Утверждены

Министерством здравоохранения СССР

29 июля 1991 г. N 6115-91

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ КАРТОЛИНА-2 В БИОСУБСТРАТАХ

МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

(Дополнение к N 4355 от 08.06.87)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика вещества

Краткая характеристика представлена во Временных методических указаниях.

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении препарата из биосубстрата растворителем, очистке экстрактов и хроматографировании в тонком слое пластинок "Силуфол" с подвижной фазой гексан - ацетон в соотношении 15:12. Места локализации препарата обнаруживают обработкой пластинок водно-аммиачным раствором азотнокислого серебра или реактивом Эрлиха.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода определения картолина-2 в биосубстратах представлена в таблице 1.

Таблица 1

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

КАРТОЛИНА-2 В БИОСУБСТРАТАХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ

(ПРИ P = 0,95, N = 20)

┌─────────────┬───────────────────────────────────────────────────────────┐

│Анализируемый│                Метрологические параметры                  │

│   объект    ├─────────────┬──────────────┬────────────┬─────────────────┤

│             │диапазон опр.│среднее значе-│стандартное │  доверительный  │

│             │концентраций,│ние процента  │отклонение, │интервал среднего│

│             │ мкг/г (мл)  │обнаружения, %│   +/- %    │   значения, %   │

├─────────────┼─────────────┼──────────────┼────────────┼─────────────────┤

│Кровь        │0,2 - 2,0    │77,4          │+/- 7,2     │15,5             │

│Легкие       │0,2 - 2,0    │74,1          │+/- 4,3     │9,2              │

│Селезенка    │0,2 - 2,0    │76,4          │+/- 5,9     │12,6             │

│Сердце       │0,2 - 2,0    │81,55         │+/- 4,2     │9,1              │

│Почки        │0,2 - 2,0    │76,25         │+/- 4,8     │10,2             │

│Печень       │0,2 - 2,0    │70,90         │+/- 3,2     │6,8              │

│Мозг         │0,2 - 2,0    │73,75         │+/- 4,4     │9,4              │

│Моча         │0,2 - 2,0    │65,20         │+/- 4,9     │10,4             │

│Кал          │0,2 - 2,0    │71,71         │+/- 3,8     │8,2              │

└─────────────┴─────────────┴──────────────┴────────────┴─────────────────┘

2.1.3. Избирательность метода

Определению не мешают хлорорганические и фосфорорганические пестициды, гербициды группы хлорзамещенных феноксиалканкарбоновых кислот и карбаматов.

2.2. Реактивы и материалы

Картолин-2, хч (содержание основного вещества не ниже 96%).

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79.

Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.

Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.

Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-74.

Кислота хлористоводородная, хч, ГОСТ 3118-77.

Натрий сернокислый безводный, хч, ГОСТ 4166-76.

Этанол, хч, ГОСТ 5962-81.

Бутанол, чда, ГОСТ 6006-78.

Фильтры бумажные "синяя лента", ТУ 6-09-1678-77.

Азотнокислое серебро, хч, ГОСТ 1277-81.

Аммиак концентрированный, хч, ГОСТ 3760-79.

Стандартные растворы картолина-2 в ацетоне с содержанием препарата 100 и 1 мкг/мл. Растворы хранить в холодильнике не более трех месяцев.

п-Диметиламинобензальдегид, ч, ТУ 6-09-3272-77.

Водно-аммиачный раствор азотнокислого серебра. 0,85 г азотнокислого серебра помещают в мерную колбу на 100 мл и растворяют в нескольких мл дистиллированной воды, прибавляют 2,5 мл концентрированного аммиака. Содержимое колбы перемешивают и доводят уровень раствора до метки дистиллированной водой. Хранить проявляющий раствор в темной склянке не более двух недель.

Реактив Эрлиха (модифицированный). 1 г п-диметиламинобензальдегида растворяют в смеси 30 мл этанола, 3 мл концентрированной хлористоводородной кислоты и 180 мл бутанола-1. Проявляющий раствор хранить в холодильнике три недели.

2.3. Приборы, посуда и аппаратура

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Колбы для отгонки растворителя, ГОСТ 25336-82.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 25336-82.

Пластинки "Силуфол" UV-254 (ЧССР), 15 x 15 см.

Колбы конические, ГОСТ 25336-82, на 100 мл.

Делительные воронки, ГОСТ 25336-82, на 250 мл.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, на 50, 100 и 250 мл.

Пипетки, ГОСТ 1770-74, на 1, 5 и 10 мл.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1 мл.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.

Воронки химические, ГОСТ 25336-82.

Ртутно-кварцевая лампа ПРК-4, ТУ 16-336-280-74.

Сушильный шкаф ШС-40М, МРТУ 42-1359-67.

2.4. Отбор проб

Пробы отбирают в лабораторных условиях и сразу же помещают в испарительную камеру холодильника (-5 - 8 °C). Образцы хранят на льду не более пяти суток.

2.5. Описание определения

2.5.1. Экстракция и очистка

Легкие, сердце, печень, селезенка, почки, мозг, кровь и кал. 5 г кала или биосубстрата, тщательно измельченного ножницами, или 5 мл крови помещают в коническую колбу на 100 мл, заливают 50 мл хлороформа и оставляют на 2 - 3 часа, периодически перемешивая. Хлороформ осторожно сливают через фильтр "синяя лента" со слоем безводного сульфата натрия в колбу для отгонки растворителя. Экстракцию повторяют еще 2 x 3 мл хлороформа и сливают туда же. Растворитель выпаривают досуха на ротационном испарителе при 60 - 70 °C и сухой остаток ацетонитрилом количественно переносят на пластинку для тонкослойного хроматографирования.

Моча. 5 мл мочи помещают в коническую колбу на 250 мл, разбавляют дистиллированной водой в соотношении 1:9 и подщелачивают 5% раствором едкого натра до pH 8. Сюда же добавляют 50 мл хлороформа и оставляют на 3 - 4 часа, периодически перемешивая. Растворитель отделяют от водной фазы в делительной воронке и сливают через слой безводного сульфата натрия в колбу для отгонки растворителя. Экстракцию повторяют 2 x 50 мл хлороформом. Объединенный экстракт выпаривают досуха на роторном испарителе и переносят ацетонитрилом на пластинку.

2.5.2. Условия хроматографирования

Пластинку "Силуфол" с нанесенными пробами и стандартами картолина-2 известных количеств помещают в хроматографическую камеру со смесью гексан:ацетон в соотношении 15:12. После поднятия фронта растворителя на 10 - 12 см пластинку достают и сушат на воздухе.

Пластинки проявляют водно-аммиачным раствором азотнокислого серебра или реактивом Эрлиха. При проявлении раствором азотнокислого серебра пластинку предварительно помещают под УФ-лампу на 30 - 40 мин. После опрыскивания реактивом Эрлиха пластинку нагревают в сушильном шкафу при 120 °C в течение 15 - 20 мин.

    Картолин-2  проявляется с R  = 0,66 +/- 0,02 в виде коричневых

                               f

пятен   при  проявлении  водно-аммиачным  раствором  азотнокислого

серебра и ярко-желтых - при проявлении реактивом Эрлиха.

2.6. Обработка результатов анализа

Количество препарата в пробе определяют сравнением площадей пятна пробы и стандартных растворов по формуле:

                                  A

                              X = -,

                                  P

где:

X - содержание препарата в пробе, мкг/г, мкг/мл;

A - количество препарата, найденное путем сравнения со стандартами, мкг;

P - масса (объем) пробы, взятая для анализа, г, мл.

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.