"Временные методические указания по определению глуфосинат аммония (баста) в воде и растительных культурах методом тонкослойной хроматографии" // Технорма.RU

Утверждены

Министерством здравоохранения СССР

29 июля 1991 г. N 6106-91

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ГЛУФОСИНАТ АММОНИЯ (БАСТА) В ВОДЕ И

РАСТИТЕЛЬНЫХ КУЛЬТУРАХ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика

Глуфосинат аммоний (баста), XOE 039866-DL-гомоаланин-4-ил-(метил)-фосфонат аммония (по номенклатуре ИЮПАК).

│ - +

CH P-CH -CH -CH-COOH/ NH C H N O P.

3 2 2 │ 4 5 15 2 4

\\ NH

O 2 М.м. 198,19.

Белое кристаллическое вещество, температура плавления 215 °C.

Растворим в воде, нерастворим в органических растворителях. ОДУ в воде водоемов 0,02 мг/л.

Гербицид для борьбы с широким спектром одно- и многолетних двудольных и злаковых сорняков в овощеводстве, виноградарстве, садоводстве.

2. Методика определения глуфосината аммония (баста) в воде

и растительных культурах <*>

--------------------------------

<*> Примечание: методика разрабатывалась на яблоках различных сортов, кожуре цитрусовых, травянистой растительности, хвое, зерне, картофеле; при определении в других культурах необходимо предварительно провести анализ контрольной пробы исследуемого продукта.

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на концентрировании водного экстракта, очистке и выделении глуфосината аммония на колонке с полисорбом и определении препарата из аликвоты подготовленного экстракта хроматографией на пластинках "Силуфол" с обнаружением басты по реакции с нингидрином.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Минимально детектируемое количество - 0,1 мкг.

Нижний предел определения:

вода - 0,025 мг/л

растения:

овощи, фрукты - 0,1 мг/кг

зерно - 0,2 мг/кг

зеленая масса (травянистая растительность, хвоя) - 0,5 мг/кг

Размах варьирования, %:

вода - 70 - 102

растения - 66 - 105

Среднее значение определения, %:

вода - 87

растения - 83

Стандартное отклонение, %:

вода - 5,6

растения - 6,4

Доверительный интервал среднего при p = 0,95, n = 5:

вода +/- 15,6

растения +/- 18

Поправочный коэффициент, учитывающий потери при концентрировании вымораживанием до 2 - 3 мл, равен 1,2.

2.1.3. Избирательность метода

Определению не мешают другие ФОП, в том числе водорастворимые, глифосат фосфамид. Определению могут мешать водорастворимые коэкстрактивные вещества, содержащие аминогруппу. В связи с этим проводится ТСХ-анализ контрольного образца исследуемой культуры, как описано ниже (п. 2.5.1).

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, хч, ГОСТ 2603-79.

н-Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.

Полисорб С-60/100, ТУ 6-05-211-1313-86.

Метанол, хч, ГОСТ 6995-77.

Аммиак водный, 25%, ч, ГОСТ 3760-79.

Этилацетат, хч, ГОСТ 22300-81.

Этанол 96%, ГОСТ 5962-81.

Медь сернокислая, чда, ГОСТ 19347-84, прокаленная при t = 160 °C до светло-голубого цвета.

Натрия хлорид, ч, ГОСТ 4233-77.

Диэтиловый эфир медицинский, ГОСТ 6265-74.

Вата обезжиренная (промытая эфиром).

Бинт или марля.

Глуфосинат аммоний с содержанием основного вещества не менее 99%.

Основной стандартный раствор (ОСР) глуфосината аммония: 100 мг вещества растворяют в 100 мл 1-процентного водного раствора аммиака. Раствор хранить в холодильнике не более 3-х месяцев.

Рабочие стандартные растворы 1 - 100, 2 - 10 мкг/мл, 3 - 1 мкг/мл готовят разведением ОСР 1-процентным раствором аммиака.

Растворы хранить в холодильнике не более 2-х недель.

Проявляющий реагент: 2-процентный раствор нингидрина в ацетоне. Хранить в темной склянке.

2.3. Приборы и посуда

Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-11081-83.

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М с набором колб, ТУ 25-11-917-74.

Вакуумный водоструйный насос.

Колба Бунзена емк. 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Воронка Бюхнера, d = 75 мм, ГОСТ 9147-80.

Электроплитка с закрытой спиралью.

Холодильник бытовой с морозильной камерой.

Колбы конические, 250, 50 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные, 100, 50 мл, ГОСТ 1770-74.

Цилиндры мерные,50,100 мл, ГОСТ 1770-74.

Пробирки мерные, 10 мл, ГОСТ 1770-74.

