"Методические указания по определению флюзифоп-бутила (галакона) и его метаболита флюзифопа в воде, почве, гречихе, овощных культурах, биологических средах хроматографическими методами" // Технорма.RU

Утверждены

Министерством здравоохранения СССР

29 июля 1991 г. N 6142-91

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ФЛЮЗИФОП-БУТИЛА (ГАЛАКОНА) И

ЕГО МЕТАБОЛИТА ФЛЮЗИФОПА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ГРЕЧИХЕ,

ОВОЩНЫХ КУЛЬТУРАХ, БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ

ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Флюзифоп-бутил (галакон). Действующее вещество - н-бутиловый эфир 2-/4-(5-трифторметил-2-окси)фенокси/пропионовая кислота.

Синонимы - оницид, фузилад.

Структурная формула:

___ ___

--- ---

F C--/ \ / \ C H F NO .

3 \\ //--O-- \\ //--OCHCOO(CH ) CH 19 20 3 4

---N --- │ 2 3 3

CH М.м. 383.

Жидкость светло-желтого цвета. Т. кип. 170 °C при 0,5 мм рт. ст., плотность 1,24 г/куб. см. Хорошо растворим в органических растворителях, растворимость в воде 2 мг/л при 20 °C. Устойчив в течение 6 месяцев при температуре 20 - 25 °C.

Малотоксичен для теплокровных. ЛД для крыс при пероральном

введении 3228 мг/кг. МДУ фузилада (аналога галакона) в капусте,

свекле сахарной - 0,2 мг/кг, свекле столовой, луке - 0,1 мг/кг,

моркови - 0,03 мг/кг.

Галакон применяется для борьбы со злаковыми сорняками как послевсходовый гербицид на посевах сахарной свеклы, подсолнечника, гречихи и других овощных культур.

Флюзифоп. Химическое название - 2-[4-трифторметил-2-окси)фенокси]пропионовая кислота.

Структурная формула:

___ ___

--- ---

F C--/ \ / \ C H F NO .

3 \\ //--O-- \\ //--OCHCOOH 15 12 3 4

---N --- │

CH М.м. 327.

Является естественным метаболитом флюзифоп-бутила (галакона) в окружающей среде.

2. Методика определения флюзифоп-бутила

в окружающей среде

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении флюзифоп-бутила и флюзифопа хлороформом из обработанного раствором HCl образца либо смесью хлороформа с HCl. Очистка экстрактов осуществляется распределением между несмешивающимися фазами и хроматографией в тонком слое силикагеля ("Силуфол") с последующим гидролизом галакона на пластинке до флюзифопа. Аналитическое определение проводится методом хроматографии в тонком слое (ТСХ) с обнаружением под хроматоскопом, а также по реакции с бромкрезоловым зеленым либо методом реакционной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) в виде пентафторбензилпроизводного флюзифопа с использованием детектора постоянной скорости рекомбинации (ДПР).

2.1.2. Метрологическая характеристика

Метрологическая характеристика методов определения флюзифоп-бутила и флюзифопа приведена в таблице 2.1.

