"Методические рекомендации по проведению бактериологических исследований при пищевых отравлениях" // Технорма.RU

Утверждаю

Начальник Главного управления

эпидемиологии и гигиены

Министерства здравоохранения РСФСР

Р.И.ХАЛИТОВ

17 августа 1990 года

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПО ПРОВЕДЕНИЮ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

ПРИ ПИЩЕВЫХ ОТРАВЛЕНИЯХ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны специалистами Красноярской краевой санэпидстанции и одобрены Лабораторным Советом при Главном управлении эпидемиологии и гигиены Минздрава РСФСР 28.05.90.

Настоящие Методические рекомендации разработаны на основании нормативно-технических документов:

1. Инструкция о порядке расследования, учета и проведения лабораторных исследований в учреждениях санитарно-эпидемиологической службы при пищевых отравлениях, утв. МЗ СССР 20 декабря 1973 г. N 1135-73.

2. Методические указания по диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями, утв. МЗ СССР 17 декабря 1984 г. N 04-23/3-84.

3. Письмо ГСЭУ МЗ РСФСР по количественному определению стафилококков в пищевых продуктах, N 08 с/б-3-1310 от 14.06.75.

4. ГОСТ 10444.7-86 "Продукты пищевые. Методы выявления ботулинических токсинов и C. botulinum".

5. ГОСТ 10444.9-88 "Продукты пищевые. Метод определения C. perfringens".

6. ГОСТ 10444.8-88 "Продукты пищевые. Метод определения B. cereus".

Настоящие Методические рекомендации имеют цель при ограниченных возможностях лабораторий выполнить максимальный объем исследований по сокращенной схеме на все потенциально опасные, известные виды микроорганизмов - возбудителей пищевых отравлений (при наличии методик исследований) качественно или количественно. Для эффективного использования результатов бактериологических исследований при пищевых отравлениях необходимо иметь в виду:

1. Не следует направлять на бактериологическое исследование продукты и другие материалы, неблагоприятные по своей природе для развития микроорганизмов (продукты, содержащие высокие концентрации сахара, соли, а также крупы, хлеб, сало, при подозрении на ботулизм - продукты, хорошо аэрируемые и т.п.).

2. В сопроводительном документе к материалам, направляемым на бактериологическое исследование, необходимо указать предполагаемый диагноз (этиологию отравления) и цель исследования (на какие группы возбудителей проводить исследование).

3. Материалы от пострадавших забирают и направляют на бактериологическое исследование в соответствии с клиникой заболевания и его патогенезом: так при подозрении на стафилококковую этиологию от пострадавших нецелесообразно забирать кровь на гемокультуру и серологические исследования; при подозрении на ботулизм - нецелесообразно направлять материалы для исследования на патогенные и условно-патогенные энтеробактерии и т.д.

4. Определение абсолютных патогенов (шигелл, сальмонелл, возбудителей ботулизма и др.) во всех материалах проводят качественно: определение условно-патогенных возбудителей (энтеробактерии, стафилококк, B. cereus, Cl. perfringens и др.) в некоторых материалах от больных (фекалии, мазки из зева и носа на стафилококковое носительство) и пищевых продуктах - количественно; в смывах - качественно.

5. Исследование проб воды, пищевых продуктов целесообразно проводить на соответствие ГОСТов, др. НТД (при соблюдении правил хранения и реализации) и параллельно на патогенную и условно-патогенную микрофлору в зависимости от цели исследования, указанной в направлении. Суточные пробы пищевых продуктов исследуют только на патогенную микрофлору.

Отбор проб, их доставку и подготовку к исследованию проводят по Инструкции МЗ СССР ... N 1135-73.

6. При выделении однотипных культур из материалов от больных и из внешней среды проводят их углубленное изучение с целью установления идентичности (определяют серо-, био-, фаго-, колициновары, антибиотикорезистентность, термоустойчивость и другие эпид. маркеры).

7. Обращаем внимание, что предлагаемые схемы рассчитаны на проведение бактериологических исследований. Поэтому необходимость проведения серологических исследований устанавливается в каждом конкретном случае по показаниям.

Настоящие Рекомендации включают 2 раздела:

1. Исследование проб пищевых продуктов (Приложение N 1).

2. Исследование материалов от пострадавших (Приложение N 2).

Приложение N 1

ИССЛЕДОВАНИЕ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ

Готовят исходное разведение продукта 1:10 (для твердых продуктов: 15 г

продукта + 135 мл 0,1-процентной пептонной воды или физ. раствора, для

жидких продуктов: 10 мл продукта + 90 мл 0,1-процентной пептонной воды или

физ. раствора) и из него в 9 мл 0,1-процентной пептонной воды или физ.

