Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1989 г. N 5021-89

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СМЕСИ КАРБОФУРАНА С БЕНОМИЛОМ И ТМТД

(ПРЕПАРАТ КОМБИ) В РАСТЕНИЯХ САХАРНОЙ СВЕКЛЫ

МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Краткая характеристика препарата. Препарат КОМБИ, или фурадан-300, содержит 27,2% карбофурана; 5,22 - беномила; 5,22 - ТМТД и 62,36% инертного наполнителя. Характеристику карбофурана см. на с. 224; беномила - на с. 477 (т. 1); ТМТД - на с. 394 (т. 1).

Принцип метода. Метод основан на извлечении смеси пестицидов из исследуемой пробы, подкисленной до pH 3 водой, очистке перераспределением пестицидов в хлороформ с последующим определением в тонком слое адсорбента.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблицах 166, 167.

Таблица 166

ДИАПАЗОН ОПРЕДЕЛЯЕМЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ

И ЦВЕТ ПЯТЕН ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ РАЗЛИЧНЫХ ПРОЯВЛЯЮЩИХ РЕАГЕНТОВ

┌─────────────┬──────────────────┬─────────────────────┬──────────────────┐

│  Пестицид   │Номер проявляющего│Диапазон определяемых│   Цвет пятен     │

│             │    реагента      │  концентраций, мкг  │                  │

├─────────────┼──────────────────┼─────────────────────┼──────────────────┤

│Карбофуран   │1; 2              │0,1 - 3              │Бордовые          │

│             │1; 3              │0,1 - 3              │Желтые            │

│             │1; 4              │0,1 - 3              │Синие             │

│             │7                 │0,1 - 5              │Сине-фиолетовые   │

│             │УФ-свет           │0,05 - 10            │Сиреневые         │

│ТМТД         │1; 2              │0,5 - 3              │Бурые             │

│             │4                 │0,5 - 3              │Оранжевые         │

│             │5                 │0,05 - 10            │Голубые           │

│             │6                 │0,05 - 5             │Светло-зеленые    │

│             │7                 │0,5 - 10             │Белые             │

│             │УФ-свет           │0,05 - 10            │Сиреневые         │

│Беномил, БМК │5                 │0,5 - 10             │Голубые           │

│             │7                 │1,0 - 10             │Сине-фиолетовые   │

│             │УФ-свет           │0,5 - 10             │Сиреневые         │

└─────────────┴──────────────────┴─────────────────────┴──────────────────┘

Таблица 167

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА (N = 5, P = 0,95)

┌─────────────┬──────────┬────────────┬────────────┬──────────┬───────────┐

│Анализируемая│ Пестицид │   Предел   │  Среднее   │Стандарт- │Доверитель-│

│    проба    │          │обнаружения,│  значение  │ное откло-│ный интер- │

│             │          │   мг/кг    │определения,│нение, %  │вал, %     │

│             │          │            │      %     │          │           │

├─────────────┼──────────┼────────────┼────────────┼──────────┼───────────┤

│Семена       │Карбофуран│0,50        │95,0        │+/- 1,8   │+/- 2,4    │

│             │Беномил   │1,00        │83,5        │+/- 4,7   │+/- 7,1    │

│             │БМК       │1,00        │82,4        │+/- 4,9   │+/- 7,5    │

│             │ТМТД      │0,25        │92,0        │+/- 3,7   │+/- 3,2    │

│Зеленая масса│Карбофуран│0,01        │81,8        │+/- 4,9   │+/- 7,6    │

│             │Беномил   │0,10        │79,0        │+/- 7,6   │+/- 15,9   │

│             │БМК       │0,10        │79,9        │+/- 6,5   │+/- 10,2   │

│             │ТМТД      │0,01        │80,8        │+/- 5,2   │+/- 8,1    │

│Корнеплоды   │Карбофуран│0,01        │91,8        │+/- 3,7   │+/- 5,1    │

│             │Беномил   │0,10        │79,5        │+/- 6,1   │+/- 9,7    │

│             │БМК       │0,10        │82,5        │+/- 5,2   │+/- 8,0    │

│             │ТМТД      │0,01        │91,5        │+/- 6,5   │+/- 9,0    │

└─────────────┴──────────┴────────────┴────────────┴──────────┴───────────┘

Избирательность метода. Метод специфичен.

    Реактивы   и   растворы.   Ацетон  х.ч.  н-Гексан  ч. Этиловый

спирт-ректиф.  96-процентный.   Хлороформ   х.ч.   Хлороводородная

кислота. Уксусная кислота. Лимонная кислота особой  чистоты.  Вода

дистиллированная. Безводный сульфат натрия  ч.д.а. Кали едкое х.ч.

Перманганат калия ч.д.а. п-Нитроанилин ч.д.а. Нитрит  натрия  х.ч.

Хлорид меди ч. Нитрат серебра ч.д.а.  Бромфеноловый  синий  ч.д.а.

о-Толидин х.ч. Соли диазония: прочный синий Б; прочный красный  Б;

прочный   голубой   Б.   Пластинки   "Силуфол"    УФ   .    Бумага

                                                    254

фильтровальная.    Карбофуран   99,5-процентный,   х.ч.    Беномил

99-процентный х.ч. БМК 99-процентный, х.ч. ТМТД 99-процентный х.ч.

КОМБИ к.э.

Приготовление стандартных растворов. Беномил 10,5 мг, 10,5 мг ТМТД и 54,4 мг карбофурана растворяют в 100 мл ацетона; 0,3 г КОМБИ растворяют в 100 мл ацетона. Срок хранения стандартных растворов 10 дней в холодильнике.

