"Методические указания по определению байфидана в зерновых и лекарственных культурах, в воде и почве методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии" // Технорма.RU

Утверждены

Министерством здравоохранения СССР

29 июля 1991 г. N 6131-91

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БАЙФИДАНА В ЗЕРНОВЫХ

И ЛЕКАРСТВЕННЫХ КУЛЬТУРАХ, В ВОДЕ И ПОЧВЕ МЕТОДАМИ

ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Байфидан (триадименол) - 1-4-(хлорфенокси)-3,3-диметил-1-(1-H-1,2,4-триазол-1-ил)бутанол-2.

_____ │

Cl_// \\_O__CH__CH__C(CH ) C H ClN O .

\ ___ / │ 3 3 14 18 3 2

--- N

/\ М.м. 295,8.

/ \N

││__││

Химически чистый байфидан - бесцветный кристаллический

порошок, устойчив в кислых, нейтральных и щелочных средах.

ЛД для крыс 700 - 1200 мг/кг.

Байфидан - высокоэффективный фунгицид с системными свойствами из группы действующих веществ, относящихся к азоловым соединениям. Продукт отличается очень хорошим действием против настоящих мучнисто-росяных грибов и против различных ржавчинных болезней. Наряду с хорошим защитным действием байфидан обладает также лечебным и искореняющим действием. Байфидан применяется при воздействии зерновых культур, в овощеводстве, виноградарстве, при выращивании огурцов и дынь, а также в декоративном цветоводстве. Норма расхода - 125 г д.в. на га, то есть 0,5 л препарата на га.

Байфидан выпускается в виде эмульгирующего концентрата с 250 г триадеменола на 1 л (250 к.э.).

2. Методика определения байфидана

2.1. Основные положения

Метод основан на извлечении байфидана из анализируемой пробы органическим растворителем, очистке экстракта на колонке окиси алюминия с последующим определением методами газожидкостной хроматографии с термоионным (ТИД) детектором и тонкослойной хроматографии на пластинках "Силуфол".

2.1.2. Метрологическая характеристика метода (см. табл. 1)

Таблица 1

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ БАЙФИДАНА

┌────────┬────────┬───────┬───────┬───────────┬────────┬────────┬─────────────┐

│Препарат│ Объект │Мини- │Нижний │Размах │Среднее │Стан- │Доверительный│

│ │ │мальное│предел │варьирова- │значение│дартное │ интервал │

│ │ │детек- │опреде-│ния, % │опреде- │отклоне-│ среднего │

│ │ │тируе- │ления, │ │ления, │ние, │ при n = 5, │

│ │ │мое │мг/л, │ │% │% │ P = 0,95 │

│ │ │количе-│мг/кг │ │ │ │ │

│ │ │ство, │ │ │ │ │ │

│ │ │мкг │ │ │ │ │ │

├────────┼────────┼───────┼───────┼───────────┼────────┼────────┼─────────────┤

│Байфидан│зерно │ │0,020 │70,0 - 90,0│83,3 │+/- 2,67│83,5 +/- 5,6 │

│ │почва │0,004 │0,012 │72,0 - 95,0│90,8 │+/- 2,84│90,8 +/- 6,8 │

│ │вода │ │0,007 │95,0 - 100 │98,3 │+/- 3,99│98,3 +/- 7,7 │

│ТСХ │лекарст-│1,0 │0,1 │70 - 88 │78,9 │+/- 4,77│+/- 5,99 │

│ │венные │ │ │ │ │ │ │

│ │культуры│ │ │ │ │ │ │

└────────┴────────┴───────┴───────┴───────────┴────────┴────────┴─────────────┘

2.1.3. Избирательность метода

Другие препараты по сфере применения в данных условиях хроматографирования определению не мешают.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79.

Этилацетат, хч, ГОСТ 22300-76.

Хлористый кальций, ГОСТ 4161-77.

Хлороформ медицинский, фармакопея, ГОСТ 20015-74.

Спирт этиловый, ГОСТ 5962-67.

Окись алюминия II ст. активности, ГОСТ 8136-85.

Натрий сернокислый, безводный, хч, ГОСТ 4166-77.

Лимонная кислота, чда, ГОСТ 908-79.

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Водород из баллона, ГОСТ 3022-80, или получаемый из генератора водорода.

Воздух из баллона, ГОСТ 9-01-80, или нагнетаемый компрессором.

3% OV-17 на газохроме (0,16 - 0,20 мм).

5% E-301 на хроматоне N-AW-DMCS.

Бромфеноловый синий, ТУ 6-09-4530-77.

Азотнокислое серебро, ГОСТ 1277-75.

Стандартный раствор байфидана в спирте или ацетоне 1 мг/мл (I), из него готовится серия растворов с концентрацией 25 мкг/мл (II), 10 мкг/мг (III).

Проявляющие реактивы:

1. 0,4% ацетоновый раствор бромфенолового синего с 2% водным раствором азотнокислого серебра в равных объемах.

2. 2% водный раствор лимонной кислоты.

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.

Колбы конические, ГОСТ 25336-82, на 300 мл.

Круглодонные колбы, ГОСТ 25336-82, на 250 мл.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1 или 0,2 мл.

Воронки конические, ГОСТ 25336-82.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, емк. 50 мл.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74.

Микрошприц МШ N 10, ТУ 2-833-024.

