"Временные методические указания по определению кентавра в воде методом хроматографии в тонком слое" // Технорма.RU

Утверждены

Министерством здравоохранения СССР

29 июля 1991 г. N 6100-91

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ КЕНТАВРА В ВОДЕ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ

В ТОНКОМ СЛОЕ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Действующее вещество - этоксиэтиловый эфир 2-/4-(3,5-дихлорпиридил-2-окси)фенокси/пропановой кислоты.

Cl 3 C H Cl NO .

_____/ _____ │ 18 19 2 5

Cl_// \\__O__// \\__O-CH-COOCH CH OCH CH

\ ___ / \ ___ / 2 2 2 3 М.м. 400,28.

--- ---

Химически чистое соединение - кристаллическое вещество коричневого цвета с характерным запахом. Т. плавления 68 - 69 °C. Препарат нерастворим в воде, ограниченно растворим в этиловом спирте, хорошо растворим в ацетоне, ксилоле, хлороформе. Выпускается в виде 20-процентного к.э.

ДОК, ПДК, МДУ кентавра в настоящее время не установлены.

2. Методика определения

2.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении кентавра из пробы воды хлороформом, концентрировании экстракта и определении тонкослойной хроматографией.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Диапазон определяемых концентраций 0,003 - 0,02 мг/л.

Предел обнаружения - 0,5 - 1,0 мкг.

Размах варьирования - 76 - 80%.

Среднее значение определения стандартных количеств кентавра 78,5%.

Относительное стандартное отклонение среднего - 5,0%.

2.1.3. Избирательность метода

Метод специфичен. Гербициды, относящиеся к другим классам органических соединений, определению не мешают.

2.2. Реактивы и материалы

Кентавр (ВНИИХСЗР), 90%.

Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79.

Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.

Этилацетат, хч, ГОСТ 22300-76.

Кислота уксусная, хч, ГОСТ 18270-72, 5% водный раствор.

Кислота лимонная, хч, ГОСТ 908-79, 2% водный раствор.

Аммиак водный, чда, ГОСТ 3760-79.

Серебро азотнокислое, чда, ГОСТ 1277-81.

Бромфеноловый синий, чда, ТУ 6-09-4530-83.

Натрий сернокислый безводный, чда, ГОСТ 4166-76.

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

Пластинки "Силуфол" (ЧССР).

Вата гигроскопическая.

2.3. Приборы, посуда

Весы аналитические ВЛА-200М.

Холодильник бытовой.

Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.

Шкаф электрический сушильный, ТУ 64-1-1411-72.

Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ 10396-75.

Колбы грушевидные, ГОСТ 25336-62, вместимостью 50 - 100 мл.

Колбы мерные, цилиндры, мензурки, пробирки, ГОСТ 1770-74.

Колбы конические плоскодонные, ГОСТ 25336-82.

Холодильник, ГОСТ 25336-82.

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 1 л.

Воронки лабораторные, диаметр 56 мм, ГОСТ 25336-82.

Пипетки, ГОСТ 20292-74, вместимостью на 1; 5; 10 мл.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74, вместимостью на 0,1; 0,2 мл.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.

Скальпель.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 25336-82.

Камера для опрыскивания пластин, ТУ 25-11-430-70.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Приготовление стандартного раствора кентавра

10,2 мг (98-процентный препарат) кентавра помещают в мерную колбу на 100 мл, доводят ацетоном до метки. Получают раствор с концентрацией 100 мкг/мл. Годен к употреблению в течение 30 дней.

Рабочие растворы кентавра с концентрацией 2,5; 5,0; 10,0 мкг/мл готовят в градуированных пробирках с пришлифованной пробкой вместимостью 10 мл соответствующим разбавлением ацетоном стандартного раствора. Хранят рабочие растворы в холодильнике. Годны к употреблению 3 - 5 дней.

2.4.2. Приготовление растворов проявляющих реагентов, пластинок

1. Раствор азотнокислого серебра в аммиаке и ацетоне - 0,5 г азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, добавляют 12 - 15 мл аммиака (плотность 0,9 г/куб. см) и доводят объем жидкости до 100 мл ацетоном. Раствор хранят на холоде в затемненном месте. Срок хранения 7 - 10 дней.

2. Бромфеноловый реагент. Готовят два раствора. 1. 0,5-процентный водно-ацетоновый (1:3) раствор азотнокислого серебра. 2. 10 мл 0,05-процентного раствора бромфенолового синего в ацетоне. Раствор 2 разбавляют раствором 1 до объема 100 мл. Годен к употреблению в течение 5 - 7 дней.

После обработки пластин бромфеноловым реагентом осветляют фон обработкой слоя сорбента свежеприготовленным 2-процентным водным раствором лимонной кислоты или 5-процентным водным раствором уксусной кислоты.

