Утверждены

Министерством здравоохранения СССР

29 июля 1991 г. N 6113-91

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БИЦИКЛАДА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ

ХРОМАТОГРАФИЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ

(Дополнение к Методическим указаниям N 2085-79)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Бициклад - 0,0-диметил-0-(6-хлоробицикло/3,2,0/гептадиен-1,5-ил)фосфат. Относится к классу фосфорорганических инсектицидов.

Структурная формула:

    ┌───┬───┬┬───────OP (OCH )                         C H  ClO P.

    │   │   ││        ││    3 2                         9 12   4

    │   _____│        O

    \\ /     \                                         М.м. 250,5.

     \/       Cl

Синонимы - гептенофос, хостаквик.

Химически чистое вещество бициклада - жидкость, T кип. - 90 - 91 °C.

Препарат хорошо растворим в ацетоне, метаноле, ксилоле (при 25 °C до 1000 г/л), хуже - в н-гексане (130 г/л).

2. Методика определения

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении бициклада из сырья облепихи и шиповника 50% водным ацетоном. Очистка экстракта проводится ацетонитрилом и на колонке с активированным углем с последующим количественным определением методом ТСХ на пластинках "Силуфол".

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

    Минимально детектируемое количество            - 1,5 - 2,0 мкг

    Нижний предел обнаружения                      - 0,04 мг/кг

    Размах варьирования                            - 66 - 70%

    Среднее значение определения                   - 68,6%

    Стандартное отклонение                         - +/- 2,3%

    Доверительный интервал                         - +/- 5,74

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон ч, ГОСТ 2603-79.

Гексан ч, хч, ТУ 6-09-3375-78.

Ацетонитрил ч, ТУ 6-09-3534-74.

Хлороформ ч, ГОСТ 20015-74.

Натрий сернокислый безводный, свежепрокаленный, ГОСТ 4166-76.

Аммиак, 25% водный р-р, ч, ГОСТ 3760-79.

Серебро азотнокислое, ГОСТ 1277-81.

Пластинки "Силуфол" UV-254.

Уголь активированный ОУ-2.

Проявляющий реагент:

1. 0,25 г азотнокислого серебра растворяют в 2,5 мл дистиллированной воды, прибавляют 3,5 мл 25% раствора аммиака (плотностью 0,9 г/куб. см) и доводят объем до 50 мл ацетоном.

Стандартный раствор бициклада в гексане с содержанием 1 мг/мл. Хранят в холодильнике.

2.3. Приборы и посуда

Колбы плоскодонные 300 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы круглодонные со шлифами для отгонки растворителей, ГОСТ 25336-82.

Делительные воронки на 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Воронки, ГОСТ 25336-82.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74.

Колонки для адсорбционной хроматографии (300 x 15 мм).

Аппарат для встряхивания.

Испаритель ротационный вакуумный, МРТУ 42-2589-66.

Камера хроматографическая, ГОСТ 25336-82.

Микропипетки 0,1 - 0,2 мм, ГОСТ 20292-74.

Лампа УФ кварцевая, ТУ 16-535-280-74 или аналогичная.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.

2.4. Отбор проб и подготовка к определению

2.4.1. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с требованиями, изложенными в "Унифицированных правилах отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденных Минздравом СССР, N 2051-79, 21.08.1979.

Для анализа отбирают среднюю пробу.

2.4.2. Подготовка пластинок "Силуфол"

Перед нанесением экстракта пластинки "Силуфол" прогоняем в системе аммиак - ацетон (1:1).

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция. Анализируемые пробы - навески (5 г сухого, 50 г сырого сырья) помещают в конические колбы емкостью 300 мл, заливают 50 мл (сухое сырье) или 200 мл (сырое сырье) 50% водного ацетона и помещают на аппарат для встряхивания на 2,5 - 3 часа. Затем пробы фильтруют через бумажный фильтр, остаток в колбе и на фильтре промывают дважды 30 мл 50% водного ацетона. Водно-ацетоновые экстракты объединяют и переносят в делительную воронку. Бициклад из водного ацетона трижды экстрагируют хлороформом порциями по 30 мл. Далее хлороформную фракцию фильтруют в круглодонную колбу через безводный сернокислый натрий и хлороформ отгоняют на роторном испарителе при температуре 50 °C. К сухому экстрактному остатку приливают 5 мл ацетонитрила и встряхивают до полного растворения. Затем приливают 100 мл воды и трижды экстрагируют н-гексаном порциями по 30 мл. Собирают гексановую фракцию. Н-гексан отгоняют на роторном испарителе до 1 - 2 мл. Дальнейшую очистку проводят на колонке с активированным углем.

2.5.2. Очистка на колонке. Колонки диаметром 15 мм заполняют 2 г активированного угля и промывают 30 мл хлороформа, который отбрасывается. Хлороформный экстракт из круглодонной колбы переносят на колонку и элюируют 60 - 70 мл хлороформа.

2.5.3. Хроматографирование

    Хлороформ  отгоняют  на  ротационном испарителе, сухой остаток

растворяют  в  0,1  -  0,2  мл  н-гексана  и  наносят полностью на

хроматографическую  пластинку.  Параллельно  на  пластинку наносят

серию  стандартных  растворов бициклада с содержанием 2, 4, 5...10

мкг.  Пластинку  помещают  в хроматографическую камеру с подвижным

растворителем    гексан:ацетон   (2:1).   После   подъема   фронта

растворителя  на  10  см  пластинку извлекают из камеры и сушат на

воздухе.   После  испарения  растворителя  пластинку  обрабатывают

проявляющим реагентом и подвергают ультрафиолетовому облучению (20

мин.).  Бициклад проявляется в виде темных пятен на светлом фоне с

R  0,50 +/- 0,05. Линейный диапазон определения 2 - 10 мкг.

 f

2.6. Обработка результатов

Количественное определение бициклада проводят путем сравнения размера и интенсивности окраски пятен бициклада в рабочей пробе с пятнами стандарта.

Содержание препарата в анализируемой пробе рассчитывают по формуле:

                                  X

                              Y = -,

                                  M

где:

Y - искомое количество бициклада в пробе;

X - количество бициклада в навеске;

M - вес навески, кг.

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.