Утверждены

Министерством здравоохранения СССР

29 июля 1991 г. N 6075-91

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДИМИЛИНА В ЯБЛОКАХ

ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ

(Дополнение к N 9481-81 от 22.10.1981)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

Название по номенклатуре ИСО, СЭВ - дифлюбензурон.

Химическое название N-(2,6-дифторбензил)-N-(4-хлорфенил).

     _____F           _____                         C  H ClF N O .

    //   \\ CONHCONH //   \\Cl                       14 9   2 2 2

    \ ___ /          \ ___ /

      --- F            ---                          М.м. 310,7.

    В чистом виде кристаллы белого цвета с Т. пл. 230 - 230 °C.

                                             -8

    Давление паров при °C 0,013 мПа (9,8 x 10   мм рт. ст.).

    Растворимость  в  воде  при  20  °C  0,1  мг/л,  в  неполярных

растворителях  -  10  г/л,  в  ацетоне  -  6,5  г/л  при  25 °C, в

диметилформамиде - 104 г/л, диоксане - 20 г/л.

    ЛД    орально  для  мышей и крыс 4640 мг/кг, для кроликов 2000

      50

мг/кг. СК   для рыб 130 - 140 мг/л.

         50

В США МДУ в пищевых продуктах 0,05 мг/кг. Допустимое суточное потребление (ADJ) 0,02 мг/кг. В СССР МДУ в яблоках 0,1 мг/кг.

Применяется в качестве инсектицида на яблонях, цитрусовых, овощах.

2. Методика определения димилина в яблоках

тонкослойной хроматографией

2.1. Основные положения

2.1.1. Метод основан на извлечении димилина из яблок смесью гексан - ацетон, очистке экстракта кислотно-щелочным перераспределением димилина и определении тонкослойной хроматографией на пластинках "Силуфол".

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Диапазон измеряемых концентраций - 0,03 - 3,30 мг/кг.

Предел обнаружения в хроматографируемой пробе - 0,2 мкг.

Предел обнаружения в яблоках - 0,03 мг/кг.

Среднее значение определения стандартных количеств димилина в яблоках при n = 15 +/- 10%.

Доверительный интервал среднего определения при n = 5 и p = 0,95 87 +/- 12%.

Размах варьирования R 70 - 100%.

2.1.3. Избирательность метода

Метод селективен. Избирательность метода обеспечивается сочетанием двух систем подвижных растворителей различной полярности и двух проявляющих реагентов.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79.

Этилацетат, хч, ГОСТ 22300-76.

Гексан, чда, ТУ 6-09-3375-78.

Бензол, чда, ГОСТ 5955-75.

Хлороводородная кислота, HCl, чда, ГОСТ 3118-74, концентрированная.

Гидроксид калия, ч, ГОСТ 24363-80.

Гидроксид натрия, NaOH, ГОСТ 11078-78, очищенный 4 н раствор.

Сульфат натрия, хч, ГОСТ 4166-76, безводный.

о-Толидин, ч, ТУ 6-09-299-73.

Калий йодистый, KI, хч, ГОСТ 4232-74.

    Натрий нитрит, Na NO , ГОСТ 4197-74.

                     2  3

    Уксусная кислота, ГОСТ 61-75, ледяная.

    а-Нафтол, чда, ГОСТ 5838-79.

    Калий марганцевокислый, KMnO , ч, ГОСТ 20490-76.

                                4

Проявляющий реагент N 1. Растворяют 0,16 г о-толидина в 30 мл ледяной уксусной кислоты, добавляют 1 г KI и доводят до 500 мл дистиллированной водой. Раствор хранить в темном месте. Срок годности 2 недели. На обработку одной хроматограммы идет около 1 мл реагента.

Проявляющий реагент N 2. Раствор А. К смеси, состоящей из 46 мл воды и 4 мл концентрированной HCl, добавляют 1,5 г нитрита натрия. Раствор Б. Растворяют 2,8 г KOH в 50 мл дистиллированной воды и прибавляют 0,3 г а-нафтола.

Растворы А и Б готовят перед использованием.

Стандартный раствор димилина в ацетоне с содержанием 1000 мг/мл (раствор 1) и 10 мкг/мл (раствор 2).

Стандартные растворы димилина стабильны при хранении в холодильнике в течение 6 месяцев.

Пластинки "Силуфол", производства "Хемапол", ЧССР, размером 150 x 150 мм.

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Камеры хроматографические, стеклянные, с пришлифованными крышками, ГОСТ 25336-82Е, или аналогичные.

Лампа УФ-света, ртутно-кварцевая, с широким диапазоном волн, ТУ 46-22-236-79, или аналогичная.

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76, или аналогичный.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 25336-82.

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82Е.

Колбы плоскодонные, ГОСТ 25336-82, вместимостью 500, 250 мл.

Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, вместимостью 100 и 500 мл.

Пипетки с делениями, ГОСТ 20292-74Е.

Пробирки градуированные с пробками на шлифах, ГОСТ 1770-74Е, вместимостью 5 мл.