Таблица 2.1

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ФЛЮЗИФОП-БУТИЛА И ФЛЮЗИФОПА ТОНКОСЛОЙНОЙ И РЕАКЦИОННОЙ

ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ

┌──────────┬─────────┬─────────────────────────────────────────────────────────┐

│Исследуе- │Исследу- │ Метод │

│мое │емый ├────────────────────────────┬────────────────────────────┤

│соединение│объект │ ГЖХ <а> │ ТСХ <б> │

│ │ ├──────┬─────┬──────┬────────┼──────┬─────┬───────┬───────┤

│ │ │предел│сред-│стан- │довери- │предел│сред-│стан- │довери-│

│ │ │обна- │нее │дарт- │тельный │обна- │нее │дартное│тельный│

│ │ │руже- │зна- │ное │интервал│руже- │зна- │откло- │интер- │

│ │ │ния, │чение│откло-│сред- │ния, │чение│нение, │вал │

│ │ │мг/кг │опре-│нение,│него, % │мг/кг │опре-│% │сред- │

│ │ │ │деле-│% │ │ │деле-│ │него, %│

│ │ │ │ния, │ │ │ │ния, │ │ │

│ │ │ │% │ │ │ │% │ │ │

├──────────┼─────────┼──────┼─────┼──────┼────────┼──────┼─────┼───────┼───────┤

│ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │ 10 │

│Флюзифоп- │вода │0,005 │89 │6,2 │7,9 │0,02 │84 │13,9 │17,2 │

│бутил │почва │0,02 │81 │8,8 │10,9 │0,06 │80 │13,3 │16,5 │

│ │растения │0,02 │77 │10,3 │12,8 │0,06 │80 │14,5 │18,0 │

│ │биосубст-│0,1 │86,5 │8,5 │9,75 │0,5 │85 │13,8 │15,8 │

│ │раты │ │ │ │ │ │ │ │ │

│Флюзифоп │вода │0,005 │94 │5,3 │5,5 │0,015 │97 │10,9 │13,5 │

│ │почва │0,02 │90 │7,2 │9,1 │0,05 │86 │12,5 │15,5 │

│ │растения │0,02 │75 │11,0 │13,6 │0,05 │75 │15,1 │18,7 │

│ │биосубст-│0,1 │76 │14,0 │16,1 │0,5 │76 │13,2 │15,1 │

│ │раты │ │ │ │ │ │ │ │ │

└──────────┴─────────┴──────┴─────┴──────┴────────┴──────┴─────┴───────┴───────┘

--------------------------------

<а> Минимально детектируемое количество флюзифоп-бутила и флюзифопа 0,3 нг.

<б> Минимально детектируемое количество бутила и флюзифопа 1 мкг.

* При P = 0,95, n = 5 - 7.

2.1.3. Избирательность метода: рекомендуемые в Методике условия очистки экстрактов, сочетание метода ТСХ (при использовании альтернативных условий обнаружения флюзифоп-бутила и его метаболита по различным функциональным группам) с методом реакционной ГЖХ дают возможность идентифицировать исследуемые соединения в присутствии хлор-, фосфорсодержащих пестицидов, триазинов, производных фенилмочевины, синтетических пиретроидов.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79.

Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.

Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.

Вода дистиллированная.

Натрия сульфат безводный, хч, ГОСТ 4166-81.

Натрия хлорид, ч, ГОСТ 4233-81.

Натрия гидрокарбонат, ч, ГОСТ 4201-79, 1-процентный водный раствор.

Хлороводородная кислота (HCl), хч, ГОСТ 3118-77, 2 М водный раствор.

Индикаторная бумага универсальная, ТУ 6-09-1181-71.

Фильтры бумажные беззольные "красная лента".

Основные стандартные растворы флюзифоп-бутила и флюзифопа в ацетоне с концентрацией 100 мкг/мл по действующему веществу. Хранить в холодильнике не более 6 месяцев.

Рабочие стандартные растворы флюзифоп-бутила и флюзифопа 10 мкг/мл готовят разведением основных стандартных растворов в ацетоне. Хранить в холодильнике не более 1 месяца.

Для ТСХ

Пластинки хроматографические "Силуфол", 15 x 15 см, Хемапол, ЧССР.

Проявляющий реагент: 0,1 г бромкрезолового зеленого растворяют в 100 мл водного ацетона (ацетон + вода 4:1). Перед проявлением к реагенту добавляют по каплям 0,1 М раствор NaOH до перехода окраски из оранжевой в синюю.

Для ГЖХ

Азот газообразный, осч, содержание O не более 0,003%, ГОСТ

9293-74.

Стандартная фаза 3% XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS (0,100 - 0,125 меш), Хемапол, ЧССР, или 5% XE-60 на хроматоне N-AW.

