"Временные методические указания по определению суми-альфа в биологическом материале методом газожидкостной хроматографии" // Технорма.RU

Утверждены

Министерством здравоохранения СССР

29 июля 1991 г. N 6101-91

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СУМИ-АЛЬФА В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ

МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Суми-альфа - S-альфа-циано-3-феноксибензил(S)-2-(4-хлорфенил)-

3-метилбутират. Суми-альфа представляет собой смесь изомеров,

обогащенную эсфенвалератом. Эсфенвалерат - оптический изомер

фенвалерата. Другим основным изомером суми-альфа является

(R)-альфа-циано-3-феноксибензил(S)-2-(4-хлорфенил)-3-метилбутират.

Суми-альфа - жидкость или твердое вещество коричневого цвета, без

специфического запаха. Т. кип. 225 °C/1,7 мм рт. ст., летучесть

-7

при 20 °C 1,44 x 10 мм рт. ст. Почти нерастворим в воде, менее

1,0 ч./млн. Растворимость в органических растворителях при 25 °C,

в % вес/объем: ксилол - 45,0; хлороформ - 45,0; ацетон - 45,0;

этилацетат - 45,0.

CH CH C H ClNO .

3 3 25 22 3

CH //\ //\ Мол. масса 419,9.

_____ │ // \ // \

Cl_// \\_CH___COOCH__│ ││-O-│ ││

\ ___ / │ \\ / \\ /

--- CN \\/ \\/

Предложен в качестве инсектицида для борьбы с вредителями

овощных культур, плодовых деревьев. ЛД для крыс 325 мг/кг (по

данным фирмы Сумитомо).

2. Методика определения суми-альфа

в биологическом материале

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на определении суми-альфа методом газожидкостной хроматографии после экстракции препарата из анализируемой пробы органическим растворителем и очистки экстрактов в системе жидкость - жидкость.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода определения суми-альфа (ГЖХ)

┌─────────────┬────────────┬─────────────┬─────────────┬──────────────────┐

│Анализируемый│ Размах │ Среднее │Относительное│ Доверительный │

│ объект │варьирования│ значение │ стандартное │интервал среднего,│

│ │ │ определения │ отклонение │ % │

├─────────────┼────────────┼─────────────┼─────────────┼──────────────────┤

│Кровь │64 - 72 │67,4 │4,99 │+/- 4,95 │

│Печень │59 - 64 │61,4 │4,5 │+/- 4,50 │

│Мозг │58 - 65 │62,0 │4,45 │+/- 4,49 │

│Сальник │66 - 69 │67,2 │2,03 │+/- 3,16 │

└─────────────┴────────────┴─────────────┴─────────────┴──────────────────┘

Диапазон определяемых концентраций 0,05 - 0,5 мг/кг (мг/л).

Предел обнаружения 0,005 мг/кг (мг/л).

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, осч 95, ТУ 6-09-3513-86.

Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.

Метанол, хч, ГОСТ 6995-77.

Трихлоруксусная кислота, ТУ 6-09-1926-77, 20%-ный водный раствор.

Сульфат натрия, ч, ГОСТ 4166-76, 5%-ный водный раствор.

Сульфат натрия безводный, ч, ГОСТ 4166-76.

Хроматон N-AW-HMDS (0,16 - 0,20 мм) с нанесенной неподвижной фазой SE-30 (Хемапол, ЧССР).

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Воздух из баллона или нагнетаемый компрессором.

Суми-альфа - 96,5%, фирма "Сумитомо".

Основной рабочий стандартный раствор суми-альфа, содержащий 100 мкг/мл суми-альфа, готовят следующим образом: растворяют 10,36 мг суми-альфа (96,5%) в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Стандартный рабочий раствор, содержащий 1 мкг/мл суми-альфа, получают соответствующим разбавлением основного рабочего раствора. Хранят в холодильнике не более 5-ти месяцев.

Уксусная кислота, хч, ГОСТ 61-69.

2.3. Приборы и посуда

Газовый хроматограф с детектором по захвату электронов (тип "Цвет-106" или др.).

Ротационный вакуумный испаритель для отгонки растворителей типа ИР-11, ТУ 25-11-917-76.

