Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1989 г. N 5003

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АППЛАУДА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ

(ТОМАТЫ, ОГУРЦЫ, ПЛОДЫ И ЗЕЛЕНАЯ МАССА), ПОЧВЕ, ВОДЕ

МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

    Краткая  характеристика  препарата.  Действующее вещество - 2-

трет-бутилимино-(тетрагидро)-3-изопропил-5-фенил-1,3,5-тиадиазинон

-4.   Брутто-формула   C  H  N OS.   Молекулярная   масса   305,5.

                        16 16 3

Общепринятое   название   -   бупрофезин.  Технический  продукт  -

кристаллическое  вещество белого или желтого цвета, т. пл. 104,5 -

105,5  °C. Медленно разлагается при pH 3 - 5 и стабилен при pH 7 -

10.  Растворимость при 25 °C в хлороформе 52%; ацетоне 25; этаноле

                                         -2

8%. Давление паров  при  25 °C  1,25 x 10   Па. Выпускается в виде

25-процентного с.п.  Препарат  используют  на   овощных  культурах

закрытого  грунта против белокрылки, дельфацидов, цикадок, щитовок

и клеща. Для крыс ЛД   2198 - 2355 мг/кг.

                    50

Принцип метода. Метод основан на извлечении апплауда из растительных проб (томата, огурца) 50-процентным водным ацетоном; из почв - смесью ацетона с 0,05 н раствором хлорида кальция (1:1); из воды - хлороформом, - очистке переэкстракцией в н-гексане и количественном определении методом ГЖХ с ДЭЗ, ДПР или ТИД.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 143.

Таблица 143

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

┌─────────────┬──────────────┬──────────────┬───────────┬─────────────────┐

│Анализируемый│    Предел    │   Среднее    │Стандартное│  Доверительный  │

│   объект    │ определения, │   значение   │отклонение,│интервал среднего│

│             │мг/л или мг/кг│определения, %│     %     │  при p = 0,95;  │

│             │              │              │           │     n = 5, %    │

├─────────────┼──────────────┼──────────────┼───────────┼─────────────────┤

│Вода         │0,0002        │92            │+/- 2,0    │+/- 1,8          │

│Почва        │0,008         │78            │+/- 2,5    │+/- 3,7          │

│Растения     │0,02          │77            │+/- 2,3    │+/- 2,1          │

└─────────────┴──────────────┴──────────────┴───────────┴─────────────────┘

Примечание. Диапазон линейного детектирования 0,2 - 10,0 нг.

Избирательность метода. При данных условиях хроматографирования пестициды типа ювенильных гормонов не мешают определению. Избирательность метода обеспечивается сочетанием селективных детекторов и неподвижных фаз различной полярности.

Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. Гексан х.ч. Сульфат натрия безводный ч.д.а. Хлорид натрия ч.д.а. Этиловый спирт-ректиф. Хлороформ х.ч. Петролейный эфир х.ч. Неподвижная жидкая фаза: 5% SE-30 или 5% XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS (0,125 - 0,160 мм). Азот особой чистоты. Стандартный раствор апплауда в н-гексане - 5 мкг/мл. Раствор стабилен в течение 3 мес. при хранении его в холодильнике.

Посуда и приборы. Колбы конические со шлифами; круглодонные на 50 мл. Воронки: делительные на 250; химические. Аппарат для встряхивания колб АВУ-1. Газовый хроматограф с ДЭЗ, ДПР или ДТИ. Микрошприц на 10 мкл. Хроматографические стеклянные колонки размером 1 м x 3 мм.

Подготовка к определению хроматографической колонки. Стеклянную колонку (1 м x 3 мм) промывают смесью органических растворителей ацетон - этиловый спирт - петролейный эфир (1:1:1). Для этого сначала заливают на 1 часть смесь растворителей, а затем промывают 300 мл ацетона. Колонку сушат в токе азота и заполняют сорбентом с нанесенной на него фазой с помощью вакуумного насоса. Колонку кондиционируют при 270 °C в течение 8 ч. Скорость потока азота 30 - 40 мл/мин.

