Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1989 г. N 5005-89

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АПОЛЛО В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ПЛОДОВЫХ КУЛЬТУРАХ

МЕТОДАМИ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

    Краткая   характеристика   препарата.   Аполло   -  3,6-бис(2-

хлорофенил)-1-2,4-5-тетразин.      Брутто-формула      C  H Cl N .

                                                        14 8  2 4

Молекулярная  масса  303,2.  Общепринятое название - хлорфентезин,

бисхлорфентезин.  Красное  кристаллическое вещество без запаха. Т.

пл.  182 - 186 °C. Растворимость, г/л: в хлороформе - 650, бензоле

- 2,5, гексане < 1, воде - 0,8 мг/л. Для крыс ЛД   > 3000 мг/кг.

                                                50

Принцип метода. Метод основан на определении аполло методами ГЖХ и ТСХ после извлечения его из исследуемой пробы органическим растворителем, очистки от коэкстрактивных веществ в системе жидкость - жидкость.

Метрологическая характеристика методов приведена в таблице 142.

Таблица 142

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АПОЛЛО.

ДИАПАЗОН ОПРЕДЕЛЯЕМЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,005 - 0,1 МГ/КГ

ИЛИ МГ/Л

┌────────────────────┬────────────────┬─────────────┬─────────────────────┐

│Анализируемый объект│Среднее значение│ Стандартное │    Доверительный    │

│                    │ определения, % │отклонение, %│интервал среднего, % │

├────────────────────┴────────────────┴─────────────┴─────────────────────┤

│                    Метод газожидкостной хроматографии                   │

│                                                                         │

│Вода                │91,36           │+/- 2,48     │+/- 3,0              │

│Почва               │81,32           │+/- 3,26     │+/- 3,9              │

│Яблоки              │81,9            │+/- 4,0      │+/- 4,8              │

│Виноград            │78,12           │+/- 4,04     │+/- 4,85             │

│                                                                         │

│                     Метод тонкослойной хроматографии                    │

│                                                                         │

│Вода                │82,14           │+/- 4,72     │+/- 5,7              │

│Почва               │66,2            │+/- 5,6      │+/- 6,7              │

│Яблоки              │62,2            │+/- 3,4      │+/- 4,08             │

│Виноград            │63,8            │+/- 4,6      │+/- 5,52             │

└────────────────────┴────────────────┴─────────────┴─────────────────────┘

Избирательность метода. Препараты, близкие по сфере применения, в условиях ГЖХ определению не мешают. В условиях ТСХ могут мешать препараты, обнаруживаемые с помощью аммиаката серебра.

    Реактивы  и  растворы.  Для  экстракции. Ацетон х.ч. Гексан ч.

Сульфат  натрия.  Для  газожидкостной  хроматографии.  5% SE-30 на

хроматоне N-AW (0,16 - 0,20 мм). Азот газообразный особой чистоты.

Стандартный  раствор  аполло  (5 мкг/мл). Хранят в холодильнике не

более  3 дней. Для тонкослойной хроматографии. Нитрат серебра х.ч.

Пластинки   "Силуфол".  Подвижная  фаза  гексан  -  ацетон  (4:1).

Проявляющий  реагент  -  раствор  аммиаката  серебра  (0,5 г AgNO

                                                                 3

растворяют  в  5  мл  дистиллированной  воды, прибавляют 7 - 10 мл

аммиака  (22,5%)  и  доводят  объем  раствора до 200 мл ацетоном).

Основной стандартный раствор аполло (200 мкг/мл) в ацетоне. Хранят

в холодильнике не более 2 мес.

Приборы, посуда. Посуда мерная (колбы конические, пипетки, цилиндры и др.). Воронки делительные. Колбы грушевидные, круглодонные на 25, 50, 250 мл. Воронки конические. Аппарат для встряхивания. Лампа ртутно-кварцевая. Камера хроматографическая. Пульверизаторы стеклянные. Испаритель ротационный вакуумный. Хроматограф, снабженный ДПР "Цвет" или другой марки. Микрошприц на 10 мкл. Колонка стеклянная - длина 1 м, внутренний диаметр 3 мм (заполнена носителем на 0,5 - 0,6 м).

