Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1989 г. N 5013-89

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДРОППА В СЕМЕНАХ ХЛОПЧАТНИКА

И ВИНОГРАДЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны Н.А. Грузинской, К.Ф. Новиковой, Л.М. Шехтман (ВНИИХСЗР).

Краткая характеристика препарата дана в Методических указаниях N 2807-83.

Принцип метода. Метод основан на извлечении дроппа из анализируемого объекта этилацетатом, очистке экстракта перераспределением в соляную кислоту, а затем, после подщелачивания раствора, - в этилацетат и определении дроппа методом ТСХ.

Метрологическая характеристика метода. Предел обнаружения в хроматографической пробе 0,03 мкг. Предел определения в семенах хлопчатника 0,025, винограде 0,001 мг/кг. Среднее значение определения стандартных количеств дроппа при n = 13 для семян хлопчатника 85 +/- 12%; при n = 30 в винограде 77 +/- 5,6%. Доверительный интервал (при p = 0,95, n = 5), %: для семян хлопчатника +/- 15, винограда +/- 7%.

Избирательность метода. Метод селективен. Хлор- и фосфорорганические пестициды, применяющиеся в хлопководстве и виноградарстве, определению не мешают.

Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. Гексан х.ч. Этилацетат свежеперегнанный х.ч. Гидроксид натрия 4 н. Сульфат натрия безводный х.ч. Хлороводородная кислота 0,1 н. Ледяная уксусная кислота 5-процентная. Пластинки "Силуфол". Стандартный раствор дроппа в ацетоне концентрацией 10 и 100 мкг/мл. Бромфеноловый реагент (растворяют 0,05 г бромфенолового синего в 10 мл ацетона и доводят до 100 мл 0,5-процентным раствором азотнокислого серебра в смеси ацетон-вода (3:1). Раствор хранят в темноте в прохладном месте. Раствор стабилен в течение 2 недель.

Приборы, аппаратура и посуда. Хроматографическая камера. Аппарат для встряхивания. Ротационный вакуумный испаритель. Кофейная мельница. Делительные воронки на 500 мл. Колбы конические на 250 и 500 мл; круглодонные на 250 мл; мерные на 50 и 100 мл. Пипетки на 0,1; 1; 5 и 10 мл. Пульверизатор.

Подготовка к определению. Хроматографические камеры заполняют системами подвижных растворителей гексан-ацетон (4:3) за 1 ч до начала хроматографирования для насыщения парами растворителей. Уровень подвижных растворителей в камере не должен превышать 0,7 - 1 см от уровня дна камеры.

Хранение проб. Срок хранения проб 3 мес.

    Ход  анализа.  Пробу  семян измельчают с помощью  кофейной  мельницы до

размера  частиц,  равного  размеру частиц манной крупы. Виноград измельчают

ножницами.   Навеску   семян  (20  г)  или  винограда  (30  г)  помещают  в

плоскодонную колбу на 250 мл, заливают этилацетатом (100 мл) и оставляют на

ночь.  Утром  экстракт  фильтруют  через  бумажный  фильтр "синяя лента"  в

круглодонную колбу на 250 мл.  Экстракцию повторяют еще дважды этилацетатом

порциями  по  75  мл,  встряхивая  по  15 мин.  Из  объединенного экстракта

этилацетат  полностью отгоняют на ротационном испарителе.  В колбе остается

масло  в  случае  анализа  семян  или сахара при анализе  винограда.  Колбу

промывают   0,1  н   HCl  (150   мл),   собирая   солянокислый   раствор  в

делительную  воронку  на  500 мл,  и  дважды промывают гексаном порциями по

30 мл,  встряхивая по 5 мин.  В  случае  анализа  винограда к солянокислому

экстракту  добавляют  150 мл  дистиллированной воды.  После второй промывки

гексаном  солянокислый  раствор  фильтруют  через  бумажный  фильтр  "синяя

лента".  Гексановый  слой  отбрасывают.  К солянокислому раствору добавляют

4 мл  4 н  раствора  едкого  натра  до  pH 10 и  дропп  трижды экстрагируют

этилацетатом порциями по 50 мл.  Этилацетатный экстракт сушат над безводным

сульфатом  натрия,  фильтруют в круглодонную колбу  на 250 мл  и  с помощью

ротационного вакуумного испарителя полностью  отгоняют растворитель.  Сухой

остаток  после  удаления растворителя смывают со стенок колбы количественно

2 - 3  мл  ацетона  в  пробирку с оттянутым кончиком.  В  пробирку помещают

заплавленный  сверху  стеклянный  капилляр и упаривают  ацетон  нагреванием

пробирки на горячей водяной бане до объема около 0,1 мл.  Остаток с помощью

того  же  капилляра,  но  с  отломленным  заплавленным  концом  наносят  на

хроматографическую пластинку, предварительно промытую ацетоном. Параллельно

на пластинку микрошприцем наносят серию стандартных растворов с содержанием

дроппа 2; 1; 0,5 и 0,2 мкг. Хроматограмму развивают в системе гексан-ацетон

(4:3).   После  поднятия  фронта  подвижного  растворителя  на  10 - 12  см

пластинку вынимают  из  камеры  и  оставляют  при комнатной  температуре на

5 - 10 мин.  для испарения растворителя, а затем хроматограмму обрабатывают

из пульверизатора раствором  бромфенолового реагента.  Пластинку помещают в

сушильный шкаф и выдерживают в течение 10 мин. при температуре  60 - 80 °C.

После  охлаждения  пластинку  обрабатывают  5-процентным раствором уксусной

кислоты.   Дропп   на   пластинках   проявляется  в  виде  синих  пятен  на

лимонно-желтом фоне с R  0,41 +/- 0,02.

                       f

Обработка результатов анализа. Содержание дроппа (тидиазурона) в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

                                      A

                                  X = -,

                                      P

где:

A - количество дроппа, найденное в хроматографируемой пробе методом соотношения со стандартами, мкг;

P - навеска анализируемой пробы, г.