"Временные методические указания по определению экспромта в воде методом хроматографии в тонком слое" // Технорма.RU

Утверждены

Министерством здравоохранения СССР

29 июля 1991 г. N 6107-91

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЭКСПРОМТА В ВОДЕ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ

В ТОНКОМ СЛОЕ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика пестицида

Экспромт - смесь препаратов "хардин" (12,5% по мочевине) и "грамекс" (12,5% по мочевине) в соотношении 3:1 (весовые).

Действующее вещество хардина - комплекс диэтилэтаноламина и N-(2-хлор-бензол-сульфонил)-N'-(6-метокси-4-метил-1,3,5-триазин-2-ил)мочевины (хлорсульфурона).

Структурная формула:

┌─ ─┐ CH CH OH

│ CH │ 2 2

│ Cl 3 │ /

│ _____/ N_____/ │ /

│ // \\_SO NHCONH_// \\__N │N___C H

│ \ ___ / 2 \ ___ / │ \ 2 5

│ --- N --- \ │ \

│ OCH │ C H

│ 3 │ 2 5

└─ ─┘

Эмпирическая формула: C H ClN O S x C H NO.

12 12 5 4 6 15

Молекулярная масса 474,5.

Синонимы: глин, ХСТТ, хлорсульфурон.

Хардин - препарат, представляющий собой раствор действующего вещества в смеси вода - триэтиленгликоль (1:1, вес. %) с добавкой 0,4% ОП-10. Содержание комплекса в растворе 16,5 +/- 0,5% (вес.).

Плотность препарата при 20 °C - 1115 - 1125 кг/куб. м. Т. кип. - 100 °C, хорошо растворим в воде, в полярных растворителях коагулируется, с неполярными не смешивается, нелетуч, в водных растворах устойчив в течение года, при разбавлении водой на свету при pH 5 - 7 и 20 °C разлагается.

ОБУВ в воздухе - 5 мг/куб. м.

Хлорсульфурон - белое кристаллическое вещество. Эмпирическая

формула C H ClN O S, мол. масса 357,78. Т. пл. 174 - 178 °C.

12 12 5 4

Растворимость в толуоле - 0,3%, метаноле - 1,8%, ацетоне - 7,0%.

Препарат выпускается в виде аминных солей (диметиламинная,

изопропиламинная, моноэтаноламинная). Степень чистоты - 96 - 98%.

Действующее вещество препарата грамекс - комплекс

диэтилэтаноламина и N-O(метил-карбокси-сульфонил)-N'-(4-метил-6-

метокси-1,3,5-триазин-2-ил)мочевины (грамекса).

Структурная формула:

┌─ ─┐ CH CH OH

│ COOH CH │ 2 2

│ 3 3 │ /

│ _____/ N_____/ │ /

│ // \\_SO NHCONH_// \\N │N___C H

│ \ ___ / 2 \ ___ / │ \ 2 5

│ --- N --- \ │ \

│ OCH │ C H

│ 3 │ 2 5

└─ ─┘

Эмпирическая формула C H O N S x C H NO.

14 18 6 5 6 15

Молекулярная масса - 498,92.

Химически чистый грамекс - кристаллическое вещество

слабо-желтого цвета, без запаха. Т. пл. 162 - 164 °C.

Эмпирическая формула C H O N S, молекулярная масса - 381,36.

14 18 6 5

Препарат хорошо растворим в ацетоне. Степень чистоты - 99,1%.

Препарат "экспромт" представляет собой светло-желтую прозрачную жидкость со слабым аминным запахом, плотность - 1,116 г/куб. см, растворим в воде.

ДОК, ПДК, МДУ экспромта в настоящее время не установлены.

2. Методика определения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении хардина и грамекса (действующие вещества пестицида "экспромт") из подкисленной пробы воды хлороформом, концентрировании экстракта и хроматографировании его аликвоты в тонком слое пластин "Силуфол". В качестве подвижной фазы могут быть использованы: бензол - ацетон в соотношении 4:1 (объемн.), гексан - ацетон в соотношении 1:1 (объемн.), диэтиловый эфир.

