Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1989 г. N 5043-89

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЦИТРАЗОНА В ЦИТРУСОВЫХ МЕТОДОМ

ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны М.В. Письменной, А.П. Алейновой (ВНИИГИНТОКС).

    Краткая  характеристика  препарата.   Цитразон - 2,6-диметокси-3-хлоро-

альфа-этоксиминобензилового  спирта  бензоат. Брутто - формула C  H  ClNO .

                                                                18 18    5

Молекулярная масса 363,5.  Общепринятое название - бензоксимат,  синонимы -

артабан, ситразон, бензомат. Белое кристаллическое вещество с т. пл. 73 °C.

Растворимость (г/л):  в бензоле - 650, гексане - 8, диметилформамиде - 146,

ксилоле  -  710.  В  воде  практически  нерастворим.   Легко  гидролизуется

щелочами. Относится к малотоксичным соединениям, ЛД   для крыс 15000 мг/кг.

                                                   50

Принцип метода. Методика основана на хроматографировании цитразона в тонком слое силикагеля в системе гексан-метанол-этилацетат после экстракции из цитрусовых гексаном и очистки экстракта смесью активированного угля и оксида алюминия.

Метрологическая характеристика метода. Минимальное детектируемое количество 1 мкг. Нижний предел определения 0,2 мг/кг. Среднее значение определения 87%.

    Избирательность   метода.   Определению  могут  мешать  ХОП,  имеющие в

рекомендуемой подвижной фазе близкие значения R  и проявляющиеся аммиакатом

                                               f

серебра.

    Реактивы и растворы. Аммиак ч.д.а. Ацетон ч.д.а. н-Гексан ч.  Метиловый

спирт х.ч. Бензол ч.д.а. Этиловый эфир уксусной кислоты х.ч. Сульфат натрия

безводный ч.  Нитрат серебра х.ч.  Уголь  активированный марки ОУ-А.  Оксид

алюминия для хроматографирования дезактивированный (к 50 г Al O   добавляют

                                                             2 3

1,5 мл  воды  и  встряхивают  2 ч  в  герметично закрытой колбе). Пластинки

хроматографические "Силуфол" размером 15 x 15 см. Беззольные фильтры "синяя

лента". Цитразон х.ч. Стандартный раствор цитразона в гексане концентрацией

100 мкг/мл  (хранить в холодильнике не более 6 мес.).  Проявляющий реагент:

0,5 г AgNO  растворяют в 5 мл дистиллированной воды, добавляют 7 мл NH OH и

          3                                                           4

доводят ацетоном до 100 мл (используют свежеприготовленным).

Приборы и посуда. Аппарат для встряхивания проб АВУ-1. Весы аналитические ВЛР-200. Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М. Вакуумный водоструйный насос. Водяная баня. Колбы: конические плоскодонные на 100 мл с притертыми пробками; мерные на 100 мл. Концентраторы (грушевидные колбы на 25 и 100 мл) на шлифах (N 14 или N 19). Пипетки мерные на 0,1; 1; 2; 5 мл. Воронки химические диаметром 6 см. Камера для опрыскивания. Камера для хроматографирования. Лампа кварцевая ПРК-4 или ПРК-7. Пульверизаторы стеклянные.

Ход анализа. Экстракция. Измельченную среднюю пробу плодов цитрусовых (5 - 10 г) помещают в коническую колбу на 100 мл, трижды экстрагируют порциями гексана по 20 мл, встряхивая каждый раз на аппарате для встряхивания 30 мин. Экстракт отфильтровывают через небольшой ватный тампон с помещенным на него слоем безводного сульфата натрия (10 - 15 г). Колбу и фильтр трижды промывают гексаном порциями по 10 - 15 мл. Объединенный экстракт отгоняют досуха на ротационном испарителе при температуре не более 50 °C.

    Очистка  экстракта.  Сухой  остаток  растворяют в 2 мл смеси  бензола и

ацетона в объемном соотношении  1:3...4,  вносят  200 мг дезактивированного

Al O  и 100 мг  активированного  угля марки ОУ-А.  Тщательно перемешивают в

  2 3

течение 1 мин.  Пробу  фильтруют  через  смоченный смесью бензола и ацетона

беззольный  фильтр  "синяя лента"  в  грушевидную колбу вместимостью 15 мл.

Остаток  в  колбе  трижды  промывают  небольшими  порциями  смеси бензола с

ацетоном  (по  2  мл).  К  фильтрату  прибавляют  новую  порцию   (200  мг)

дезактивированного Al O   и  100  мг  активированного  угля,  встряхивают в

                     2 3

течение 1 мин.  и вновь фильтруют через складчатый фильтр, смоченный смесью

бензол-ацетон. Остаток в колбе и фильтр промывают небольшими порциями смеси

бензола и ацетона  (2 - 3 мл).  Общий  объем  фильтрата не должен превышать

15 мл.  Элюат  упаривают на ротационном  испарителе при температуре водяной

бани не более 45 °C до объема 0,2 - 0,3 мл, затем при комнатной температуре

остаток упаривают досуха.

    Условия  хроматографирования.   Сухой   остаток   пробы   растворяют  в

0,2 - 0,3 мл гексана.  На пластинку  "Силуфол"  на расстоянии 15 - 20 мм от

нижнего  края  с  помощью  микропипетки или стеклянного  капилляра  наносят

гексановые растворы проб и рядом стандартные растворы цитразона (1; 5; 10 и

20 мкг).  Пластинку  хроматографируют  в  системе  подвижных  растворителей

гексан-метанол-этилацетат     (10:0,74:1),    налитых    в    камеру    для

хроматографирования за 30 мин. до помещения пластинки. После того как фронт

подвижного  растворителя  поднимется на высоту 10 см, пластинку вынимают из

камеры, подсушивают на воздухе и опрыскивают проявляющим  реагентом.  После

проявления пластинку облучают УФ-светом до четкого появления серых пятен на

бежевом   фоне   пластинки   (10  -  15  мин.).   Величина  R    в  системе

                                                             f

гексан-метанол-этилацетат составляет 0,53 +/- 0,03.

Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят путем сравнения интенсивности окраски и площади пятна пробы и стандартного раствора. Содержание препарата в анализируемой пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

                                      A

                                  X = -,

                                      P

где:

A - количество препарата, найденное путем сравнения размера и интенсивности окраски пятен пробы и стандартного раствора, мкг;

P - масса пробы, взятой для анализа, г.

Требования безопасности. Следует соблюдать правила безопасности, рекомендуемые для работы в химических лабораториях с органическими растворителями и УФ-светом.