Проявляющие реагенты. N 1 - 15-процентный раствор гидроксида калия в спиртово-водном растворе - 15 г KOH растворяют в 60 мл этилового спирта и 40 мл воды; N 2 - смешивают перед употреблением в соотношении 10:1 0,1-процентный раствор п-нитроанилина в 0,1 н растворе хлороводородной кислоты и 4-процентный водный раствор нитрита натрия; N 3 - 0,01-процентный раствор солей диазония в ацетоне; N 4 - 0,5-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане; N 5 - смесь (1:1) 0,05-процентного раствора бромфенолового синего в 50-процентном этиловом спирте с 1-процентным раствором в ацетоне; 1-процентный раствор лимонной кислоты или 5-процентный раствор уксусной кислоты; N 6 - 1-процентный раствор хлорида меди (II) в этиловом спирте; N 7 - о-толидин - йодид калия. о-Толидин 0,2 г растворяют в 2 мл уксусной кислоты; 0,8 г йодида калия растворяют в 2 мл дистиллированной воды, растворы смешивают и доводят объем раствора водой до 200 мл.

Раствор для хлорирования. Смешивают равные объемы 3-процентного раствора перманганата калия и хлороводородной кислоты.

Приборы и посуда. Весы технические. Весы аналитические 2-го класса. Мерные колбы на 100 мл. Водяная баня. Микропипетки. Электроплитка. Аппарат для встряхивания. Круглодонные колбы на 250 мл. Пластинки для тонкослойной хроматографии "Силуфол". Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок. Камера для хроматографирования. Эксикатор. Колбы плоскодонные со шлифом на 500 мл. Воронка делительная на 500 мл. Вакуумный насос. Хроматоскоп.

Ход анализа. Экстракция. В коническую колбу на 50 мл помещают 0,4 г семян (20 шт.), заливают 20 мл хлороформа. Встряхивают в течение 1 ч. Фильтруют через безводный сульфат натрия, отгоняют хлороформ на ротационном испарителе до 0,5 - 1 мл. Переносят в пробирку, доводят объем до 2 мл, делят на две равные части и проводят анализ, как при определении в растениях.

Для проверки качества обработки семян КОМБИ берут 0,2 г семян (10 шт.), заливают 10 мл хлороформа. Экстрагируют в течение 1 ч. Хлороформ сливают в мерную пробирку, измеряют объем, доводят до 10 мл. Аликвотную часть 0,05 - 0,1 мл наносят в две точки с правой и левой части пластинки. Дальше определение проводят так же, как в растениях.

Пробу растений сахарной свеклы и корнеплодов (20 - 50 г) измельчают, помещают в коническую колбу и заливают 100 - 150 мл подкисленной воды с pH 3. Экстракцию проводят на аппарате для встряхивания в течение 1 ч.

Экстракт переносят в делительную воронку и трижды проводят реэкстракцию хлороформом (100, 50, 50 мл) по 5 мин. Полученный экстракт фильтруют через воронку с бумажным фильтром и 15 г безводного сульфата натрия в круглодонную колбу, отгоняют хлороформ на водяной бане или ротационном испарителе до 0,5 - 1 мл. Остаток переносят в мерную пробирку, доводят до объема 1 - 1,5 мл хлороформом, делят на две равные части и наносят на пластинку с левой и правой стороны на расстоянии 1,5 см от краев. Рядом наносят стандартные растворы КОМБИ или смесей препаратов.

Хроматографирование. Пластинку помещают в хроматографическую камеру, в которую налита подвижная фаза - смесь гексан - ацетон (3:2) или хлороформ. Когда фронт растворителя поднимется на 10 см, пластинку вынимают и сушат на воздухе.

Пластинку просматривают под УФ-светом. Светящиеся пятна карбофурана, ТМТД, беномила и БМК обводят простым карандашом.

Для дополнительной идентификации соединений можно использовать проявляющий реагент N 6. При использовании других проявляющих реагентов поступают следующим образом. Правую половину пластинки закрывают фильтровальной бумагой, левую опрыскивают реагентом N 1. Затем пластинку подсушивают на воздухе и опрыскивают реагентами N 2, 3, 4. После опрыскивания пластинок бромфеноловым реагентом N 5 через 1 - 2 мин. пластинки опрыскивают растворами лимонной или уксусной кислоты. Перед опрыскиванием реагентом N 7 пластинку обрабатывают парами хлора и проветривают.

Для обнаружения ТМТД можно использовать специфический проявитель N 6.

    Величина   R   в  подвижной  фазе  н-гексан  -  ацетон  (3:2):

                f

карбофурана  -  0,45;  беномила - 0,65; БМК - 0,25; ТМТД - 0,50; в

хлороформе:  карбофурана - 0,25; беномила - 0,45; БМК - 0,15; ТМТД

- 0,55.

    Обработка   результатов  анализа.  Содержание  препаратов  (X,

мг/кг)  определяют  сравнением  площади пятен стандартов и проб по

формуле:

                                   ASV

                              X = -----,

                                  PS V

                                    А А

    где:

    A - количество препарата в анализируемой пробе, мкг;

    P - масса анализируемой пробы, г;

    S   и   S   -  площади  пятен  стандартного  и  анализируемого

             А

растворов, кв. мм;

    V и V  - объемы пробы и аликвоты, мл.

         А

Требования безопасности. Необходимо выполнять все меры безопасности при работе с токсичными веществами, кислотами и щелочами.