Делительные воронки, ГОСТ 25336-82.

Хроматограф "Цвет-106", "Цвет-500" или аналогичный с ТИД.

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб" N 2051-79 от 21.08.79.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция

Вода. 200 мл воды в делительной воронке экстрагируют дважды по 100 - 200 мл этилацетата в течение 3 - 5 минут. Осушенный и объединенный экстракт концентрируют на ротационном испарителе. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, аликвоту вводят в хроматограф.

Почва, зерно. 100 г почвы или 10 - 20 г измельченного зерна экстрагируют 100 - 200 мл этилацетата на встряхивателе в течение 1 часа. Затем экстракцию повторяют, встряхивая анализируемую пробу в течение 30 минут со 100 мл этилацетата. Осушенный и объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе до объема 2 - 3 мл и проводят очистку.

Лекарственное сырье. Измельченную навеску лекарственного сырья (30 г сырого и 5 г сухого) заливают ацетоном (100 и 30 мл). Остаток промывают на фильтре дважды ацетоном. Ацетон отгоняют до 5 - 10 мл.

2.5.2. Очистка экстракта

Почва, зерно. Сконцентрированный экстракт переносят в бюкс, заполненный 5 - 10 г окиси алюминия. Колбу дважды смывают этилацетатом по 1 мл и также переносят в бюкс. Затем ставят бюкс на песочную баню (60 °C) и выдерживают до полного улетучивания этилацетата. Стеклянной палочкой тщательно перемешивают сорбент в бюксе и переносят в делительную воронку, в узкий конец которой помещают тампон из гигроскопической ваты. Для элюирования байфидана через колонку пропускают 400 мл воды. Скорость вытекания 120 кап./мин. Водный раствор экстрагируют хлороформом (3 раза по 50 мл), встряхивая каждый раз в течение 2 мин. Объединенный экстракт фильтруют через бумажный фильтр и безводный сернокислый натрий в грушевидную колбу и выпаривают на ротационном испарителе до 0,2 мл, а затем остаток высушивают током воздуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона.

Лекарственное сырье. К ацетоновому экстракту добавляют 5 мл

0,05 н и CaCl и ставят в морозильную камеру на 1 час. Затем

экстракт фильтруют через фильтр "синяя лента", добавляют 25 мл

воды и экстрагируют байфидан этилацетатом (3 раза по 25 мл).

Объединенный этилацетатный экстракт упаривают на ротационном

испарителе до объема 5 мл. Далее поступают, как при очистке почвы

и зерна. Остаток растворяют в 0,5 мл ацетона или спирта.

2.5.3. Условия газожидкостной хроматографии

Определение проводят на хроматографе "Цвет" с термоионным

детектором. Используют стеклянную колонку длиной 1 м, диаметром 3

мм, носитель - газохром (0,16 - 0,20 мм с 3% OV-17), температура

колонки - 230 °C, испарителя - 290 °C. Время удерживания - 1 мин.

30 сек. Линейность детектирования сохраняется в пределах 1 - 6 нг.

-10

Рабочая шкала 2 x 10 . Для колонки с 5% E-301 температура

испарителя 230 °C, температура колонки 210 °C, рабочая шкала ИМТ -

-10

2 x 10 . Время удерживания - 1 мин. 15 сек. Для обеих колонок

расход азота 75 мл/мин., воздуха - 150 мл/мин., водорода - 27

мл/мин. Скорость движения ленты самописца - 600 мм/час.

2.5.4. Условия хроматографирования в тонком слое

Определение байфидана проводят методом тонкослойной хроматографии на пластинках "Силуфол". С помощью микропипетки наносят на пластинку 0,1 мл экстракта. На расстоянии 2 - 3 см наносят 3 - 4 пятна стандартного раствора байфидана (1 мкг, 3 мкг, 5 мкг, 10 мкг). Пластинку хроматографируют в системе гексан:ацетон (3:2).

После того как фронт растворителя поднимается на 10 см,

пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе и опрыскивают

последовательно проявляющими реактивами 1 и 2. При наличии в пробе

байфидана появляется синее пятно. R препарата - 0,72.

2.6. Обработка результатов анализа

Газожидкостное определение

Количественное определение проводят методом соотношения со стандартом по высоте пика.

Для количественного определения измеряют высоту пиков проб и стандартных растворов. Содержание в пробе рассчитывают по формуле:

M x H x V

ст пр k

X = --------------,

H x V x M

ст x

где:

X - содержание в пробе, мг/кг или мг/л;

M - содержание в стандартном растворе, нг;

ст

H - высота пика стандартного раствора, мм;

ст

H - высота пика пробы, мм;

пр

V - объем конечного экстракта, мл;

V - объем экстракта пробы, введенного в испаритель, мкл;

M - навеска или объем пробы в г или мл.

Тонкослойная хроматография

Количественное определение содержания байфидана в пробах проводят путем сравнения интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандартных растворов.

Содержание препарата в пробе рассчитывается по формуле:

A x V

X = ------,

V x P

где:

X - содержание байфидана в пробе, мг/кг;

A - количество препарата, найденное путем визуального

сравнения со стандартным раствором, в мкг;

V - объем пробы перед нанесением на пластинку в мл;

V - объем раствора, нанесенного на пластинку, в мл;

P - навеска в г.

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.