Эксикатор, ГОСТ 25336-82Е, вместимостью не менее 2 л.

Микрошприц на 100 мкл или микропипетка, ГОСТ 20392-74Е, на 0,1 мл.

2.4. Подготовка к определению

Хроматографическую камеру за один час до начала хроматографирования заполняют смесью подвижных растворителей гексан:ацетон (2:1) и бензол:этилацетат (6:1) для насыщения камер парами подвижного растворителя. Объем подвижного растворителя в камере должен по высоте находиться не выше чем на 0,7 - 1,0 см от уровня дна камеры.

    Камеру  для  хроматографирования готовят следующим образом: на

дно  эксикатора  помещают  чашку  Петри  с 5 г KMnO , а затем к ее

                                                   4

содержимому  осторожно  приливают  15  мл  концентрированной  HCl.

Камеру   закрывают   прошлифованной  крышкой.  Камера  может  быть

использована через 5 - 10 минут.

2.5. Отбор проб

Отбор проб проводится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР 21.08.1979, N 2051-79.

2.6. Проведение определения

Пробу измельченных яблок (30 г) помещают в плоскодонную колбу вместимостью 500 мл, добавляют 70 мл смеси гексана с ацетоном (2:1) и 0,2 мл концентрированной HCl. Димилин экстрагируют при помощи механического встряхивания колбы в течение 30 мин. Экстракт пропускают через пористый фильтр со слоем безводного сульфата натрия в плоскодонную колбу вместимостью 500 мл. Экстракцию димилина повторяют еще два раза тем же количеством растворителя. Объединенный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (N 10 г), а затем фильтруют через пористый фильтр в круглодонную колбу вместимостью 500 мл. Сульфат натрия промывают 2 - 3 раза смесью гексан - ацетон (2:1) общим объемом N 10 мл и полученный раствор также переносят в круглодонную колбу. С помощью ротационного вакуумного испарителя полностью отгоняют растворитель. Остаток из колбы количественно с помощью 10 мл ацетона переносят в делительную воронку на 500 мл, добавляют 250 мл дистиллированной воды и около 0,5 мл 4 н NaOH до pH 10. Экстракт промывают три раза гексаном, порциями по 50 мл. Гексановую фазу отбрасывают. К водной фазе пипеткой добавляют около 0,5 мл концентрированной HCl до pH 1. И трижды экстрагируют димилин гексаном, порциями по 50 мл. Объединенный гексановый экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (~ 5 г), а затем порциями фильтруют в грушевидную колбу вместимостью 50 мл. Каждую порцию концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 1 - 2 мл. Последнюю порцию гексана удаляют полностью. К сухому остатку пипеткой добавляют 1 мл гексана. Колбочку закрывают пробкой на шлифе и тщательно обмывают стенки колбы растворителем. Для хроматографирования отбирают с помощью микрошприца на 100 мкл или микропипеткой на 0,1 мл аликвотную часть раствора (0,1 - 0,2 мл) и наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол". Справа и слева от рабочей пробы таким же образом по 0,1 мл наносят серию стандартных растворов с содержанием 0,2; 0,4; 0,6...1,0 мкл димилина, подготовленных следующим образом: в ряд градуированных пробирок вместимостью 5 мл пипеткой на 1 мл из стандартного раствора N 2 переносят 1, 2, 3... мл и доводят до метки гексаном.

Хроматограмму развивают в системе гексан:ацетон (2:1) или бензол:этилацетат (6:1). После развития хроматограмму на 15 минут помещают под лампу УФ-света, затем после полного выветривания паров хлора хроматограмму обрабатывают проявляющим реагентом N 1.

    Димилин на  хроматограммах  проявится в виде темно-серых пятен

сначала  на  белом, а затем на бежевом фоне с R  0,40 +/- 0,05 - в

                                               f

первой  системе  подвижных  растворителей  и  0,35  +/-  0,02 - во

второй.   Линейный   диапазон   определения   0,2   -  1,0  мкг  в

хроматографируемой  пробе.  Пятна  стабильны  в течение нескольких

месяцев.

В качестве альтернативного проявления используют проявляющий реагент N 2. Хроматограмму после облучения в УФ-свете последовательно обрабатывают растворами А и Б. Димилин проявляется в виде красных пятен на бледно-желтом фоне. Линейный диапазон определения - 0,5 - 10 мкг. Пятна стабильны в течение длительного времени.

2.7. Обработка результатов анализа

Количественное определение димилина в анализируемой пробе проводят путем сравнения площадей и интенсивности пятен рабочей пробы и серии стандартных растворов и содержание его (X) в мг/кг вычисляют по формуле:

                           A x V

                       X = ------ (мг/кг),

                           V  x P

                            а

    где:

    A - количество димилина, найденное в хроматографической пробе,

мкг;

    V - общий объем раствора, мл;

    V  - объем аликвоты, взятой для хроматографирования, мл;

     а

    P - навеска анализируемой пробы, г.

3. Требования безопасности

Соблюдать все необходимые требования безопасности, принятые для работы с пестицидами и горючими растворителями.