Калия карбонат, хч, ГОСТ 4221-76, 30% водный раствор, промытый бензолом (100 мл).

Пентафторбензилхлорид (или пентафторбензилбромид), ч, в ацетоне <*>.

--------------------------------

<*> Нарабатывает по договоренности Институт органической химии СО АН СССР (630090, г. Новосибирск, проспект Лаврентьева, 9).

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Газовый хроматограф "Цвет-106" (или любой другой с детектором по захвату электронов).

Колонка стеклянная, длина 1 м, внутренний диаметр 3 мм.

Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.

Весы аналитические лабораторные, ГОСТ 19491-74.

Весы технические ВЛКТ-500.

Баня водяная электрическая, ТУ 64-1-2850-76.

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Гомогенизатор или измельчитель тканей, МРТУ-42-1505-63.

Шкаф сушильный, ТУ 64-1-1411-76.

Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ 25336-82.

Камера хроматографическая стеклянная, ГОСТ 25336-82.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 25336-82.

Камера для опрыскивания пластинок, ТУ 25-11-430-70.

Колбы грушевидные на шлифах, ГОСТ 25336-82, емкостью 50, 100 мл.

Колбы плоскодонные конические, ГОСТ 1770-74, емкостью 50, 100, 250 мл.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, емкостью 100, 250 мл.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, емкостью на 50 мл.

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, емкостью 250 мл.

Воронки химические, диаметр 60 мм, ГОСТ 25336-82.

Пипетки емкостью 0,1; 1 мл, ГОСТ 20292-74.

Капиллярные пипетки для нанесения проб.

Микрошприц МШ-10, ТУ 2-833-106.

2.4. Проведение определения

2.4.1. Отбор проб

Отбор производят в соответствии с требованиями, изложенными в "Унифицированных правилах отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденных Минздравом СССР (N 2051-79, 21.08.79).

2.4.2. Экстракция

2.4.2.1. Вода. 200 мл воды помещают в делительную воронку, подкисляют концентрированной хлороводородной кислотой до pH = 1 и экстрагируют флюзифоп-бутил и флюзифоп хлороформом, предварительно насыщенным водой, 3 раза по 50 мл, осторожно встряхивая по 3 - 4 минуты. Объединенный хлороформный экстракт отфильтровывают в колбу для отгонки растворителей через обезжиренный ватный тампон (или бумажный фильтр "красная лента") с помещенным на него слоем безводного натрия сульфата (15 г). Отгоняют хлороформ на ротационном испарителе под вакуумом при температуре бани не более 45 °C до ~ 0,5 мл. Остаток упарить досуха при комнатной температуре. Далее разделение и очистка методом ТСХ, как описано в п. 2.4.3.

2.4.2.2. Почва, растительные продукты (овощи, гречиха)

а) для экстракции флюзифоп-бутила 50 г почвы, измельченных овощей, 20 г раздробленной гречихи смочить 10 мл воды, подкисленной концентрированной HCl до pH = 3, прилить 100 мл хлороформа и экстрагировать 30 мин. на аппарате для встряхивания. Отфильтровать через бумажный фильтр "красная лента" в делительную воронку емкостью 500 мл, промыть образец хлороформом дважды по 10 мл, присоединить смывы к экстракту. Далее очистка распределением в раствор гидрокарбоната натрия, как описано ниже для флюзифопа;

б) для определения флюзифопа (определяются суммарно флюзифоп и галакон в виде флюзифопа) 50 г почвы, измельченных овощей, 20 г раздробленной гречихи смочить 20 мл 2 М HCl и оставить на 2 часа. Затем прилить к образцу 100 мл хлороформа и экстрагировать 30 мин. на аппарате для встряхивания. Отфильтровать экстракт через вату в делительную воронку емкостью 500 мл, промыть образец хлороформом дважды по 10 мл, присоединить смывы к экстракту.

