"Временные методические указания по хроматографическому определению ивина в биологическом материале" // Технорма.RU

Утверждены

Министерством здравоохранения СССР

29 июля 1991 г. N 6078-91

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ОПРЕДЕЛЕНИЮ ИВИНА

В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ

(Дополнение к "Методическим указаниям по хроматографическому

определению ивина в воде и овощах" N 4327-87 от 08.06.87)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Краткую характеристику препарата ивин см. во Временных методических указаниях.

2. Методика определения ивина в биологическом материале

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на извлечении ивина из проб органическим растворителем, кислотной очистке экстрактов, реэкстракции препарата и хроматографировании в тонком слое силикагеля. Зоны локализации препарата обнаруживаются: водным раствором крахмала после УФ-облучения и обработки пластинок парами иода, альтернативно реактивом Паули после УФ-облучения.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии близких по области применения и структуре следующих соединений: гидрела, дигидрела, хлорхолинхлорида, морфола, морфонола, алара, гибберелина и некоторых производных пиридина-нитрапирина, 6-хлорпиколиновоЙ кислоты, 2-пиколиновой кислоты, 2,6-дипиколиновой кислоты, 2,6-лутидина.

2.1.3. Метрологическая характеристика методики (n = 20, P = 0,95)

┌─────────────┬───────────────────────────────────────────────────────────┐

│Анализируемый│ Метрологические параметры │

│ объект ├────────────┬───────────┬─────────┬───────────┬────────────┤

│ │ предел │ диапазон │среднее │стандартное│доверитель- │

│ │обнаружения,│ опреде-х │значение │отклонение,│ный интервал│

│ │ мкг/г (мл) │ концен-й, │% опреде-│ % │среднего, % │

│ │ │мкг/г (мл) │ления │ │ │

├─────────────┼────────────┼───────────┼─────────┼───────────┼────────────┤

│Печень │0,2 │0,2 - 2 │84,5 │+/- 2,4 │+/- 5,2 │

│Почки │0,2 │0,2 - 2 │81,7 │+/- 2,2 │+/- 4,7 │

│Легкие │0,2 │0,2 - 2 │83,8 │+/- 2,4 │+/- 5,0 │

│Мозг │0,2 │0,2 - 2 │82,1 │+/- 1,9 │+/- 4,0 │

│Селезенка │0,2 │0,2 - 2 │85,7 │+/- 2,5 │+/- 5,3 │

│Сердце │0,2 │0,2 - 2 │84,7 │+/- 2,1 │+/- 4,5 │

│Кровь │0,2 │0,2 - 2 │86,4 │+/- 2,2 │+/- 4,7 │

│Моча │0,4 │0,4 - 2 │78,6 │+/- 2,1 │+/- 4,5 │

│Кал │0,4 │0,4 - 2 │77,7 │+/- 1,5 │+/- 3,2 │

└─────────────┴────────────┴───────────┴─────────┴───────────┴────────────┘

2.2. Реактивы и материалы

Ивин, хч. Стандартный раствор в хлороформе, содержащий 100 мкг/мл действующего вещества, хранить в холодильнике не более 3-х месяцев.

Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.

Натр едкий, хч, ГОСТ 4328-77, 15-процентный водный раствор.

Кали едкий, хч, ГОСТ 4203-65, 10-процентный водный раствор.

Хлористоводородная кислота, ч, ГОСТ 3118-77, 1М водный раствор.

Натрий сернокислый безводный, ч, ГОСТ 4166-76.

Пластинки хроматографические "Силуфол" UV-254 (ЧССР).

Бензол, хч, ГОСТ 5955-69.

Уксусная кислота лед., ГОСТ 61-75.

Иод кристаллический, чда, ГОСТ 4139-79.

Крахмал, ГОСТ 10163-76, 1-процентный водный раствор.

Сульфаниловая кислота, чда, ГОСТ 5821-78.

Натрий азотистокислый, хч, ГОСТ 4197-74.

Спирт этиловый, хч, ТУ 6-1710-77.

Диэтиловый эфир, ч, ГОСТ 6265-74.

