смывают большим количеством воды.