Выпарительные чашки 40 - 50 мл, ГОСТ 9147-80.

Колонки хроматографические, альфа = 18 мм, высота 20 см.

Пипетки на 1 - 10 мл, ГОСТ 1770-74.

Микропипетки на 0,1; 0,2 мл, ГОСТ 1770-74, или дозаторы пипеточные на 0,1; 0,2 мл, III, ТУ 84-1-3329-81, или шприц на 1 мл.

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в сельскохозяйственной продукции, продуктах питания и объектах окружающей среды", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979, N 2051-79.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция глуфосината аммония из воды и растений

Вода. 200 мл анализируемой пробы помещают в круглодонную колбу

емкостью 500 мл. Присоединяют колбу к ротационному испарителю,

помещают ее в баню с мелко раздробленным льдом с солью (10:3) <*>.

Вращают колбу на ротационном испарителе (без включения вакуума),

чтобы вода в колбе начала кристаллизоваться. Кристаллизацию

проводят до тех пор, пока в колбе не останется ~= 20 мл воды.

Оставшуюся воду переносят в отгонную колбу емкостью 50 - 100 мл и

продолжают кристаллизацию до тех пор, пока в колбе не останется 2

- 3 мл. Быстро сливают воду в мерную пробирку (V ). Либо

оставшуюся воду (~= 20 мл) сливают в выпарительную чашку и

упаривают на кипящей водяной бане до объема ~= 2 мл. (Осторожно!

Не выпаривать досуха, чашку периодически ополаскивают водой,

оставшейся в чашке.) Переносят оставшуюся воду в мерную пробирку.

Измеряют объем (V ). Отбирают 1 мл пробы, прибавляют к нему 1 мл

этанола и 1 мл (1,2 г) прокаленной сернокислой меди, перемешивают,

дают отстояться и аликвоту 0,1 - 0,3 мл наносят на

хроматографическую пластинку.

--------------------------------

<*> Примечание: приготовленную смесь лед с солью можно повторно заморозить в холодильнике, чтобы использовать в дальнейшем.

Растительные продукты. Овощи, фрукты, траву измельчают до 0,5 - 1 см, зерно до 2 - 3 мм (отсеивают от муки) и отбирают среднюю пробу: овощи, фрукты - 100 г, трава - 20 г, зерно - 50 г. Пробу помещают в плоскодонную колбу и заливают точно измеренным объемом воды: овощи, фрукты - 150 мл, траву, зерно - 100 мл. Встряхивают пробу в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Отбирают часть экстракта (овощи, фрукты - 80 - 90 мл, зерно, трава - 60 - 70 мл), фильтруя его под вакуумом водоструйного насоса в колбу Бунзена через двойной слой марли, вложенной в воронку Бюхнера. Из колбы Бунзена отбирают в цилиндр точно половину прибавленного к исследуемому образцу объема воды: овощи, фрукты - 75 мл (соответствует массе "P" - 50 г), трава, зерно - 50 мл (масса 10 и 25 г соответственно). Измеренный водный экстракт переносят в делительную воронку и промывают этилацетатом 2 x 30 мл; этилацетат (верхний слой) отбрасывают. Водный экстракт переносят в колбу для отгонки растворителей емкостью 100 - 150 мл и концентрируют вымораживанием до 2 - 3 мл, как описано для воды. Далее проводят очистку образца на колонке, как описано ниже.

Одновременно с анализируемым образцом подготавливают экстракт аналогичного контрольного образца.

Очистку экстрактов проводят на колонке с полисорбом.

Подготовка колонки. Колонку присоединяют к колбе Бунзена, соединенной с водоструйным насосом. В колонку помещают тампон из обезжиренной ваты, насыпают 15 куб. см полисорба, наливают 10 мл ацетона и включают водоструйный насос. Затем на слой полисорба помещают ватный тампон и промывают слой еще 40 мл ацетона при легком просасывании водоструйным насосом, чтобы полностью удалить ацетон. Затем насос отключают.

К подготовленному, как описано выше, экстракту (2 - 3 мл)

прибавляют 50 мл ацетона и хорошо перемешивают. Пропускают

полученный ацетоновый раствор через колонку под вакуумом

водоструйного насоса, промывают колонку 20 мл ацетона (под

вакуумом), затем 20 мл смеси ацетон - вода 9:1 (под вакуумом) и

весь элюат отбрасывают. Колбу отключают от вакуума, пропускают

через колонку 15 мл воды при прокапывании без отсоса. Когда над

слоем сорбента останется ~ 0,5 см воды, подключают колбу с

колонкой к водоструйному насосу. Сливают элюат из колбы в мерную

пробирку и измеряют точно объем - V - (должно быть ~ 10 мл).

