Утверждены

Министерством здравоохранения СССР

8 июня 1989 г. N 5009-89

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТОПАЗА В СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ КУЛЬТУРАХ,

ПОЧВЕ И ВОДЕ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

    Топаз   (CGA 71818)       -     1-/2-(2,4-Дихлорфенил)пентил/-

1H-1,2,4-триазол.  Белый  кристаллический порошок. Т.  пл.  60 °C.

Растворимость в воде 70 мг/л, растворим в большинстве органических

растворителей.   Предложен   в   качестве   фунгицида  защитного и

искореняющего  действия  для  борьбы  с мучнистой  росой,  паршой,

ржавчиной,  септориозом,  гнилью и др. в сельском хозяйстве.  ЛД

                                                                50

для крыс 2125 мг/кг.

              Cl

        _____/                                        C  H  Cl N .

    Cl_//   \\__CH-CH -N-N                             13 15  2 3

       \ ___ /   │   2 / \\

         ---    C H _H \\ /                           М.м. 284,19.

                 3 7     N

2. Метод определения топаза

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

    Метод   основан   на   определении   топаза  газожидкостной  и

тонкослойной  хроматографией после извлечения его из анализируемой

пробы  органическим  растворителем,  из  воды  -  хлороформом,  из

растений  -  50-процентным  водным ацетоном, из почвы - смесью ацетона с

0,05 н CaCl  (1:1)  и дальнейшего  перераспределения  между  двумя

           2

несмешивающимися растворителями.

    2.1.2. Метрологическая характеристика метода

    ГЖХ

    Минимально детектируемое количество    0,01 н

    Чувствительность метода                0,005 мг/кг

    Среднее значение определения           88,1%

    Стандартное отклонение                 2,2%

    Доверительный интервал среднего,       83,1 +/- 2,2

    p = 0,95 и n = 5

    ТСХ

    Минимально детектируемое количество    2 мкг

    Чувствительность метода                0,1 - 0,5 мг/кг

    Среднее значение определения           68%

    Стандартное отклонение                 4,6%

    Доверительный интервал среднего,       68 +/- 4,6

    p = 0,95 и n = 5

2.1.3. Избирательность метода

Определению могут мешать препараты из группы триазолов.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, хч, ГОСТ 2603-79.

н-Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.

Натрий сернокислый безводный, чда, ГОСТ 4166-79.

Натрий хлористый, чда, ГОСТ 4233-77.

Неподвижная жидкая фаза: 5% SE-30 на хроматоне N-AW-DMCS.

5% XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS (0,125 - 0,160 мм).

Стандартный раствор топаза в гексане с содержанием фунгицида 1 мкг/мл, срок хранения в холодильнике 1 месяц.

ТСХ

Ацетон, ч, ГОСТ 2601-79.

Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.

Хлороформ, ч, ГОСТ 20015-74.

Бромфеноловый синий, ТУ 6-09-3719-83.

Лимонная кислота, осч 6-4, ТУ 6-09-584-75, 2-процентный раствор.

Нитрат серебра, ч, ГОСТ 1277-75.

Пластинки "Силуфол" (Хемапол, ЧССР).

Сульфат натрия безводный, ч, ГОСТ 4166-76.

Подвижная фаза ацетон - хлороформ - 1:9.

Проявляющий реактив: А - 50 мг бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона.

Раствор Б: 500 мг нитрата серебра растворяют в 20 мл воды и прибавляют 60 мл ацетона.

Растворы А и Б сливают в мерную колбу на 100 мл и доводят ацетоном до метки. После обработки БФС пластинку обесцвечивают 2% раствором лимонной или уксусной кислоты.

Стандартный раствор топаза, содержащий 100 мкг/мл, готовят растворением 10 мг препарата в мерной колбе на 100 мл ацетоном (гексаном). Хранят в холодильнике не более 2-х месяцев.

2.3. Посуда и приборы

Аппарат для встряхивания колб АВУ-1, ТУ 64-11081-83.

Воронки делительные ВД, ГОСТ 25336-82.

Воронки химические, ГОСТ 25336-82.

Колонка хроматографическая стеклянная (1000 мм x 3 мм).

Колбы конические со шлифами, ГОСТ 25336-82.

Колбы круглодонные ОНТ-50-14/32 ТС, ГОСТ 25336-82.

Газовый хроматограф с детектором постоянной скорости рекомбинации (ДПР) или по захвату электронов (ДЭЗ).

Ротационный вакуумный испаритель ИР, ТУ 25-11-917-76.

Микрошприц МШ-10М, ТУ 2-833-106.

Вата гигроскопическая.

Бумажные фильтры, ТУ 6-08-1678-77.

Холодильник бытовой.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Подготовка хроматографической колонки для ГЖХ

Стеклянную колонку (1 м x 3 мм), промытую органическими растворителями (ацетон:этиловый спирт:петролейный эфир - 1:1:1), кондиционируют при 270 °C в течение 8 часов, скорость азота - 30 - 40 мл/мин.

2.4.2. Отбор проб и подготовка их к анализу

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в сельскохозяйственной продукции, продуктах питания и объектах окружающей среды", утвержденными заместителем Главного санитарного врача СССР 21.08.1979 г., N 2051-79.