Для очистки к полученному хлороформному экстракту приливают 100 мл 1-процентного водного раствора гидрокарбоната натрия и осторожно встряхивают в течение 3-х минут. Нижний (хлороформный) слой отбрасывают. К оставшемуся гидрокарбонатному раствору прибавляют по каплям концентрированную HCl до pH = 1 и проводят экстракцию хлороформом дважды по 100 мл, осторожно встряхивая 2 - 3 мин. Объединенный хлороформный экстракт отфильтровывают и концентрируют, как описано выше для воды (п. 2.4.2.1).

2.4.2.3. Биосубстраты (внутренние органы и ткани)

2 г образца тщательно измельчают, переносят в плоскодонную

колбу с притертой пробкой вместимостью 50 мл, экстрагируют 20 мл

хлороформа, подкисленного 2 - 3 каплями концентрированной HCl, при

комнатной температуре в течение 1 - 2 часов на аппарате для

встряхивания. Экстракт отфильтровывают через бумажный фильтр в

делительную воронку вместимостью 250 мл. Колбу и фильтр дважды

промывают хлороформом порциями по 5 - 10 мл. К объединенному

экстракту добавляют 50 мл 0,1-процентного водного раствора

гидрокарбоната натрия (NaHCO ) и 3 г хлорида натрия (из расчета

получения 10-процентного раствора). Смесь осторожно взбалтывают в

течение 2-х минут. После расслоения фаз отбрасывают нижний

(хлороформный) слой. К оставшемуся содовому раствору прибавляют 50

мл 2 М HCl и проводят экстракцию хлороформом 3 x 30 мл.

Объединенный хлороформный экстракт отфильтровывают и

концентрируют, как описано выше для воды (п. 2.4.2.1).

2.4.2.4. Кровь. 5 - 7 мл крови растирают в фарфоровой ступке с безводным сульфатом натрия. Делят полученную смесь на две части (по весу), переносят их в плоскодонные колбы вместимостью 50 мл.

а) для извлечения флюзифоп-бутила одну часть экстрагируют 25 - 30 мл хлороформа в течение 1 часа, отфильтровывают через бумажный фильтр в делительную воронку вместимостью 250 мл, промывают образец дважды хлороформом по 10 мл, присоединяют смывы к основному экстракту. Далее - очистка распределением в раствор гидрокарбоната натрия, как описано выше (п. 2.4.2.2 "б");

б) для определения флюзифопа (определяются суммарно флюзифоп и флюзифоп-бутил в виде флюзифопа) вторую часть пробы экстрагируют 25 - 30 мл хлороформа, подкисленного 3 - 5 каплями концентрированной HCl, в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Отфильтровывают экстракт через бумажный фильтр в делительную воронку вместимостью 250 мл, промывают образец дважды хлороформом по 10 мл, смывы присоединяются к основному экстракту. Очистку проводят, как описано выше (п. 2.4.2.2 "б").

2.4.2.5. Моча. 8 - 10 мл мочи помещают в делительную воронку вместимостью 50 - 100 мл, подкисляют 5 каплями концентрированной HCl и экстрагируют флюзифоп-бутил и флюзифоп хлороформом 3 раза по 10 мл. Объединенный хлороформный экстракт отфильтровывают в колбу для отгонки растворителей через обезжиренный ватный тампон с помещенным на него слоем безводного сульфата натрия (10 - 15 г). Отгоняют хлороформ на ротационном испарителе. Остаток упаривают досуха при комнатной температуре. Далее разделение и очистка методом ТСХ, как описано в п. 2.4.3.

2.4.3. Разделение и очистка методом ТСХ

После упаривания хлороформа из экстракта (п. 2.4.2) сухой остаток растворяют в 0,1 - 0,2 мл ацетона и при помощи капиллярной пипетки наносят на пластинку "Силуфол" на линию старта (2 см от нижнего края пластинки) так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Колбу с экстрактом 2 - 3 раза смывают небольшими порциями ацетона, который также наносят в центр пятна. Чтобы пятно не расплывалось, при нанесении пробы для более быстрого удаления ацетона пластинку можно положить на электрогрелку.

