Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1989 г. N 5027-89

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДЕФОЛИАНТА ХЛОПЧАТНИКА БУТИФОСА

В ХЛОПКОВОЙ ШЕЛУХЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

    Бутифос  (ДЕФ)  -  S,S,S-трибутилтритиофосфат.  Брутто-формула

C  H  OPS .  Молекулярная масса 314,29. Светло-коричневая жидкость

 12 27   3

с  неприятным  резким запахом, т. кип. 154 °C при 66,66 Па, хорошо

растворим  в органических растворителях (бензол, спирт, хлороформ,

метиловый  спирт),  летучесть  препарата  1  мг/куб.  м при 20 °C.

Препарат  высокотоксичен,  ЛД    для  белых мышей 170 - 250 мг/кг,

                             50

обладает    кумулятивными    свойствами.    Предельно   допустимая

концентрация  бутифоса  в  кормах для молочного скота и яйценосной

птицы, а также для откормочных животных и птицы - 3,0 мг/кг.

Принцип метода. Метод основан на экстракции бутифоса из хлопковой шелухи парами органических растворителей, взятых в определенном соотношении, очистке экстракта методом колоночной хроматографии, концентрировании его и последующем хроматографировании в тонком слое силикагеля в системе н-гексан - ацетон (4:1).

Количественно бутифос определяют на хроматограмме, сравнивая интенсивность окраски пятен проб и модельных экстрактов.

Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций бутифоса 0,01 - 10 мкг. Предел обнаружения в хлопковой шелухе 0,1 мг/кг. Среднее значение определения стандартных количеств бутифоса 91,8%. Доверительный интервал (p = 0,95 и n = 5) 91,8 +/- 8,8%.

Реактивы и растворы. Бутифос 70-процентный к.э. Оксид алюминия для хроматографии II степени активности (фракция частиц 0,15 мм). Петролейный эфир (40 - 70 °C). Ацетон х.ч. н-Гексан х.ч. Нитрат серебра х.ч. Бромфеноловый синий х.ч. Кислота уксусная х.ч.

Приборы и посуда. Аппарат Нааба. Прибор для отгонки растворителя или ротационный вакуумный испаритель. Пульверизатор стеклянный. Колонки хроматографические длиной 18 см, диаметром 15 мм. Камера для хроматографирования. Набор пипеток и микропипеток. Пластинки для хроматографии "Силуфол". Пробирки мерные на 5 мл. Цилиндры мерные.

Подготовка к определению. Стандартный раствор бутифоса с концентрацией 3 мг/мл готовят, растворяя 0,043 мл 70-процентного к.э. в 10 мл ацетона или н-гексана. Раствор хранят в холодильнике не дольше 1 мес.

Проявляющий реагент. Бромфеноловый синий (0,05 г) растворяют в 10 мл ацетона и доводят объем раствора до 100 мл 0,5-процентным водно-ацетоновым раствором нитрата серебра (к 0,5 г нитрата серебра приливают 75 мл дистиллированной воды и доводят объем раствора до 100 мл ацетоном). Раствор готовят перед использованием.

Подвижная фаза для развития хроматограмм. Смешивают в мерном цилиндре на 100 мл 80 мл н-гексана и 20 мл ацетона. Подвижную фазу заливают в камеру для хроматографирования не менее чем за 30 мин. до погружения хроматографической пластинки. Смесь готовят перед использованием.

Хроматографические колонки. Заполняют стекловатой на высоту 1 см, затем на высоту 4 см смесью силикагеля и оксида алюминия (в соотношении 2:3), тщательно перемешанной в ступке. Перед пропусканием экстракта колонку промывают 30 мл смеси петролейного эфира и ацетона (1:4).

Хроматографические пластинки "Силуфол". Перед использованием пластинку помещают в камеру с дистиллированной водой на глубину 0,5 см и вынимают после поднятия фронта воды на 145 мм, сушат при температуре 25 - 30 °C в течение 20 - 30 мин.

Ход анализа. Из пробы шелухи методом диагонального деления выделяют 100 г. Затем прощупыванием тонкого слоя шелухи выбирают все семена и взвешивают с точностью до 0,001 г. На анализ берут 10 г шелухи, содержащей десятую часть выделенных и измельченных семян; помещают в патрон из фильтровальной бумаги и заряжают аппарат Нааба.

Экстракцию проводят в течение 2 ч 50 мл смеси петролейного эфира и ацетона (1:4). Скорость экстракции регулируют с таким расчетом, чтобы в верхней части экстракционного патрона над слоем анализируемого материала всегда находился растворитель и его уровень не опускался ниже чем на 5 мм над поверхностью экстрагируемого объекта. Затем экстракт охлаждают до комнатной температуры и пропускают через предварительно подготовленную колонку. Колбу и колонку промывают 50 мл смеси петролейного эфира и ацетона (1:4). Очищенный экстракт концентрируют путем отгонки растворителя до 1 мл.

Параллельно с анализируемой пробой готовят два модельных экстракта, каждый из них получают из 1 г шелухи, в которую внесены определенные количества стандартного раствора бутифоса.

Хроматографирование. 0,1 мл экстракта пробы и модельных экстрактов наносят на хроматографическую пластинку. Диаметр каждого пятна не должен превышать 10 мм. После высыхания пятен пластинку помещают в камеру для хроматографирования, куда налита смесь н-гексана и ацетона (4:1). Пластинку вынимают после поднятия фронта растворителя на высоту 10 - 11 см, сушат в вытяжном шкафу 3 - 5 мин. для удаления паров растворителя и опрыскивают раствором проявителя. Через 15 - 20 мин. пластинку опрыскивают 40-процентным водным раствором уксусной кислоты для более четкого проявления пятен дефолианта. При этом на желтом фоне ясно видны сине-голубые пятна бутифоса.

Обработка результатов анализа. Содержание бутифоса в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

                                 AV

                                   2

                             X = ---,

                                 V P

                                  1

    где:

    A  -  количество  бутифоса,  найденное  на хроматограмме путем

сравнения пятен проб и модельных экстрактов, мкг;

    V    -   объем  экстракта,  нанесенный  на  хроматографическую

     1

пластинку, мл;

    V  - общий объем экстракта, мл;

     2

    P - навеска хлопковой шелухи, г.

Техника безопасности. Соблюдают правила безопасности, рекомендуемые при работе с химическими реактивами и токсичными веществами.