Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1989 г. N 4995-89

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПРЕПАРАТА КРАСНОДАР-1 В ПЕРЦЕ СЛАДКОМ,

ТОМАТАХ, ЗЕРНЕ, ВОДЕ, ПОЧВЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ

ХРОМАТОГРАФИИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны Н.Г. Михайлюченко, Е.Б. Усовой, В.Г. Калашниковой (Краснодарский политехнический институт).

    Краткая характеристика препарата. Краснодар-1 - 5-этил-5-гидроксиметил-

2-(2-фурил)-1,3-диоксан. Брутто-формула C  H  O . Молекулярная  масса  212.

                                         11 16 4

Кристаллический  порошок с характерным  слабовыраженным ацетальным запахом,

нелетуч, негигроскопичен. Т. пл. 84,5 - 85,5  °C  без воспламенения. Хорошо

растворяется в спиртах  (бутаноле, этаноле, пропаноле),  слабо - в воде, не

растворяется в гексане, гептане, петролейном эфире.

    ЛД   для теплокровных животных 1225 +/- 102 мг/кг. Препарат не обладает

      50

кожно-резорбтивным  действием,  мутагенными, кумулятивными и канцерогенными

свойствами.

Принцип метода. Метод основан на экстракции препарата из анализируемых проб органическим растворителем (диэтиловый эфир, хлороформ), удалении примесей на хроматографической колонке в тонком слое силикагеля.

Метрологическая характеристика метода. Нижний предел определения 0,5 мкг препарата в пробе или 0,005 мг/кг. Среднее значение определения (%): в сладком перце, томатах и зерне - 78,0 +/- 4,8; в воде - 84,7 +/- 6,2; в почве - 82,8 +/- 11,3. Доверительный интервал среднего при p = 0,95, n = 5 (%): в перце, томатах, зерне - +/- 5,5; в воде - +/- 2,53; в почве - +/- 5,04.

Реактивы и растворы. Этиловый спирт ректиф. Диэтиловый эфир перегнанный. Ацетон х.ч. Хлороформ ч.д.а. н-Гексан х.ч. Хлороводородная кислота х.ч., 2 н раствор. Проявляющий реагент: 2,4-динитрофенилгидразин, 0,5-процентный раствор в 2 н HCl (срок хранения 2 мес.). Подвижная фаза - смесь растворителей гексан-ацетон (2:1). Стандартный раствор препарата Краснодар-1 в ацетоне с содержанием препарата 1000; 100 мкг/мл (срок хранения 1 мес.). Уголь активированный медицинский с размерами частиц, прошедших при просеивании через сито 70 меш, задерживающихся на сите 80 меш, что соответствует фракции частиц с размерами 177 - 210 ммк.

Приборы и посуда. Аппарат для встряхивания. Ротационный вакуумный испаритель (с набором колб). Колбы: для выпаривания круглодонные со шлифами для отгонки растворителей на 250 и 500 мл; мерные на 50 и 100 мл; колба коническая на 250 мл; колба Бунзена на 500 мл. Воронка Бюхнера диаметром 100 мм. Стаканы химические стеклянные на 50 и 100 мл. Колонка хроматографическая стеклянная длиной 50 см, диаметром 15 мм. Микропипетка на 0,1 мл или микрошприц на 10 мкл. Камера хроматографическая. Пульверизатор стеклянный. Пипетки на 1; 5; 10 мл. Пластинки хроматографические. Воронка химическая стеклянная. Делительные воронки на 250 и 500 мл. Стекловата.

Подготовка к определению. Заполнение колонки. Взвесь активированного угля в этаноле выдерживают 30 мин., периодически встряхивая для удаления пузырьков воздуха. Взвесь выливают в колонку до получения слоя 3 см, промывают 30 - 40 мл хлороформа для уменьшения адсорбционной емкости угля, затем 30 - 40 мл этанола.

Приготовление стандартного раствора Краснодар-1. Растворяют 1; 10; 100 мг препарата в 100 мл ацетона непосредственно перед анализом. Получают стандартные растворы препарата с концентрациями 10; 100; 1000 мкг/мл соответственно.

