Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1989 г. N 5024-89

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИКВАТА В РЫБЕ И ВОДЕ

МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Краткая характеристика препарата дана в Методических указаниях. Предельно переносимая концентрация для рыб 91 мг/л (при экспозиции 24 ч). ПДК в воде водоемов 0,02 мг/л.

    Принцип    метода.   Метод   основан   на   хроматографическом

определении  диквата в тонком слое пластинок "Силуфол" УФ    после

                                                         254

кислотного  гидролиза исследуемых проб, хроматографической очистки

и  концентрирования  экстрактов.  Подвижным  растворителем  служит

смесь  муравьиной  кислоты  с  водой  (4,5:1).  Места  локализации

препарата  обнаруживают  после  опрыскивания  пластинок  раствором

гидроксида натрия с последующим облучением УФ-светом.

Метрологическая характеристика метода. Минимально детектируемое количество 3 - 5 мкг. Нижний предел определения: в воде - 0,01 мг/л; рыбе - 0,1 мг/кг. Среднее значение определения: в воде - 81,0 +/- 5,47; рыбе - 76 +/- 4,18%. Доверительный интервал среднего при p = 0,95 и n = 5 в воде +/- 4,89; рыбе +/- 3,74%.

    Реактивы и растворы. Гексан  ч.  Дикват  (реглон).  Этилацетат

х.ч.  Спирт  этиловый  96-процентный, ректиф.  Пластинки "Силуфол"

УФ        размером      15   x    15   см.     Динатриевая    соль

  254

этилендиаминтетрауксусной   кислоты    (трилон  Б)   ч.д.а.   Вода

дистиллированная. Гидроксид  натрия х.ч. Муравьиная кислота ч.д.а.

Серная кислота х.ч. Ионообменная смола   КУ-2  в  H-форме.  Бумага

индикаторная,  универсальная. Стандартный раствор диквата в спирте

с  содержанием  препарата  100  мкг/мл.   Проявляющий   реагент  -

20-процентный водный раствор гидроксида натрия.

Приборы, аппаратура и посуда. Воронки химические. Воронка Бюхнера, диаметр 13 см. Колба Бунзена на 1 л. Стеклянный холодильник. Хроматографическая колонка-бюретка на 25 мл. Круглодонная колба со шлифом на 1 л. Колбы конические вместимостью 50, 250 мл. Весы аналитические, технические, разновесы. Камера хроматографическая. Баня водяная. Шкаф сушильный лабораторный. Камера для опрыскивания хроматографических пластинок. Эксикатор. Пульверизаторы стеклянные. Вентилятор или фен. Прибор для облучения УФ-светом (лампа ПРК-4). Ступки фарфоровые разные. Чашки фарфоровые разные. Цилиндры мерные. Пипетки мерные. Фильтры бумажные. Микрошприцы. Стекловата. Водоструйный насос.

Подготовка колонки с ионообменной смолой КУ-2 в H-форме. В нижнюю часть бюретки на 25 мл помещают немного стекловаты, предварительно очищенной концентрированной серной кислотой, промытой дистиллированной водой и высушенной. Затем в колонку вносят водную взвесь 3,5 г катионита КУ-2 и промывают 50 мл дистиллированной воды со скоростью 5 мл/мин. После этого колонка готова для работы.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу гомогенизированных тканей рыб массой 20 г помещают в круглодонную колбу, прибавляют 40 мл воды и 2 мл концентрированной серной кислоты, перемешивают и проводят гидролиз при кипячении с обратным холодильником на электроплитке в течение 4 - 5 ч. После охлаждения в колбу через холодильник прибавляют 10 мл воды и гидролизат фильтруют под вакуумом через бумажный фильтр, помещенный в воронку Бюхнера, в колбу Бунзена. Фильтр промывают двумя порциями воды по 50 мл, фильтрат переносят в химический стакан и нейтрализуют до pH 8 - 9, прибавляя 10 н раствор гидроксида натрия. Затем добавляют 5-процентный раствор трилона Б до pH 6 - 7 (контролируют универсальной индикаторной бумагой) и пропускают фильтрат через хроматографическую колонку, заполненную катионитом КУ-2 в H-форме. Дикват адсорбируется на смоле, а коэкстрактивные вещества проходят через колонку. Затем колонку промывают 150 мл 0,1 н раствора хлороводородной кислоты, которую отбрасывают, а дикват элюируют из колонки 50 мл 6 н раствора хлороводородной кислоты. Элюат концентрируют в фарфоровой чашке путем выпаривания на кипящей водяной бане досуха.

Пробу воды объемом 100 мл помещают в фарфоровую чашку и выпаривают на кипящей водяной бане досуха. При исследовании окрашенных образцов воды из прудов пробы предварительно очищают на колонке с катионитом КУ-2 в режимах, описанных для рыбы.

    Хроматографирование  в  тонком  слое.  Сухой  остаток  пробы в

фарфоровой чашке растворяют в 0,2 мл спирта и с помощью шприца или

микропипетки  наносят  на  хроматографическую  пластинку "Силуфол"

УФ   , отступив от нижнего и бокового краев на 2 см. Диаметр пятна

  254

не  должен  превышать  1  см.  Остаток экстракта в чашке тщательно

смывают  двумя  порциями  по 0,2 мл растворителя и наносят в центр

первого  пятна.  На  "стартовую  линию"  через 1,5 - 2 см от пробы

наносят  стандартные  растворы  диквата,  содержащие  5  и  10 мкг

препарата   (или   другие   количества,   близкие  к  определяемым

концентрациям).

    Пластинку   с   нанесенными   растворами   помещают  в  первую

хроматографическую  камеру,  на  дно  которой за 30 мин. до начала

хроматографирования   наливают    96-процентный    этиловый  спирт

ректификат или смесь  гексан  -  этилацетат (7:3).  Край пластинки

погружают  в  подвижный  растворитель  не  более  чем  на  0,5 см.

Хроматографирование  проводят  до тех пор,  пока  растворитель  не

поднимется  на 10 см,  пластинку вынимают из камеры и оставляют на

10  - 15 мин. в вытяжном шкафу для испарения растворителя.  Первая

хроматографическая    камера    служит   для   очистки   проб   от

коэкстрактивных  веществ.  При  хроматографировании  в  спирте или

смеси гексан - этилацетат (7:3) дикват остается на стартовой линии

(R  - 0),   а   коэкстрактивные  вещества  поднимаются  с  фронтом

  f

растворителя.

    Затем  хроматограмму помещают во вторую камеру, предварительно

заполненную  смесью муравьиная кислота - вода (4,5:1). Когда фронт

растворителя   поднимется  на  10  см,  хроматограмму  вынимают  и

оставляют   на  10  мин.  в  вытяжном  шкафу  для  удаления  паров

растворителя. Далее хроматограмму опрыскивают раствором гидроксида

натрия  с последующим облучением хроматограммы УФ-светом в течение

6  -  8 мин. до появления пятен желтого цвета. Величина R  диквата

                                                         f

0,60 +/- 0,05.

Обработка результатов анализа. Количественное определение диквата проводят путем сравнения площадей и интенсивности окрасок пятен пробы и стандартных растворов в пределах концентрации до 20 мкг. При больших концентрациях препарата следует анализировать пропорциональную часть исследуемого экстракта.

Содержание диквата в исследуемой пробе (X, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле:

                                  A

                              X = -,

                                  P

где:

A - количество препарата, найденное в пробе путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен со стандартом, мкг;

P - масса или объем исследуемой пробы, г или мл.