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Ртутно-кварцевая лампа ПРК-2 или ПРК-4, ТУ 16-535-280-74.

Прибор для отгонки растворителей, ТУ 25-11-917-76, тип ИР-1М.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.

Колбы конические, ГОСТ 25336-82, на 100 мл.

Колбы круглодонные, ГОСТ 25336-82, на 100 мл.

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 250 мл.

Воронки химические, ГОСТ 25336-82.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1 мл.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, емк. 50, 100 мл.

Камера хроматографическая, ГОСТ 25336-82.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 25336-82.

Фильтры бумажные "синяя лента".

Камера с парами иода (10 - 20 г кристаллического иода помещают на дно герметически закрытой камеры).

2.4. Подготовка к определению

Приготовление проявляющего реактива Паули: к раствору 25 г сульфаниловой кислоты в 125 мл 10-процентного раствора кали едкого добавляют (при охлаждении) 100 мл раствора нитрита натрия, 40 мл концентрированной хлористоводородной кислоты и 20 мл воды. Полученную соль промывают последовательно ледяной водой, этанолом, диэтиловым эфиром и высушивают. При хранении в темной склянке в холодильнике соль устойчива несколько месяцев. Для опрыскивания готовят 0,1 г диазониевой соли в 20 мл 15-процентного раствора едкого натра. Раствор готовят перед употреблением.

2.5. Описание определения

2.5.1. Экстракция и очистка

5 г измельченного биологического материала (мозг, печень, почки, легкие, кал, сердце, селезенка) или 5 мл крови, мочи помещают в плоскодонную колбу и экстрагируют хлороформом трижды по 20 мл. Объединенные экстракты отфильтровывают через бумажный фильтр с безводным сернокислым натрием в колбу для выпаривания. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе досуха при температуре не выше 60 °C. К сухому остатку добавляют 10 мл 1М раствора хлористоводородной кислоты, тщательно смывая остаток со стенок колбы. Раствор фильтруют через фильтр "синяя лента" в делительную воронку. Колбу еще дважды ополаскивают по 5 мл 1М раствором хлористоводородной кислоты и сливают в ту же воронку.

Кислотный экстракт нейтрализуют 15% раствором едкого натра и реэкстрагируют ивин хлороформом 3 x 30 мл. Хлороформный экстракт высушивают безводным сернокислым натрием и отгоняют растворитель на ротационном испарителе досуха при температуре не выше 60 °C.

2.5.2. Хроматографирование и проявление

После отгонки растворителя остаток с помощью хлороформа количественно наносят на пластинку "Силуфол" (ЧССР) на расстоянии 1 см от нижнего края пластины. Сначала хроматографирование проводят в бензоле. При этом ивин остается на старте, а примеси, содержащиеся в пробе, продвигаются вверх. Пластинку высушивают на воздухе и проводят вторичное хроматографирование в том же направлении в смеси бензол - уксусная кислота в соотношении 1:1,5. После хроматографирования пластинку высушивают и выдерживают под ртутно-кварцевой лампой в течение 10 - 15 минут.

Затем пластинку или помещают в камеру с парами иода и

обрабатывают раствором крахмала, или сразу обрабатывают реактивом

Паули. Зоны локализации ивина обнаруживаются в виде синих пятен

(пары иода - крахмала) или в виде розовых пятен (реактив Паули) с

величиной R 0,58 +/- 0,02.

2.6. Обработка результатов анализа

Количественная оценка проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски проб и стандартных растворов.

Содержание ивина в пробе определяют по следующей формуле:

A x S

X = ------,

P x S

где:

X - содержание ивина в пробе, мг/г (мл);

A - количество ивина, содержащегося в пятне стандартного

раствора, мкг (в диапазоне линейности);

S - площадь пятна стандартного раствора, кв. мм;

S - площадь пятна пробы, кв. мм;

P - количество анализируемой пробы, г (мл).

3. Требования техники безопасности

Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях, а также правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях, отделениях, отделах санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР (N 2455-81 от 20.10.81).