Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1989 г. N 5028-89

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АТРАЗИНА В ЗЕРНЕ И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ КУКУРУЗЫ

И СОИ МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Дополнение к N 1542-76 от 20.12.76

Краткая характеристика препарата приведена в табл. 154. Растворимость в воде 70 мг/л. МДУ, мг/кг: в плодах - 1; кукурузе и сорго - 0,5; фруктах и овощах - 0,1; зерне - 0,1; мясе, яйцах - 0,02. В молоке содержание атразина не допускается. Применяется в качестве гербицидов для борьбы с сорняками в посевах кукурузы, сои, сорго, сахарного тростника и др.

Принцип метода. Метод основан на экстракции пестицида из анализируемых проб органическим растворителем, очистке экстрактов переэкстракцией из гексана в ацетонитрил, колоночной хроматографии экстрактов и определении методами ГЖХ с ДЭЗ или ТСХ (пластинки "Силуфол", подвижная фаза бензол - гексан - ацетон в соотношении 15:10:2). Проявление - обработка смесью нитрата серебра с бромфеноловым синим, а затем - 4-процентным раствором лимонной кислоты.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 144.

Таблица 144

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА (N = 6)

┌───────────────────────────────────┬──────────────────┬──────────────────┐

│             Параметры             │     Метод ГЖХ    │    Метод ТСХ     │

│                                   ├────────┬─────────┼────────┬─────────┤

│                                   │ зерно  │ зеленая │ зерно  │ зеленая │

│                                   │        │  масса  │        │  масса  │

├───────────────────────────────────┼────────┼─────────┼────────┼─────────┤

│Диапазон измеряемых концентраций,  │0,02 - 2│0,01 - 2 │0,02 - 2│0,01 - 2 │

│мг/кг                              │        │         │        │         │

│Предел обнаружения, мкг            │0,0005  │0,0005   │0,5     │0,5      │

│Предел определения в пробах, мг/кг │0,02    │0,01     │0,02    │0,01     │

│Среднее значение определения       │83,0    │82,0     │85,0    │81,0     │

│стандартных количеств, %           │        │         │        │         │

│Стандартное отклонение S, %        │+/- 5,5 │+/- 4,4  │+/- 6,5 │+/- 4,6  │

│Доверительный интервал среднего    │+/- 5,8 │+/- 4,6  │+/- 6,8 │+/- 4,8  │

│при p = 0,95, %                    │        │         │        │         │

└───────────────────────────────────┴────────┴─────────┴────────┴─────────┘

Избирательность метода. Метод селективен. Определению не мешают хлорорганические пестициды и симм-триазины.

Реактивы и растворы. Атразин, содержание основного вещества не менее 96%. Ацетон ч.д.а. Гексан ч. Ацетонитрил ч. Бензол ч. Бромфеноловый синий. Нитрат серебра. Лимонная кислота особой чистоты. Хлорид натрия х.ч. Оксид алюминия L 40/250 нейтральный для хроматографии. Силикагель марки КСК, зернение 0,25 - 0,50 мм. Хроматон N-AW-DMCS (фракция 0,20 - 0,25 мм) с 5% силикона DC-550. Азот особой чистоты газообразный в баллоне с редуктором. Пластинки "Силуфол" размером 150 x 150 мм. Фильтры бумажные беззольные "синяя лента".

Стандартные растворы атразина: N 1 - концентрация 1 мг/мл (готовят в мерной колбе вместимостью 50 мл, растворяя препарат 0,0500 г в ацетоне); N 2 - концентрация 0,1 мг/мл (в мерной колбе вместимостью 50 мл разбавляют 5 мл стандартного раствора N 1 ацетоном). Стандартные растворы хранят в холодильнике в течение месяца; 0,4-процентный водный раствор бромфенолового синего. Раствор устойчив в течение месяца; 2-процентный водный раствор нитрата серебра. Раствор устойчив в течение 10 дней. Проявляющий реагент N 1 (смешивают равные объемы водных растворов 0,4-процентного бромфенолового синего и 2-процентного нитрата серебра). Смесь растворов устойчива в течение 6 - 8 ч. Лимонная кислота - 4-процентный водный раствор. Устойчива в течение 10 дней. Подвижная фаза: смесь бензола, гексана, ацетона в объемном соотношении 15:10:2.