Микрошприцы МШ-10М, 10 мкл, ТУ 2-833-106.

Микроизмельчитель тканей, тип РТ-2, ТУ 64-1-1505-79.

Аппарат для встряхивания, ТУ 25-11-917-79, или аналогичный.

Центрифуга с числом оборотов до 6000 в мин.

Центрифуга ОПН-3442, ТУ 5-375-4260-76.

Посуда мерная, ГОСТ 1770-74.

Воронки делительные емкостью 200, 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы конические емкостью на 100, 300 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы грушевидные для отгонки растворителей, ГОСТ 25336-82.

Воронки конические, ГОСТ 25336-82.

Воронки Бюхнера, ГОСТ 25336-82.

Колба Бунзена, ГОСТ 25336-82.

Секундомер СД СПР 1.200, ГОСТ 5072-79.

2.4. Отбор, хранение и доставка проб

2.4.1. Пробы (кровь, печень, мозг, сальник, моча) отбирают в лабораторных условиях и сразу же помещают их в испарительную камеру холодильника. Хранят на льду не более 3 суток.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов

Биологический материал. Пробу биоматериала (кровь, печень, мозг, сальник, моча), предварительно измельченную ножницами, переносят в сосуд для гомогенизации и заливают 50 мл метанола или 50 мл смеси ацетон:вода (4:1). Биоматериал измельчают на микроизмельчителе тканей в течение 3 - 5 мин. при 3000 об./мин. Гомогенизированную пробу помещают в коническую колбу на 100 мл и экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 1 часа (дважды по 30 мин.). Объединенный экстракт фильтруют через воронку Бюхнера. Фильтрат обрабатывают 20%-ным раствором трихлоруксусной кислоты или уксусной кислотой по 1 мл на каждый грамм ткани или мл крови и 10 мл воды и смесь помещают в испарительную камеру холодильника на 1 час. Затем к охлажденной смеси прибавляют по 10 - 15 мл 5%-ного водного раствора сульфата натрия и центрифугируют при 4000 - 5000 об./мин. в течение 10 - 15 мин. или фильтруют через воронку Бюхнера в вакууме водоструйного насоса. Центрифугат экстрагируют гексаном (3 x 20 мл). Объединенные гексановые экстракты промывают дистиллированной водой, сушат безводным сульфатом натрия и упаривают растворитель на ротационном вакуумном испарителе. Последние порции растворителя удаляют при помощи сжатого воздуха. Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона, выдерживают в холодильнике 2 - 3 часа и затем центрифугируют при 2000 об./мин. в течение 15 мин. Полученный указанным способом центрифугат анализируют на газожидкостном хроматографе.

2.5.2. Идентификация и количественное определение суми-альфа.

2.5.3. Метод газожидкостной хроматографии

Носитель - хроматон N-AW-HMDS.

Неподвижная фаза - 5% SE-30.

Колонка стеклянная 0,5 м x 3 мм.

Скорость газа-носителя (азота) 60 куб. см/мин. ("Цвет-106").

Скорость азота для продувки детектора 150 мл/мин.

-12

Шкала электрометра 20 x 10 А.

Температура колонки 220 °C.

Температура испарителя 240 °C.

Вводимый объем 2 мкл.

Линейный диапазон детектирования 0,5 - 50 нг.

Минимально детектируемое количество 0,5 нг.

Время удерживания при указанных условиях 10,8 мин.

Количественное определение проводят методом соотношения со стандартом путем сравнения рассчитываемого пика с пиком, полученным введением известного количества стандартного вещества, при условии, что величина пиков находится в диапазоне линейности детектора. Содержание суми-альфа в анализируемой пробе определяют по формуле:

C x V x H x V

1 1 2

X = ----------------,

H x V x P

1 2

где:

X - содержание суми-альфа в пробе, мкг/г, мкг/мл;

C - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;

H - высота пика стандартного раствора, мм;

H - высота пика пробы, мм;

V - объем стандартного раствора, введенный в хроматограф,

мкл;

V - объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл;

V - общий объем экстракта после упаривания, мл;

P - навеска анализируемой пробы, г.

3. Техника безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими и токсическими веществами.