Пластинку помещают в хроматографическую камеру, в которую за

30 мин. до хроматографирования налита подвижная фаза - смесь

гексана и ацетона в объемном соотношении 2:1. После развития

хроматограмм (высота подъема растворителя 10 см) пластинку

вынимают, сушат на воздухе до полного удаления растворителя,

отмечают под хроматоскопом зоны локализации флюзифоп-бутила

(R 0,59 - 0,63) и флюзифопа (R 0,29 - 0,33). Вырезают полоски с

f f

зоной локализации флюзифоп-бутила и флюзифопа, измельчают их по

отдельности, переносят в плоскодонные колбы на 50 мл, заливают 20

мл хлороформа. Экстракция длится 1,5 - 2 часа при периодическом

встряхивании. Полученные экстракты N 1 (содержит флюзифоп-бутил) и

N 2 (содержит флюзифоп) отфильтровывают через бумажный фильтр в

круглодонные колбы вместимостью 50 мл. Колбы и фильтры промывают

несколькими порциями хлороформа по 5 мл. Экстракты упаривают

досуха на ротационном испарителе, как описано в п. 2.4.2.

2.4.4. Гидролиз флюзифоп-бутила на пластинке

Сухой остаток экстракта N 1 растворяют в 0,1 - 0,2 мл ацетона, количественно наносят на хроматографическую пластинку на линию старта. Пластинку помещают в сушильный шкаф, проводят гидролиз галакона при температуре не ниже 175 °C в течение 30 мин. Затем пластинку вынимают и охлаждают на воздухе.

2.4.5. Хроматографический анализ

2.4.5.1. Определение методом ТСХ

На охлажденную пластинку на линию старта рядом (на расстоянии

2 см) с экстрактом N 1 наносят растворенный в 0,1 - 0,2 мл ацетона

сухой остаток экстракта N 2. Параллельно наносят стандартные

растворы флюзифопа в количестве 3, 5, 10, 20 мкг. Пластинку

помещают в хроматографическую камеру с подвижной фазой гексан -

ацетон 2:1. После того как фронт растворителя поднимется на 10 см,

пластинку вынимают из камеры, дают растворителю испариться и

обрабатывают из пульверизатора реагентом на основе бромкрезолового

зеленого. Флюзифоп проявляется в виде желтых пятен на сине-зеленом

фоне. Величина R составляет 0,29 - 0,05.

Количественное определение флюзифоп-бутила и флюзифопа в пробе

производят визуально путем сравнения интенсивности окраски и

площадей пятен пробы и стандартных растворов.

Содержание флюзифопа (X ) и флюзифоп-бутила (X ) в пробе

1 2

вычисляют по формулам:

A A

1 2

X = --; X = 1,17 x --,

1 P 2 P

где:

X - содержание флюзифопа в пробе, мг/кг;

A - количество флюзифопа, найденное путем сравнения со

стандартными растворами флюзифопа, мг;

P - масса пробы, взятой для анализа, кг;

X - содержание флюзифоп-бутила в пробе, мг/кг;

A - количество флюзифопа, образовавшегося при гидролизе

флюзифоп-бутила, найденного путем сравнения со стандартными

растворами флюзифопа, мг <а>;

1,17 - коэффициент пересчета на флюзифоп-бутил <а>.

--------------------------------

<а> Для более точного определения содержания флюзифоп-бутила в

пробе на хроматографическую пластинку в п. 2.4.4 параллельно с

экстрактом наносят стандартные растворы флюзифоп-бутила (2, 5, 10

мкг). После гидролиза и хроматографирования определяют содержание

препарата путем сравнения интенсивности окраски и площадей пятен

пробы с гидролизованным на этой же пластинке стандартным

флюзифоп-бутилом. В этом случае расчет содержания флюзифоп-бутила

в пробе (X ) проводят согласно приведенной выше формуле расчета

флюзифоп-бутила без коэффициента пересчета.