Растворители смешивают в хроматографической камере за 30 мин. до хроматографирования. Смесь растворителей N 1: гексан - бензол (1:1) для элюирования коэкстрактивных веществ. Смесь растворителей N 2: гексан - ацетон (100:10) для элюирования атразина с сорбента.

Приборы и посуда. Хроматограф "Газохром-1106Э" или любой другой аналогичный прибор с ДЭЗ. Колонка хроматографическая стеклянная размером 200 x 0,3 см. Колонка адсорбционная стеклянная размером 30 x 0,8 см. Ротационный вакуумный испаритель. Аппарат для встряхивания. Микрошприц на 10 мкл. Вакуум-насос. Колбы: грушевидные для отгонки растворителя; мерные; Бунзена; конические плоскодонные различной вместимости. Цилиндры. Мензурки различной вместимости. Пипетки различной вместимости. Воронки: химические; делительные вместимостью 100, 250, 500 мл; Бюхнера. Стаканы химические. Весы лабораторные аналитические. Весы технические. Кофемолка электрическая бытовая. Камера хроматографическая стеклянная. Пульверизатор стеклянный. Пробирки градуированные со шлифом вместимостью 10 мл. Микропипетка или стеклянный капилляр.

Подготовка к определению. Приготовление градуировочных растворов для построения градуировочного графика. В 6 градуированных пробирок вносят 25, 50 мкл стандартного раствора N 2 и 10, 25, 50 и 100 мкл стандартного раствора N 1 и доводят объем ацетоном до 10 мл. Хроматографируют по 2 мкл каждого из полученных растворов, что соответствует 0,0005; 0,001; 0,002; 0,005; 0,010 и 0,020 мкг атразина. Хроматографирование каждого раствора проводят трижды и строят график зависимости средних высот пиков (мм) от количества атразина (мкг).

Подготовка хроматографической колонки для ГЖХ. Хроматографическую колонку размером 200 x 0,3 см заполняют хроматоном N-AW-DMCS с нанесенной на него в количестве 5% неподвижной жидкой фазой DC-550, устанавливают в термостат хроматографа и стабилизируют в токе газа-носителя. Скорость 30 - 50 мл/мин. при температуре 250 °C в течение 40 ч и 300 °C - 6 ч.

Подготовка адсорбционной колонки с сорбентами для очистки экстрактов. Колонку размером 30 x 0,8 см заполняют при легком постукивании нейтральным оксидом алюминия на высоту 2 см, затем силикагелем марки КСК на высоту 5 см и промывают последовательно 5 мл ацетона и 10 мл гексана.

Приготовление стандартной шкалы для метода ТСХ. В 6 пробирок вносят 5 и 10 мкл стандартного раствора N 2; 2, 5, 10, 20 мкл стандартного раствора N 1 и по 0,5 мл смеси растворителей N 2. На пластинке "Силуфол" на расстоянии 15 мм от края намечают линию старта, на которую справа и слева от центра наносят в виде отдельных пятен на расстоянии 15 мм друг от друга содержимое каждой пробирки. Содержание атразина в пятнах 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 и 20,0 мкг соответственно.

Хранение проб. Срок хранения проб 1 мес.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу измельченной зеленой массы (10 - 50 г) помещают в коническую колбу с притертой пробкой, заливают 50 мл ацетона, экстрагируют при встряхивании в течение 30 мин. и отфильтровывают под вакуумом. Пробу экстрагируют повторно свежей порцией ацетона (50 мл). Экстракты соединяют, приливают 100 мл гексана, добавляют 20 г хлорида натрия, тщательно встряхивают, выделившийся водный слой отделяют и экстрагируют 50 мл гексана. Органические слои объединяют в делительной воронке и выделившееся небольшое количество воды сливают. Органический экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия (40 г), помещенного на бумажный фильтр в химической воронке, и концентрируют до отсутствия запаха растворителей (ротационный испаритель, ток воздуха). Маслянистый остаток растворяют в 20 мл гексана и встряхивают в течение 1 мин. с 5 мл 40-процентной водной суспензии фосфорно-молибденовой кислоты. Водный слой отделяют, гексановый - экстрагируют 10 мл дистиллированной воды, пропускают через слой безводного сульфата натрия (20 г), после чего сульфат натрия промывают 10 мл гексана. Из гексанового раствора атразин дважды экстрагируют ацетонитрилом порциями 30 и 20 мл. Ацетонитрильный (нижний) слой пропускают через бумажный фильтр и концентрируют в ротационном испарителе или током воздуха до 1 - 2 капель в остатке. Остаток переносят количественно тремя порциями смеси растворителей N 1 по 1 - 2 мл в колонку с сорбентом для очистки экстракта и коэкстрактивные вещества элюируют 20 мл смеси растворителей N 1. Элюат отбрасывают. Атразин элюируют 100 мл смеси растворителей N 2. Элюат концентрируют досуха, остаток растворяют в 2 мл ацетона, аликвоту раствора хроматографируют на газовом хроматографе. Для метода ТСХ элюат концентрируют досуха и остаток с помощью смеси растворителей N 2 количественно переносят на пластинку "Силуфол".