-3 -5

раствора два дополнительных разведения 10 и 10 .

При целенаправленном исследовании на C. perfringens дополнительно

-8 -9 -10

готовят разведения 10 , 10 , 10 .

Посев в среды обогащения проводят в больших объемах: 25 мл/г цельного продукта (для твердых продуктов необходимо предварительно размельчить в ступке) в 100 мл хлористо-магниевой среды обычной концентрации или 25 мл хлористо-магниевой среды двойной концентрации.

5 мл/г - в 25 мл желчного бульона, 30 мл/г - в 120 - 150 мл среды Китт-Тароцци и т.д.

Исследование на C. botulinum и C. perfringens проводят по клинико-эпидемиологическим показаниям.

Дальнейший ход исследования и идентификацию на все виды возбудителей проводят в соответствии с вышеперечисленной НТД.

ПРИМЕРНАЯ СХЕМА ПОСЕВА ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ

Твердый продукт Жидкий продукт

││ ││

┌───────────┐ 25 гр ││ ││ 25 мл ┌────────────┐

│100 мл │<─────────┤│ │├───────>│ 100 мл ХМ │

│хлористо- │ ││ ││ │ обычн. │

│магниевой │ ││ ││ │концентрации│

│обыч. конц.│ 15 гр продукта + 135 мл 10 мл прод. + 90 мл │ или 25 мл │

└───────────┘ 0,1-процентного ПВ 0,1-процентного ПВ │ двойной │

или физ. р-ра или физ. р-ра └────────────┘

┌──────────────┐ ││ ││ 5 мл ┌──────────────┐

│ 5 мл │ 5 гр ││ │├──────>│ 25 мл │

│10-процентного│<──────┘│ │└────┐ │10-процентного│

│ желч. бульона│ \/ \/ │ │ желч. б-на │

└──────────────┘ ┌────┐ 0,1 мл 0,1 мл ┌────┐ │ └──────────────┘

┌───────────┤ -1├─────────┬──────────┤ -1│ │

│ │10 │ │ │10 │ │

│ по 0,1 мл └────┘ │ └────┘ │ по 0,1 мл

\/ │ \/

──┬─────┬─────┬─── │ ──┬─────┬─────┬───

\/ \/ \/ ┌──┴─┐ \/ \/ \/

┌────┐┌─────┐┌───┐ ┌──────┤ │ ┌────┐┌─────┐┌───┐

│Эндо││Плоск││ВСА│ │ ├────┤ │Эндо││Плоск││ВСА│

└────┘└─────┘└───┘ │ │ -3│ └────┘└─────┘└───┘

по 0,1 мл │ │10 │

┌─────────────┘ └──┬─┘

\/ │ 9,9 мл 0,1-процентного

──┬─────┬───┬────┬────┬──── │ ПВ или физ. р-ра

\/ \/ \/ \/ \/ │

┌────┐┌───┐┌──┐┌───┐┌─────┐ │ 0,1 мл

│Эндо││ЖСА││КА││МИС││ЖАМПФ│ │

└────┘└───┘└──┘└───┘└─────┘ \/

┌────┐ по 0,1 мл

│ ├────────────────┐

├────┤ \/

│ -5│ ──┬─────┬───┬────┬────┬────

│10 │ \/ \/ \/ \/ \/

9,9 мл 0,1-процентного└────┘ ┌────┐┌───┐┌──┐┌───┐┌─────┐

ПВ или физ. р-ра │Эндо││ЖСА││КА││МИС││ЖАМПФ│

└────┘└───┘└──┘└───┘└─────┘

Примечание: 1. При отсутствии среды МИС идентификацию энтерококков возможно проводить со среды КР.

2. При отсутствии среды ЖАМПФ (желточный агар с маннитом, полимиксином и феноловым красным) идентификацию B. cereus возможно проводить со среды ЖСА.

Приложение N 2

ИССЛЕДОВАНИЕ МАТЕРИАЛОВ ОТ ПОСТРАДАВШИХ

1. Кровь засевают в питательную среду (Раппопорт и др.) в соотношении 1:10 (5 мл на 45 мл среды).

Термостатируют 10 дней при 37 °С, делая высевы на среду Эндо через 18 - 24 часа, на 3, 4, 6, 10 сутки. При наличии роста работают по общепринятой методике.

2. Мочу центрифугируют, засевают осадок в 5 мл хлористо-магниевой среды обычной концентрации (или 10 мл мочи на 10 мл среды двойной концентрации), через 18 - 20 часов инкубации при 37 °С делают высев петлей на ВСА (48 часов при 37 °С).

При наличии подозрительного роста идентификацию проводят по общепринятой методике.