2.5. Проведение определения

Метод ГЖХ

2.5.1. Экстракция топаза из проб

Вода. 500 мл воды помещают в делительную воронку, добавляют 5 - 7 г хлористого натрия, хорошо перемешивают и топаз экстрагируют 50 мл хлороформа. Смесь в течение 2 - 3 мин. осторожно встряхивают. Экстракцию повторяют трижды. После разделения слоев хлороформный экстракт сушат безводным сульфатом натрия. Концентрируют под вакуумом при температуре не выше 50 °C до объема 1 - 2 мл. Растворитель полностью удаляют струей инертного газа. К сухому остатку добавляют 1 мл гексана, перемешивают. Аликвоту 3 - 5 мкл вводят в хроматограф.

    Почва.  20  г  пробы помещают в коническую колбу (на 250 мл) и

прибавляют 50 мл смеси (1:1) ацетон - 0,05 н водный раствор CaCl .

                                                                2

Встряхивают  30  мин., отделяют фильтрат, а пробу экстрагируют еще

дважды  смесью  растворителей.  Объединяют  фильтраты,  помещают в

морозильную камеру на 1 час, затем фильтруют. Переносят экстракт в

делительную   воронку,  прибавляют  5  г  хлорида  натрия,  хорошо

перемешивают  и реэкстрагируют топаз дважды по 25 - 30 мл гексана.

Объединяют гексан, сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют

до объема 1 - 2 мл. Аликвоту вводят в хроматограф.

Растительные пробы. Растительную пробу измельчают, отбирают для анализа навеску массой 20 г, помещают в коническую колбу, заливают 100 мл 50-процентного водного ацетона. Встряхивают в течение 1 часа. Затем экстракт фильтруют через вату. Экстракцию повторяют трижды. Объединенный раствор помещают в морозильную камеру на 1 час. Для удаления выпавших хлопьев (или осадка) раствор фильтруют через бумажный фильтр. После окончания фильтрации фильтр промывают 5 - 7 мл холодного 50-процентного ацетона. Отфильтрованный раствор переносят в делительную воронку, прибавляют 5 г хлорида натрия, хорошо перемешивают и реэкстрагируют топаз трижды по 25 - 30 мл гексана. Объединяют гексановый экстракт, сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют до объема 1 - 2 мл при температуре не выше 40 - 60 °C. Аликвоту вводят в хроматограф.

2.5.2. Условия хроматографирования

Хроматограф марки "Цвет" или аналогичный прибор с детектором ДПР (ДЭЗ).

Условия хроматографирования при работе на ДПР (ДЭЗ):

температура колонки - 240 °C, испарителя - 240 °C, детектора - 260 °C;

скорость газа-носителя (азота) - 40 мл/мин.

Хроматографическая колонка стеклянная размером 1000 x 3 мм, заполненная 5% SE-30 или 5% XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS (0,125 - 0,160 мм). Время удерживания на фазе 5% SE-30 - 1 мин. 35 сек., на фазе 5% XE-60 1 мин. 20 сек. Линейность детектирования - 0,01 - 2,5 нг.

2.6. Обработка результатов

Содержание топаза в анализируемой пробе (X) в мг/кг или мг/л определяют методом соотношения со стандартом высот пиков и рассчитывают по формуле:

                          H  x V  x C x V

                           2    1        3

                      X = ----------------,

                            H  x V  x P

                             1    2

    где:

    X - количество препарата в пробе, мг/кг или мг/л;

    C  -  количество препарата в стандартном растворе, введенном в

хроматограф, мкг/мл;

    H  - высота пика стандарта, мм;

     1

    H  - высота пика анализируемого раствора, мм;

     2

    V   -  объем  стандартного раствора, введенного в хроматограф,

     1

мкл;

    V   - объем анализируемого раствора, введенного в хроматограф,

     2

мкл;

    V  - объем анализируемой пробы, мл;

     3

    P - навеска пробы, г.

Метод ТСХ

2.6.1. Экстракцию и очистку проб воды, почвы и растительного материала проводят таким же путем, как и в случаях ГЖХ.

Полученные экстракты выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 - 50 °C до 0,3 - 0,5 мл.

2.6.2. Идентификация и количественное определение топаза

Пробу, сконцентрированную до объема 0,3 - 0,5 мл, количественно наносят при помощи капилляра на хроматографическую пластинку так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Центр пятна должен быть на расстоянии 2 см от нижнего края пластинки. Колбу с экстрактом 2 - 3 раза смывают порциями гексана, который также наносят в центр пятна. Справа и слева от пробы наносят серию стандартных растворов топаза, содержащих 2 мкг, 5 мкг, 10 мкг препарата.

    Пластинку хроматографируют в  системе  хлороформ:ацетон (9:1).

После  хроматографирования  пластинку высушивают на воздухе, после

чего  обрабатывают  из  пульверизатора  проявляющим реактивом БФС.

После  высушивания  пластинку обесцвечивают раствором лимонной или

уксусной  кислоты.  Топаз  проявляется  в виде пятна ярко-голубого

цвета на желтом фоне. Величина R  топаза = 0,45 +/- 0,05.

                                f

    Содержание топаза в исследуемой пробе вычисляют по формуле:

                           A

                       X = - мг/кг (мг/л),

                           P

где:

A - количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;

P - навеска пробы в г или мл.

3. Требования безопасности

Выполняются в соответствии с "Правилами устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санэпидучреждений системы МЗ СССР" N 2455-81 от 20.10.81.