3. Очистка натрия сернокислого безводного. Натрий сернокислый безводный (100 - 200 г) помещают в химический стакан, заливают очищенным п-гексаном (высота растворителя составляет 1,5 - 2 см над уровнем слоя) и выдерживают 10 - 15 мин., периодически перемешивая стеклянной палочкой содержимое стакана. Гексан отделяют декантацией. Обработку соли свежими порциями гексана повторяют 2 - 3 раза. Очищенный гексаном натрий сернокислый безводный переносят на воронку Бюхнера, отфильтровывают, выдерживают в вытяжном шкафу до удаления паров растворителя и высушивают в сушильном шкафу при температуре 110 - 120 °C в течение 3 - 4 часов. Хранят реактив без доступа влаги.

4. Подготовка пластин "Силуфол". Пластинку "Силуфол" помещают в хроматографическую камеру, содержащую смесь растворителей ацетон - 25-процентный аммиак в соотношении 7:3 (об./об.). Глубина погружения пластинки в растворитель составляет 0,5 см. После подъема фронта растворителя до верхнего конца пластинки ее вынимают из камеры и выдерживают на воздухе до испарения растворителей. После этого пластинка готова к употреблению. Хранят подготовленные пластинки в эксикаторе над слоем осушителя.

2.5. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (МЗ СССР, ГСЗУ, Москва, 1980, N 2061-79 от 21.08.79). Отобранные пробы следует хранить в стеклянной таре в защищенном от света месте не более 3 суток.

2.6. Проведение определения

2.6.1. Экстракция

На одно определение берут из анализируемого образца две пробы воды по 500 мл.

500 мл воды помещают в делительную воронку вместимостью 1 л и экстрагируют трижды свежими 15 мл порциями хлороформа, встряхивая каждый раз содержимое воронки в течение 2 - 3 мин. После четкого разделения фаз экстракт количественно фильтруют через очищенный безводный сульфат натрия в грушевидную колбу на 50 мл для отгонки растворителя на ротационном испарителе или водяной бане. Аналогично проводят обработку другой 500 мл порции воды. Вновь полученный экстракт пропускают через тот же безводный сульфат натрия в воронке в ту же колбу для отгонки растворителя. Растворитель испаряют до объема 1 - 1,5 мл при температуре 60 - 63 °C, остаток растворителя испаряют в токе сжатого воздуха досуха при комнатной температуре.

2.6.2. Хроматографирование

Сухой остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона, закрывают колбу герметично пробкой, перемешивают содержимое, оставляют стоять на 5 - 7 мин. и 0,2 мл полученного раствора наносят микропипеткой на очищенную пластинку "Силуфол". Рядом с пробой наносят по 0,2 мл каждого рабочего раствора кентавра, что соответствует содержанию в пятне 0,5; 1,0; 2,0 мкг препарата. Пластинку помещают в хроматографическую камеру, куда за 10 - 15 мин. до хроматографирования наливают смесь растворителей гексан - ацетон (4:1) (смесь 1) либо гексан - этилацетат (4:1) (смесь 2) в таком количестве, чтобы глубина погружения пластинки в растворитель составляла 0,5 см. После подъема фронта растворителя от линии старта на высоту 10 см хроматографирование прекращают. Пластинку выдерживают в вытяжном шкафу до испарения растворителей и обрабатывают одним из проявляющих реагентов. При обработке аммиакатом серебра пластинку орошают до влажного состояния, выдерживают в вытяжном шкафу 15 - 20 мин. (до исчезновения запаха аммиака) и подвергают УФ-облучению в течение 10 - 15 мин. (нефильтрованные УФ-лучи, лампа ПРК-4). Пластинку помещают на расстоянии 20 см от источника света. При наличии кентавра на хроматограмме проявляются пятна серо-черного цвета. Линейный диапазон определения 0,4 - 1,0 мкг.

После обработки пластинки бромфеноловым реагентом пластинку

опрыскивают раствором лимонной (или уксусной) кислоты. О наличии

кентавра в пробе свидетельствует появление в этом случае

серо-синего пятна на желтом фоне. Линейный диапазон определения 1

- 10 мкг. Величины R кентавра в указанных подвижных растворителях

следующие: гексан:ацетон (4:1) - величина R 0,44,

гексан:этилацетат (4:1) - величина R 0,40.

Примечание. При содержании кентавра в пробе больше 0,2 мг/л после испарения хлороформа сухой остаток в колбе растворяют в 2 мл ацетона и анализируют, как указано выше.

2.6.3. Обработка результатов анализа

Количественная оценка проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен пробы и рабочих растворов.

Содержание кентавра в анализируемой пробе рассчитывают по формуле:

A x V

X = -------,

P x 0,2

где:

X - содержание кентавра в исследуемой пробе, мг/л;

A - количество кентавра в пятне пробы, найденное путем сравнения со стандартами, мкг;

P - объем исследуемой пробы, мл;

V - окончательный объем экстракта пробы, мл;

0,2 - объем экстракта пробы, нанесенный на пластинку, мл.

3. Требования безопасности

Следует соблюдать требования безопасности, рекомендуемые при работе в химических лабораториях.