3. Желчь засевают в количестве 5 мл на 45 - 50 мл МПБ (1:10), помещают на 7 суток в термостат при 37 °С и делают высевы через 18 - 20 часов и 3, 5, 7 сутки на среду Эндо. При наличии подозрительного роста работают по общепринятой методике.

4. Промывные воды желудка после нейтрализации (1 мл 10-процентной соды на 10 мл пробы) засевают по 0,1 мл на плотные чашечные питательные среды Эндо (Левина), Плоскирева, ЖСА, КА и в среды обогащения (хлористо-магниевая, желчный бульон, солевой бульон, сахарный бульон) в соотношении 1:5 - 1:10 (1 мл на 4 - 5 мл среды).

Дальнейшее исследование проводят в зависимости от характера роста по общепринятой методике.

5. Рвотные массы после нейтрализации, испражнения.

Готовят на 0,1-процентной пептонной воде или физ. растворе 10-кратные

-1 -3 -5

разведения: 10 , 10 , 10 , для исследования на C. perfringens

-8 -9 -10

дополнительно: 10 , 10 , 10 и далее проводят посевы:

5.1. На шигеллы и сальмонеллы:

-1

по 0,1 мл из 10 на среды Эндо (Левина), Плоскирева, ВСА и в среды

-1

обогащения: по 0,3 - 1,0 мл из 10 на 2,5 - 5 мл хлористо-магниевой среды

(селенитовой).

-3 -5

5.2. На S. aureus: по 0,1 мл из 10 и 10 на ЖСА.

-3 -5

5.3. На B. cereus: по 0,1 мл из 10 и 10 на желточный агар с

маннитом, полимиксином и феноловым красным (ЖАМПФ), при отсутствии - на

ЖСА.

5.4. На энтерококки:

-3 -5

по 0,1 мл из 10 и 10 на МИС, при отсутствии - на КА.

-3 -5

5.5. На условно-патогенные энтеробактерии: по 0,1 мл из 10 и 10 на

Эндо.

-8 -9 -10

5.6. На C. perfringens по 1 мл из 10 , 10 , 10 в пробирки с 8 - 9

мл среды Вильсон - Блера.

5.7. На C. botulinum:

-1

по 3 - 5 мл из 10 в 4 флакона (пробирки) с 30 - 50 мл среды

Китт-Тароцци (при отсутствии среды возможно применение среды для контроля

стерильности).

Примечание: посевы на Cl. perfringens и Cl. botulinum проводят только по клинико-эпидемиологическим показаниям, о чем должна быть сделана запись в направлении.

Дальнейший ход исследования и идентификацию на все виды возбудителей проводят по общепринятой методике.

ПРИМЕРНАЯ СХЕМА ПОСЕВА РВОТНЫХ МАСС И ИСПРАЖНЕНИЙ

0,1 мл ┌────┐ 0,3 - 1,0 мл

┌──────────────────────────────┤ -1├────────────────────────┐

│ 0,1 мл │10 │ │

│ ┌─────────────────────┤ ├─────────┐ │

│ │ 0,1 мл │ │ │ │

│ │ ┌─────────────┴─┬──┘ │ │

\/ \/ \/ 1 г/мл материала 10 мл │ \/

┌────┐ ┌─────┐ ┌───┐ 0,1-процентного │ ┌────────────┐

│Эндо│ │Плос.│ │ВСА│ ПВ или физ. р-ра │ │2,5 - 5,0 мл│

└────┘ └─────┘ └───┘ │ │ │хлористо- │

│ │ │магниевой │

│ │ │среды обыч. │

│ │ │конц. │

│ │ └────────────┘

\/ │ 0,3 - 1,0 мл

по 0,1 мл ┌────┐ └──────────────┐ или

┌───────────────────┤ -3│ \/

\/ │10 │ ┌────────────┐

──┬─────┬───┬────┬────┬──── ├────┤ 9,9 мл │2,5 - 5,0 мл│

\/ \/ \/ \/ \/ │ │ 0,1-процентного │селенитовой │

┌────┐┌───┐┌──┐┌───┐┌─────┐ └─┬──┘ ПВ или физ. р-ра │ среды │

│Эндо││ЖСА││КА││МИС││ЖАМПФ│ │ └────────────┘

└────┘└───┘└──┘└───┘└─────┘ │ 0,1 мл

по 0,1 мл ┌────┐

┌───────────────────┤ -5│

\/ │10 │

──┬─────┬───┬────┬────┬──── ├────┤

\/ \/ \/ \/ \/ │ │ 9,9 мл 0,1-процентного

┌────┐┌───┐┌──┐┌───┐┌─────┐ └────┘ ПВ или физ. р-ра

│Эндо││ЖСА││КА││МИС││ЖАМПФ│

└────┘└───┘└──┘└───┘└─────┘