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу воды (500 мл) помещают в делительную воронку и экстрагируют аполло дважды по 20 мл гексана. Объединенные гексановые экстракты сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют на ротационном испарителе при температуре бани 40 °C до объема 0,3 - 0,5 мл. Досуха отгоняют на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона и определяют методами ТСХ или ГЖХ.

Растительный материал (яблоки, виноград) (25 г пробы) помещают в коническую колбу, приливают 50 мл ацетона, встряхивают 30 мин. Экстракцию повторяют дважды, объединяют ацетоновые экстракты, фильтруют и переносят в делительную воронку. Прибавляют 300 мл дистиллированной воды, хорошо перемешивают и реэкстрагируют аполло дважды по 30 мл гексаном. Объединяют гексан, сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют на ротационном испарителе. Сухой остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона и далее определяют методами ТСХ или ГЖХ.

Пробу почвы (25 г) помещают в коническую колбу, прибавляют 10 мл дистиллированной воды, хорошо перемешивают и заливают 50 мл ацетона. Затем содержимое колбы встряхивают 30 мин. Экстракцию повторяют дважды. Экстракты фильтруют, переносят в делительную воронку, добавляют 300 мл дистиллированной воды и экстрагируют аполло дважды по 30 мин. гексаном. Объединенный гексан сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют. Сухой остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона и далее хроматографируют.

    Условия      хроматографирования.     Метод     газожидкостной

хроматографии.   Носитель  -  хроматон  N-AW  (0,16  -  0,20  мм).

Неподвижная  фаза  5%  SE-30.  Колонка  стеклянная  1 м, заполнена

носителем на 0,5 - 0,6 м. Скорость потока газа-носителя (азота) 50

                                   -12

мл/мин.  Шкала электрометра 20 x 10    А. Температура, °C: колонки

-  220;  испарителя  - 240; детектора - 240. Вводимый объем 5 мкл.

При  указанных условиях хроматографирования препарат дает три пика

- один основной (t   = 4,8 мин.)  и  два  нижних (t   = 2,5 мин. и

                  уд                               уд

7,4 мин.).  Линейный диапазон детектирования (по  основному  пику)

2 - 25 нг.  Минимально  детектируемое  количество (основной пик) -

2 нг.

    Для  количественного  определения  измеряют  площадь основного

пика  в пробе и стандартном растворе (при условии, что пики близки

по   величине   и   определение  ведется  в  диапазоне  линейности

детектора).

    Содержание  аполло в пробе (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по

формуле:

                             C  VS

                              ст  пр

                         X = -------,

                             S  V P

                              ст 1

    где:

    C     -   количество  препарата  во  введенном  в  хроматограф

     ст

стандартном растворе, нг;

    S   - площадь пика исследуемого раствора, кв. мм;

     пр

    S   - площадь пика стандартного раствора препарата, введенного

     ст

в хроматограф, мл;

    V  - объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл;

     1

    V - общий объем экстракта после упаривания, мл;

    P - масса анализируемой пробы, г.

    Метод тонкослойной хроматографии. Пробу, сконцентрированную до

объема 0,1 - 0,2 мл, количественно наносят на пластинку "Силуфол".

Параллельно  наносят  серию  стандартных  растворов  с содержанием

аполло 3, 5, 10 мкг. Хроматографируют в смеси растворителей гексан

-   ацетон   (4:1).   Аполло   в   стандартном  растворе  и  пробе

обнаруживается  на  пластинке  в  виде  пятна  красного цвета. Для

повышения     надежности     идентификации     пластинку     после

хроматографирования  можно  обработать  водно-ацетоновым раствором

аммиаката  серебра и поместить на 30 мин. под УФ-облучение. Аполло

обнаруживается  в  виде  серо-черного  пятна. Величина R  0,47 +/-

                                                        f

0,05.

    Содержание  аполло  в  исследуемой  пробе  (X, мг/кг или мг/л)

вычисляют по формуле:

                                  A

                              X = -,

                                  P

где:

A - количество препарата, найденное на пластинке в пробе, мкг;

P - навеска или объем пробы, г или мл.

Требования безопасности. Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.