Приготовление подвижной фазы и проявляющего реагента. Гексан и ацетон смешивают в соотношении 2:1. Систему растворителей хранят в плотно закрытой склянке. Проявляющий реагент готовят растворением 0,5 г 2,4 - динитрофенилгидразина в 100 мл 2 н HCl.

Ход анализа. Экстракция. Сухие плоды перца сладкого, томатов, полученные при лиофильной сушке 100 г свежих плодов, заливают 200 мл диэтилового эфира и встряхивают в течение часа на аппарате для встряхивания. Отфильтровывают через воронку Бюхнера, остаток на фильтре промывают 100 мл диэтилового эфира до получения бесцветного фильтрата общим объемом приблизительно 300 мл. Фильтрат концентрируют на ротационном испарителе до объема 0,1 мл, к остатку прибавляют 7 мл этанола, дают постоять 15 - 20 мин. За это время выпадает часть красящих веществ в виде хлопьев. Спиртовой раствор фильтруют через воронку со стекловатой в стаканчик, ополаскивают колбу 1 - 2 мл этанола и выливают в воронку. Фильтрат пропускают через хроматографическую колонку с активированным углем (высота сорбента 3 см). Стаканчик также промывают 1 мл этанола, который переносят на колонку. Колонку промывают еще 30 мл этанола, из него ацетоном элюируют препарат Краснодар-1. Первые 50 мл ацетоновой фракции собирают, а затем упаривают до 0,1 мл и наносят на пластинку.

Измельченные зерна пшеницы (100 г) заливают 100 мл хлороформа, в течение 1 ч встряхивают на аппарате для встряхивания. Отфильтровывают через воронку Бюхнера и далее поступают так же, как при экстракции из плодов.

Сухую почву (100 г) растирают, просеивают через сито с размером отверстий до 1 мм, помещают в коническую колбу с притертой пробкой на 250 мл, заливают 300 мл диэтилового эфира и встряхивают в течение 1 ч. Далее экстракцию проводят так же, как из плодов.

Анализируемую пробу воды (500 мл) помещают в колбу. Экстрагируют препарат 30 мл хлороформа, экстракт сушат безводным сульфатом натрия, упаривают досуха на ротационном испарителе. Сухой остаток растворяют в 0,1 мл ацетона.

    Хроматографирование.  Раствор  препарата Краснодар-1 в ацетоне (0,1 мл)

микропипеткой  или  микрошприцем  наносят на  пластинку "Силуфол", на ту же

пластинку  наносят  стандартные  ацетоновые  растворы.  Пятна  на пластинке

высушивают  в  токе  холодного  воздуха. За 30 мин. до определения в камеру

заливают  систему  растворителей  гексан-ацетон.  Пластинку  помещают таким

образом,  чтобы  нижний  край  был  погружен  в  раствор  на  1  см. Камеру

закрывают.  Когда  фронт растворителя поднимется на высоту 10 см, пластинку

вынимают  и  сушат  в токе воздуха. Сухую пластинку обрызгивают проявляющим

реагентом.   Препарат  проявляется  в  виде   красных   пятен  с  величиной

R  0,53 - 0,6.

 f

Обработка результатов анализа. Количественное определение препарата проводят, сравнивая интенсивность окраски и площадь пятен исследуемых и стандартных растворов. Диапазон измеряемых концентраций 0,005 - 0,03 мкг/мл. Содержание препарата (X, мг/кг, мг/л) рассчитывают по формуле:

                                    AS V

                                      2 2

                                X = -----,

                                    S V P

                                     1 1

    где:

    A - содержание препарата в стандартном растворе, мкг;

    S  и S  - площади пятен соответственно стандарта и пробы, кв. мм;

     1    2

    V  - общий объем экстракта, мкл (10 мкл);

     2

    V  - объем экстракта, нанесенного на пластинку, мкл (1 мкл);

     1

    P  -  масса пробы, взятой для анализа, или объем анализируемой воды, г,

мл.

Требования безопасности. Соблюдают правила безопасности при работе в химических лабораториях.