2.4.5.2. Определение методом реакционной ГЖХ

Примечание. При определении методом реакционной ГЖХ параллельно с исследуемым образцом анализируют контрольный образец исследуемого продукта.

После гидролиза флюзифоп-бутила на пластинке, как описано в

пункте 2.4.4, и хроматографирования, как описано в пункте 2.4.5,

отмечают под хроматоскопом зоны локализации флюзифопа (R = 0,29

+/- 0,05).

Вырезают полоски пластинки с зонами локализации флюзифопа в стандарте, исследуемом и контрольном образцах, измельчают их, переносят в плоскодонные колбы на 50 мл и заливают 20 мл хлороформа. Экстракция длится не менее 1,5 часа при периодическом встряхивании. Полученные экстракты упаривают досуха на ротационном испарителе (см. п. 2.4.2, вода) и проводят бензилирование флюзифопа.

Бензилирование

Сухие остатки хлороформных экстрактов растворяют в 10 мл ацетона, прибавляют 3 г безводного сульфата натрия, 0,2 мл 1-процентного раствора пентафторбензилхлорида в ацетоне и 30 мкл 30-процентного раствора карбоната калия, хорошо встряхивают. Бензилирование проводят при нагревании с обратным холодильником при температуре 70 +/- 5 °C в течение 30 мин. или в закколбе при комнатной температуре в течение 16 часов (ночь). Параллельно с пробой бензилируется стандартный раствор флюзифопа.

Газохроматографическое определение пентафторбензилпроизводного флюзифопа производится с детектором постоянной скорости рекомбинации при следующих условиях:

Неподвижная фаза 3% XE-60 на Хроматоне N-AW-DMCS.

Колонка стеклянная 1 м x 3 мм.

Скорость газа-носителя (азота) 60 куб. см/мин. ("Цвет-106"), 30 мл/мин. ("Цвет-570").

-12

Шкала электрометра 20 x 10 А.

Температура колонки 220 °C.

Температура испарителя 260 °C.

Температура детектора 260 °C.

Вводимый объем - 4 мкл.

Линейный диапазон детектирования 0,3 - 1,5 нг.

Минимально детектируемое количество 0,1 нг.

Время удерживания при указанных условиях - 3,6 мин., 7,5 мин. (в зависимости от скорости газа-носителя).

Расчет концентрации флюзифоп-бутила (мг/кг) в пробе проводят по формуле:

A x H x Y

2 2

X = ----------- x 1,17

2 H x Y x P

1 1

путем сравнения анализируемого пика с пиком, полученным при введении известного количества пентафторбензилового эфира стандартного раствора флюзифопа, при условии, что пики близки по величине и определение ведется в диапазоне линейности детектирования.

A - количество флюзифопа в стандартном растворе, введенном в

хроматограф, нг;

H - высота пика стандартного раствора, мм;

H - высота пика препарата в пробе, мм;

Y - объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл;

Y - общий объем анализируемого экстракта, мл;

P - масса пробы, взятой для анализа, г;

1,17 - коэффициент пересчета флюзифопа на флюзифоп-бутил.

Расчет концентрации флюзифопа (X , мг/кг) в пробе производят

по аналогичной формуле без коэффициента пересчета.

Расчет истинного содержания флюзифопа в образце при определении в почве, растительных продуктах, крови проводят по разности суммарного содержания флюзифопа, найденного в пробе (п. 2.4.2.2 "б", п. 2.4.2.4 "б"), и содержания флюзифоп-бутила в пересчете на флюзифоп, найденного в этих же объектах (п. 2.4.2.2 "а", 2.4.2.4 "а"):

X (истинное) = X x ----.

1 1 1,17

3. Требования безопасности

Соблюдать требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с органическими растворителями.