Отбирают 1 мл экстракта, прибавляют к нему 1 мл этанола и 1 мл

(1,2 г) прокаленной сернокислой меди, перемешивают, дают

отстояться и аликвоту 0,1 - 0,2 мл анализируют методом ТСХ.

Примечание: можно (за исключением образцов, содержащих крахмал, например картофеля, зерна) вместо концентрирования вымораживанием использовать только способ концентрирования упариванием, но при этом использовать небольшие выпарительные чашки, а пробу доливать в чашку по мере упаривания. Упаривать осторожно, чтобы остаток в чашке каждый раз был не менее 2 мл. При этом способе концентрирования перед очисткой на колонке экстракт в чашке (2 - 3 мл) охлаждают 10 минут в холодильнике (t +4 - 6 °C). К охлажденному экстракту прибавляют ацетон, как описано ниже.

Одновременно готовят элюат контрольного образца. Из полученного контрольного элюата (10 мл) отбирают в две пробирки по 1 мл, в одну из которых прибавляют микропипеткой 1 мкг глуфосината аммония (0,1 мл рабочего стандартного раствора 2). Если нет возможности подготовить экстракт контрольного образца (см. п. 2.1.3), то обязательно от полученного элюата исследуемого образца отбирают 1 мл и прибавляют в него микропипеткой 1 мкг глуфосината аммония. Далее прибавляют по 1 мл этанола и поступают, как описано выше для исследуемого образца.

2.5.2. Тонкослойная хроматография

Пластинку "Силуфол" размером 15 x 15 см делят на 5 полосок

шириной 3 см. С нижнего края пластинки, на расстоянии 1,5 см от

края, по центру каждой полосы наносят микропипеткой (шприцом) или

пипеточным дозатором по 0,2 мл контрольного элюата, элюата с

внесенным глуфосинатом аммония, элюата исследуемого образца, 0,2

мл рабочего стандартного раствора 3, что соответствует 0,2 мкг, и

0,1 мл рабочего стандартного раствора 2, что соответствует 1 мкг.

Пластинку при нанесении проб и стандартов для более быстрого

испарения воды можно подогревать на электрогрелке. Когда вода

испарится, пластинку помещают в хроматографическую камеру, в

которую налита смесь метанол - аммиак (7:3). Дают растворителю

подняться на 10 см от старта и вынимают пластинку из камеры.

Помещают ее под УФ-свет на 25 минут, располагая на расстоянии 20

см от источника света. После облучения опрыскивают пластинку

проявляющим реагентом и помещают на 1 мин. в сушильный шкаф при

температуре 40 °C. Затем вынимают из шкафа и оставляют при

комнатной температуре (исключить прямое попадание солнечного

света). Через 5 - 7 минут проявляются сиренево-красного цвета

пятна глуфосината аммония с R 0,7 +/- 0,5, в том числе стандарт,

внесенный в контрольный экстракт (или элюат исследуемого образца).

Сразу после проявления стандартов проводится оценка содержания

пестицида в исследуемом образце.

Примечание: при увеличении температуры и времени прогрева, а

также при более длительном хранении (уже после проявления

стандартов) в некоторых образцах проявляются коэкстрактивные

вещества с R 0,68 +/- 0,05 и 0,72 +/- 0,05, 0,5 +/- 0,05.

2.6. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводится путем визуального

сравнения интенсивности окраски и размера пятен пробы и пятен

стандартных растворов. При этом следует обратить внимание на пятно

стандарта, содержащего 0,2 мкг, и пятно, где 0,2 мкг внесено в

пробу. Наиболее точно (ошибка +/- 11%) количественная оценка

достигается при концентрациях 0,2 - 1 мкг. При большем содержании

баста в исследуемом образце необходимо разбавить элюат (исходный

объем V = 10 мл) и повторить ТСХ-определение, как описано выше в

п. 2.5.2.

Расчет результатов содержания баста в образце проводят по

следующей формуле:

A x V x B x K

X = --------------,

V x P

где:

X - содержание баста в образце, мг/кг;

A - содержание баста, найденное в образце на пластинке, мкг;

V - общий объем водного элюата, мл;

B - кратность разведения V ;

V - объем этанольного экстракта, нанесенного на пластинку,

мл;

P - масса анализируемой пробы, мл или г (для растений с учетом

взятой аликвоты соответствует 1/2 навески);

K - коэффициент, учитывающий потери при концентрировании

вымораживанием до объема 2 - 3 мл, равен 1,2.

3. Техника безопасности

Соблюдаются обычные требования по технике безопасности, необходимые при работе с органическими растворителями, кислотами и щелочами.