Для обнаружения зон локализации препаратов на хроматограммах используют смесь растворов бромфенолового синего и азотнокислого серебра с последующей обработкой хроматограмм лимонной (или уксусной) кислотой. Количественное определение препаратов проводят сравнением интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандарта.

2.1.2. Метрологическая характеристика

Диапазон определяемых концентраций 0,005 - 0,02 мг/л.

Предел обнаружения - 0,5 мкг.

Размах варьирования: хардин - 80 - 100%,

грамекс - 80 - 100%.

Среднее значение определения стандартных количеств:

хардин - 90,0%,

грамекс - 92,0%.

Стандартное отклонение среднего:

хардин - +/- 0,61%,

грамекс - +/- 0,74%.

Относительное стандартное отклонение среднего:

хардин - 0,05,

грамекс - 0,052.

2.1.3. Избирательность метода

Метод специфичен. Другие соединения этого класса (круг, эллипс) в указанных условиях хроматографирования определению не мешают.

2.2. Реактивы и материалы

Хардин (хлорсульфурон), ВНИИХСЗР, 96 - 98%.

Грамекс, ВНИИХСЗР, 99,1%.

Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79.

Бензол, хч, ГОСТ 5955-81.

Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.

Этиловый спирт, 96-процентный, ТУ 6-09-1910-77.

Кислота хлористоводородная, ч, ГОСТ 3118-77; водный раствор (1:1).

Кислота уксусная, хч, ГОСТ 18290-72, 5-процентный водный раствор.

Кислота лимонная, хч, ГОСТ 3652-74, 2-процентный водный раствор.

Аммиак водный, чда, ГОСТ 3760-79.

Серебро азотнокислое, чда, ГОСТ 1277-81.

Бромфеноловый синий, чда, ТУ 6-09-3719-83.

Натрий сернокислый безводный, чда, ГОСТ 4166-76.

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

Пластинки "Силуфол" (Kavalier, ЧССР).

Вата гигроскопическая.

2.3. Приборы, посуда

Весы аналитические ВЛА-200М.

Испаритель ротационный ИР-1М, 25-11-917-74.

Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.

Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ 25336-82.

Колбы грушевидные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 50 - 100 мл.

Колбы мерные, цилиндры, мензурки, пробирки, ГОСТ 1770-74.

Колбы конические плоскодонные, ГОСТ 25336-82.

Воронки химические, диаметр 56 мм, ГОСТ 25336-82.

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 250 мл, 1 л.

Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 1; 5; 10 мл.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1; 0,2 мл.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.

Скальпель.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 25336-82.

Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Приготовление стандартных рабочих растворов хардина, грамекса

Стандартные растворы пестицидов концентрации 100 мкг/мл готовят растворением соответствующей навески препарата в ацетоне (или этиловом спирте) в мерной колбе на 100 мл. Растворы хранят в холодильнике. Годны к употреблению в течение 30 дней. Рабочие растворы пестицидов концентраций 2,5; 5,0; 10,0; 20,0 мкг/мл готовят в градуированных пробирках вместимостью 10 мл соответствующим разбавлением ацетоном стандартных растворов. Хранят рабочие растворы хардина, грамекса в холодильнике. Годны к употреблению в течение 3 - 5 дней.

2.4.2. Проявляющий реактив - бромфеноловый реагент

Смесь растворов бромфенолового синего (БФС) и азотнокислого серебра. Готовят два раствора: 1. 0,5% водно-ацетоновый (1:3) раствор азотнокислого серебра; 2. 10 мл 0,05-процентного раствора бромфенолового синего в ацетоне. Раствор 2 разбавляют раствором 1 до объема 100 мл. Хранят проявляющий реактив в темном прохладном месте. Годен к употреблению в течение 3 - 5 дней. После обработки хроматограмм бромфеноловым реагентом осветляют фон обработкой пластин 2-процентным водным раствором лимонной кислоты или 5-процентным водным раствором уксусной кислоты.

2.4.3. Подготовка пластин "Силуфол"

Пластинку "Силуфол" помещают в хроматографическую камеру, содержащую смесь растворителей ацетон - 25-процентный аммиак в соотношении 7:3 (об./об.) (глубина погружения пластинки в растворитель составляет 0,5 см). После подъема фронта растворителя до верхнего края пластинки ее вынимают из камеры и выдерживают на воздухе до испарения растворителей. После этого пластинка готова к употреблению. Хранят подготовленные пластинки в эксикаторе.