Хранение проб. Пробы хранят в холодильнике не более 2 недель.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Навеску 10 г измельченных свежих зеленых листьев или 100 г плодов огурца, томатов заливают 100 - 200 мл 50%-ного водного ацетона, встряхивают в течение 1 ч и для лучшей экстракции оставляют на ночь. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр, колбу ополаскивают дважды 30 мл 50%-ного водного ацетона. Объединенные фильтраты помещают в делительную воронку, добавляют 50 - 70 мл дистиллированной воды и 1 - 3 г хлорида натрия. Очистку проводят переэкстракцией апплауда в н-гексан тремя порциями по 25 - 30 мл растворителя. Гексановые фракции фильтруют через безводный сульфат натрия в круглодонную колбу и концентрируют под вакуумом при температуре 40 °C до 10 мл. Аликвоту в количестве 1 - 3 мкл вводят в хроматограф.

Навеску почвы (25 г) заливают 50 мл смеси ацетон - 0,05 н раствор хлорида кальция (1:1), встряхивают в течение 1 ч и оставляют на ночь. Далее анализ ведут так, как описано для растительных проб.

Пробу воды (1 л) помещают в делительную воронку вместимостью 1,5 л, добавляют 5 - 7 г хлорида натрия и 100 мл хлороформа. Смесь в течение 15 мин. энергично встряхивают. После разделения слоев хлороформную фракцию сливают в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл, а водную фракцию вновь переносят в делительную воронку и проводят еще два раза экстракцию апплауда хлороформом порциями по 75 мл. Объединенные фракции хлороформа сушат безводным сульфатом натрия, добавляя в колбу 10 - 12 г соли, или фильтруют через нее. Растворитель концентрируют под вакуумом до 1 - 2 мл, затем полностью удаляют струей воздуха. К сухому остатку добавляют 1 мл гексана. Аликвоту 1 - 3 мкл вводят в хроматограф.

Условия хроматографического определения. Хроматограф с ДЭЗ, ДПР или ТИД. Условия хроматографирования при работе на ДЭЗ, ДПР: температура, °C: колонки - 240; испарителя - 250; детектора - 260. Скорость газа-носителя (азота) 45 мл/мин. Колонка стеклянная (1 м x 3 мм), заполненная 5% SE-30 или 5% XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS (0,125 - 0,160 мм). Время удерживания на 5% SE-30 - 1 мин. 30 с, на 5% XE-60 - 2 мин. 20 с.

Условия хроматографирования при работе на ТИД: температура, °C: колонки - 240; испарителя - 250. Скорость газа-носителя (азота), мл/мин., - 50; водорода - 16 - 18; воздуха - 300. В этих условиях минимально детектируемое количество апплауда 0,5 нг, диапазон линейности 0,5 - 15 нг. Время удерживания на 5% SE-30 - 1 мин. 15 с, на 5% XE-60 - 2 мин. 20 с.

Обработка результатов анализа. Содержание апплауда в анализируемой пробе определяют методом соотношения пиков стандарта и проб. Количество апплауда (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по формуле:

                               H CV

                                2

                           X = -----,

                               H V P

                                1 1

    где:

    C - количество препарата в стандарте, введенном в хроматограф,

нг;

    H ,   H    -   высоты   пиков   соответственно   стандарта   и

     1     2

анализируемого раствора, мм;

    V   - объем анализируемого раствора, введенного в хроматограф,

     1

мкл;

    V - объем анализируемой пробы, мл;

    P - навеска пробы, г.

Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит "зашкаливание", то готовят более разбавленные растворы.

Требования безопасности. Необходимо соблюдать общепринятые правила предосторожности при работе с токсичными, взрывоопасными и легковоспламеняющимися веществами.