Пробу зерна кукурузы и сои (10 - 25 г) измельчают на кофемолке, помещают в коническую колбу с притертой пробкой и дважды экстрагируют ацетоном порциями 50 и 25 мл при встряхивании по 30 мин. Экстракты фильтруют под вакуумом, фильтрат концентрируют до маслянистого остатка. Остаток растворяют в 30 мл ацетонитрила и экстрагируют 6 раз гексаном порциями по 10 мл. Гексан отбрасывают, ацетонитрильный экстракт концентрируют до отсутствия растворителя. Остаток переносят количественно в колонку с сорбентом и экстракт очищают так, как описано для зеленой массы.

    Условия  хроматографирования.  Метод  ГЖХ.  Аликвоту очищенных

экстрактов  хроматографируют при следующих условиях. Рабочая шкала

                    -12

электрометра 20 x 10    А. Скорость протяжки картограммы 200 мм/ч.

Колонка  стеклянная  длиной  200  мм,  диаметром 3 мм, заполненная

хроматоном  N-AW-DMCS  (0,20  -  0,25  мм)  с  5% силикона DC-550.

Температура,  °C:  термостата  колонок  -  200;  испарителя - 250;

детектора - 230. Расход газа-носителя, мл/мин.: через колонку - 50

+/-  3;  продувочную  камеру  детектора  -  75  +/-  3. Линейность

детектирования   от  0,0005  до  0,0200  мкг.  Объем,  вводимый  в

испаритель,  2  мкл.  Минимально  детектируемое количество 0,5 нг.

Абсолютное время удерживания атразина 3 мин. 55 с.

Хроматографирование проводят трижды, измеряют высоту пиков, соответствующих атразину, вычисляют среднее значение. По среднему значению высоты пика и градуировочному графику находят количество атразина в аликвоте.

Метод ТСХ. Очищенные экстракты пробы концентрируют досуха, стенки колбы дважды обмывают 0,5 - 1 мл смеси растворителей N 2 и остаток после концентрирования в токе воздуха до 0,3 - 0,5 мл наносят в центр линии старта пластинки "Силуфол" со стандартной шкалой.

    Пластинку  помещают в наклонном положении в хроматографическую

камеру  с  подвижной  фазой, развивают на высоту 10 см, после чего

подсушивают  на воздухе, опрыскивают сначала проявляющим реагентом

N  1, затем N 2. Атразин проявляется в виде синих пятен на светлом

фоне с R  0,2.

        f

Для количественного определения с помощью прозрачной миллиметровой бумаги измеряют площадь пятен пробы и близкой им по интенсивности окраски стандартной шкалы.

Обработка результатов анализа. Содержание атразина в объекте (X, мг/кг) вычисляют по формулам:

                         100AV

                     X = ----- (метод ГЖХ);

                         V PR

                          1

                        100BS

                             пр

                    X = ------- (метод ТСХ),

                         S  PR

                          ст

    где:

    A  -  количество  атразина  в хроматографируемом объеме пробы,

найденное по градуировочному графику, нг;

    B - количество атразина в стандартном пятне, мг;

    V  - объем аликвоты, мкл;

     1

    V - общий объем пробы, мл;

    P - масса анализируемой пробы, г;

    R - степень определения, найденная предварительно, %;

    S  , S   -  площади  пятен соответственно пробы и стандартного

     пр   ст

раствора, кв. мм.

Требования безопасности. Соблюдать правила безопасности при работе с пестицидами и легковоспламеняющимися жидкостями.