2.5. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (МЗ СССР, ГСЗУ, Москва, 1980, N 2061-79 от 21.08.1979).

Отобранные пробы хранить в стеклянной таре в защищенном от света месте не более 1 - 3 суток.

2.6. Проведение определения

2.6.1. Экстракция и очистка

На одно определение берут на анализируемый образец две пробы воды по 500 мл.

500 мл воды помещают в делительную воронку вместимостью 1 л, подкисляют до pH 2 разбавленной кислотой (берут 1 мл раствора кислоты) и экстрагируют препарат дважды свежими 10 - 15 мл хлороформа, каждый раз встряхивая содержимое воронки в течение 2 - 3 мин. Экстракты двух проб объединяют (получают 40 - 60 мл) в делительной воронке вместимостью 250 мл, промывают 10 - 15 мл дистиллированной воды, подкисленной до pH 6 разбавленной хлористоводородной кислотой, и фильтруют через слой (7 - 10 г) безводного сульфата натрия в химической воронке в грушевидную колбу. Растворитель отгоняют до объема около 1 мл на ротационном испарителе при температуре 55 - 60 °C. Остаток растворителя удаляют продуванием воздуха.

2.6.2. Хроматографирование

Сухой остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона (этанола),

закрывают колбу герметично пробкой, перемешивают содержимое и 0,2

мл полученного раствора наносят микропипеткой на подготовленную

пластинку "Силуфол". Рядом с пробой наносят по 0,2 мл каждого

рабочего раствора пестицидов, что соответствует содержанию в пятне

0,5; 1,0; 2,0; 4,0 мкг каждого препарата (растворы хардина и

грамекса одинаковой концентрации наносят в одну точку). Пластинку

помещают в хроматографическую камеру, куда за 10 - 15 мин. до

хроматографирования наливают один из подвижных растворителей,

указанных в таблице, в таком количестве, чтобы глубина погружения

пластинки в растворитель составила 0,5 см. После подъема фронта

растворителя от линии старта на высоту 10 см хроматографирование

прекращают. Пластинку выдерживают в вытяжном шкафу до испарения

растворителей и обрабатывают бромфеноловым реагентом, затем

раствором лимонной (или уксусной) кислоты. О наличии экспромта в

пробе свидетельствует проявление на хроматограмме серо-синего

пятна хардина либо пятен хардина и грамекса (в зависимости от

количества экспромта в пробе). Величины R хардина, грамекса

приведены в таблице.

Таблица

ВЕЛИЧИНЫ R ПРОИЗВОДНЫХ МОЧЕВИНЫ НА ПЛАСТИНКАХ "СИЛУФОЛ"

┌─────────────┬───────────────────────────────────────────────────────────┐

│ Соединение │ Подвижный растворитель │

│ ├─────────────────────┬─────────────────────┬───────────────┤

│ │бензол - ацетон (4:1)│гексан - ацетон (1:1)│диэтиловый эфир│

├─────────────┼─────────────────────┼─────────────────────┼───────────────┤

│Грамекс │0,28 │0,41 │0,70 │

│Хардин │0,33 │0,35 │нечеткое пятно │

│Круг │0,37 │0,53 │нечеткое пятно │

│Эллипс │0,43 │0,63 │нечеткое пятно │

└─────────────┴─────────────────────┴─────────────────────┴───────────────┘

2.7. Обработка результатов анализа

Количественная оценка хардина, грамекса, являющихся действующими веществами экспромта, проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен пробы и рабочих растворов пестицидов. Содержание каждого пестицида в анализируемой пробе рассчитывают по формуле:

A x V

X = ------,

V x P

где:

X - содержание хардина, грамекса в исследуемой пробе, мг/л;

A - количество хардина, грамекса, найденное путем сравнения со

стандартами, мкг;

V - объем рабочей пробы, мл;

V - объем аликвоты, отобранной для хроматографирования, мл.

При нанесении всей пробы V = V;

P - объем исследуемой пробы, мл.

3. Требования безопасности

Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях.