"Методические указания по определению ниссорана в воде, почве, растительном материале (зеленая масса и плоды винограда, яблоки) методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии" // Технорма.RU

Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1989 г. N 5039-89

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ НИССОРАНА В ВОДЕ, ПОЧВЕ,

РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ (ЗЕЛЕНАЯ МАССА И ПЛОДЫ

ВИНОГРАДА, ЯБЛОКИ) МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ

И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны Т.М. Петровой, О.К. Остроуховой (ВИЗР); Н.В. Бажановой, Ж.А. Арутюнян, М.Г. Алтунян (АрмНИИЗР).

Краткая характеристика препарата. Ниссоран - инсектицид. Действующее

вещество - транс-5-[4-хлорфенил]-N-циклогексил-4-метил-2-оксотиазолидин-3-

карбоксамид. Брутто-формула C H ClN O S . Молекулярная масса 352,9.

17 2 2 2 2

Общепринятое название - гексатиазокс. Химически чистое вещество - белый

порошок. Т. пл. 105,5 °C. Растворимость в воде при pH 5,9 - 1 мг/мл. Период

полураспада в водном растворе при 22 °C и pH 5 - 7 составляет 7000 ч; при

pH 9 - 12 - 12000 ч. Растворяется в большинстве органических растворителей.

Ниссоран относится к группе препаратов средней токсичности для теплокровных

животных. Применяют в борьбе с клещами на плодовых, цитрусовых насаждениях

и на виноградниках.

Принцип метода. Метод основан на экстракции ниссорана из проб органическим растворителем, очистке переэкстракцией и количественном определении методами ТСХ или ГЖХ с ДЭЗ или ДПР.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 129.

Таблица 129

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА (p = 0,95, n = 5)

┌───────────────┬──────────────────┬───────────────────┬──────────────────┐

│ Анализируемый │ Минимально │ Нижний предел │ Среднее значение │

│ объект │ детектируемое │ определения, │ определения, % │

│ │ количество, мкг │ мг/л или мг/кг │ │

├───────────────┴──────────────────┴───────────────────┴──────────────────┤

│ Тонкослойная хроматография │

│ │

│Вода │1 │0,02 │93,0 +/- 1,8 │

│Почва │10 │0,1 │77,0 +/- 3,7 │

│Яблоки │5 │0,2 │78,0 +/- 3,0 │

│Виноград │3 │0,1 │82,0 +/- 2,2 │

│ │

│ Газожидкостная хроматография │

│ │

│Вода │ │0,0005 │94,0 +/- 2,0 │

│Почва │ │0,02 │76,0 +/- 3,2 │

│Яблоки │ │0,02 │76,0 +/- 3,6 │

└───────────────┴──────────────────┴───────────────────┴──────────────────┘

Избирательность метода. Избирательность метода ГЖХ обеспечивается сочетанием селективных детекторов и неподвижных фаз различной полярности, а ТСХ - выбором систем хроматографирования и проявляющих реагентов. В предлагаемых условиях хроматографирования другие пестициды определению не мешают.

Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. Ацетонитрил ч. н-Гексан х.ч.

Двухромовокислый калий х.ч. Йодид калия ч. Марганцовокислый калий х.ч.

Сульфат кальция двухводный ч.д.а. (в течение 1 - 2 сут. прокаливают при

температуре 180 °C и просеивают через сито размером 100 меш, хранят в

склянке с притертой крышкой). Хлорид кальция ч. Крахмал растворимый ч.

Едкий натр ч. Сульфат натрия безводный ч.д.а. (предварительно прокаливают

до 300 - 400 °C). Хлорид натрия ч.д.а. Петролейный эфир (40 - 70 °C)

свежеперегнанный. Хроматографические пластинки "Силуфол" УФ . Серная

254

кислота ч.д.а. Силикатный сорбент КМК-20. Силикагель марки КСК.

Хлороводородная кислота особой чистоты. Хлороформ х.ч. Этиловый спирт

ректиф. Неподвижная жидкая фаза: 5% SE-30 или 5% XE-60 на хроматоне

N-AW-DMCS (0,160 - 0,200 мм). Газ-носитель - азот особой чистоты.

Стандартный раствор ниссорана в н-гексане - 5 мкг/мл (ГЖХ), 200 мкг/мл

(ТСХ). Растворы стабильны в течение 3 мес. при хранении в холодильнике.

Проявляющий реагент: 50 мл 1-процентного раствора йодида калия смешивают

с 50 мл 3-процентного свежеприготовленного растворимого крахмала и 20 мл

этилового спирта. Готовят перед употреблением.

Приборы, аппаратура и посуда. Аппарат для встряхивания колб. Ротационный вакуумный испаритель. Вата гигроскопическая. Весы аналитические. Весы равноплечие ручные. Воронки делительные; химические. Газовый хроматограф с ДЭЗ пли ДПР. Камера для хроматографирования. Колбы мерные и конические со шлифами. Микропипетки на 0,1 и 0,2 мл. Микрошприц на 10 мкл. Пипетки на 1 и 10 мл. Пульверизатор стеклянный для обработки хроматограмм. Сушильный шкаф. Холодильник бытовой. Камера для опрыскивания хроматографических пластинок. Хроматографическая стеклянная колонка длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм.

Подготовка к определению. Приготовление пластинок для ТСХ. Стеклянные пластинки перед нанесением на них сорбента тщательно моют сначала в хромовой смеси, затем промывают водой до нейтральной реакции. Далее их протирают спиртом и высушивают на воздухе. Нанесение сорбента КМК-20: для приготовления одной пластинки (9 x 12 см) берут 0,7 г сорбента КМК-20, прибавляют 5 мл воды и 10% от массы сорбента гипса. Готовят их сразу в количестве 10 - 20. Смесь тщательно растирают и однородную массу наносят на пластинку легким покачиванием для растекания по всей поверхности. Сушат пластинки в течение 24 ч на воздухе. Хранят в эксикаторе над хлоридом кальция. Сорбент КМК-20 можно наносить на пластинку и без закрепляющей основы - гипса. Нанесение силикагеля: 30 г силикагеля, 5 г гипса и 100 мл воды тщательно размешивают и наносят на пластинку так, как описано выше.

Подготовка хроматографической колонки (ГЖХ). Стеклянную колонку промывают смесью органических растворителей ацетон - этиловый спирт - петролейный эфир (1:1:1). Для этого смесь заливают на 1 ч в колонку, а затем промывают 300 мл ацетона. Колонку сушат в токе азота и заполняют сорбентом с нанесенной на него фазой с помощью вакуумного насоса. Колонку кондиционируют при 270 °C в течение 8 ч. Скорость потока азота 30 - 40 мл/мин.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстракта. Навеску листьев (25 г) измельчают, а яблоки и плоды винограда гомогенизируют, заливают 150 - 200 мл 75-процентного водного ацетона, встряхивают в течение 1 ч и оставляют на ночь. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр. Остаток промывают дважды по 30 мл 75-процентным водным ацетоном. Фильтраты объединяют, помещают их в делительную воронку, добавляют 70 - 90 мл дистиллированной воды и 1 - 3 г хлорида натрия. Очистку проводят переэкстракцией ниссорана в н-гексан тремя порциями по 25 - 30 мл. Гексановые фракции отделяют, осушают путем фильтрования через безводный сульфат натрия, переносят в круглодонную колбу и концентрируют под вакуумом при температуре 40 °C до 1 - 5 мл (ГЖХ) или до 0,1 - 0,3 мл (ТСХ).

Навеску почвы (25 г) заливают 70 мл смеси ацетон - 0,05 н CaCl (1:1),

встряхивают 1 ч и оставляют на ночь. Далее анализ ведут так, как описано

для растительных проб, но остаток промывают смесью ацетона и раствора

хлорида кальция.

К 200 мл анализируемой пробы воды прибавляют 25 - 30 мл петролейного эфира, закрывают колбу стеклянной притертой пробкой и встряхивают на аппарате 1 ч. Экстракцию повторяют трижды. Слои с петролейным эфиром отделяют, высушивают фильтрованием через слой безводного сульфата натрия. Объединенные экстракты концентрируют на ротационном испарителе при температуре 40 °C до 1 - 5 мл (ГЖХ) или до 0,1 - 0,3 мл (ТСХ).

Условия хроматографирования. Условия определения методом ТСХ: На

стартовую линию пластинки микропипеткой количественно наносят пробу, рядом

с пробой - стандартные растворы ниссорана - 5 и 10 мкг. Пластинку помещают

в хроматографическую камеру, куда за 10 - 15 мин. до этого наливают

подвижный растворитель: для силикагелевых пластинок используют гексан -

ацетон (4:1), а для пластинок с КМК-20 - гексан - ацетон (9:1). После

хроматографирования пластинку высушивают на воздухе, помещают в камеру с

газообразным хлором на 10 мин., который получают, смешивая равные объемы

1,5-процентного раствора калия марганцовокислого и 10-процентного раствора

хлороводородной кислоты. После этого пластинку оставляют на воздухе до

полного исчезновения запаха хлора. Затем пластинку опрыскивают проявляющим

реагентом. Ниссоран проявляется в виде сине-фиолетовых пятен на сероватом

фоне пластинки. В предлагаемых условиях хроматографирования R ниссорана на

пластинках силикагеля - 0,50, а на КМК-20 - 0,45.

Условия определения методом ГЖХ. Хроматограф с ДЭЗ или ДПР. При работе с колонкой, заполненной 5% SE-30 на хроматоне N-AW-DMCS (0,125 - 0,160 мм). Температура, °C: колонки - 240, испарителя и детектора - 270. Скорость газа-носителя (азота) 35 мл/мин. Время удерживания ниссорана в этих условиях 2 мин. 7 с. Минимально детектируемое количество 0,5 нг. Диапазон линейности 0,5 - 10,0 нг. При работе с колонкой, заполненной 5% XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS (0,160 - 0,200 мм). Температура, °C: колонки - 250, испарителя и детектора - 270. Скорость газа-носителя 40 мл/мин. В этих условиях время удерживания составляет 3 мин. 25 с. Минимально детектируемое количество 0,4 нг. Диапазон линейности 0,5 - 15,0 нг.

Обработка результатов анализа. Метод ТСХ. Количественное определение производят путем сравнения площадей пятен стандартных растворов и проб. Пропорциональная зависимость между площадью пятна и концентрацией соблюдается в пределах 1 - 20 мкг. Концентрацию ниссорана (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по формуле:

X = -,

где:

A - количество препарата, найденное в пробе, мкг;

P - навеска или объем анализируемой пробы, г или мл.

Метод ГЖХ. Содержание ниссорана в анализируемой пробе (X, мг/кг или мг/л) определяют методом соотношения пиков стандарта и проб и рассчитывают по формуле:

H CV

X = -----,

V H P

1 1

где:

C - количество препарата в стандартном растворе, введенном в

хроматограф, нг;

H , H - высоты пиков соответственно стандарта и пробы, мм;

1 2

V - объем анализируемого раствора, введенного в хроматограф, мкл;

V - объем анализируемой пробы, мл.

P - навеска пробы, г.

Требования безопасности. Необходимо соблюдать общепринятые правила предосторожности при работе с токсичными, взрывоопасными и легковоспламеняющимися веществами.