Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1989 г. N 4994-89

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИРЕТРОИДОВ,

ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ, СЕВИНА И БЕНОМИЛА

ПРИ СОВМЕСТНОМ ПРИСУТСТВИИ В ПЛОДОВО-ОВОЩНЫХ КУЛЬТУРАХ

Метод предназначен для определения пестицидов различного химического строения (синтетических пиретроидов, фосфорорганических пестицидов, севина, беномила) в импортируемой плодово-овощной продукции (замороженные фрукты, овощные смеси) по схеме, которая позволяет определять названные группы пестицидов из одной пробы.

В основу предлагаемой схемы положены методики определения пестицидов указанных групп, утвержденные Минздравом СССР.

Принцип метода. Метод основан на извлечении пестицидов различного химического строения (синтетических пиретроидов, фосфорорганических пестицидов, севина, беномила и БМК) из единой пробы последовательным извлечением водным раствором ацетона и этилацетата. Водно-ацетоновый экстракт делят на две равные части, в одной из которых определяют синтетические пиретроиды, а во второй - фосфорорганические пестициды и севин. В этилацетатном экстракте определяют беномил и БМК (рис. 14).

                       ┌───────────────────────────────┐

                       │Измельчение навески пробы 100 г│

                       └───────────────┬───────────────┘

                                       \/

                       ┌───────────────────────────────┐

                       │Две последовательные экстракции│

                       └───────────────┬───────────────┘

Первая экстракция                      │                       Вторая экстракция

           ┌───────────────────────────┴───────────────────────────┐

           \/                                                      \/

┌────────────────────────────────────────┐             ┌───────────────────────┐

│           Экстракция смесью            │             │Экстракция этилацетатом│

│     ацетон - вода 7:3 (2 x 100 мл)     │             │  (3 x 100; 2 x 75 мл) │

└──────┬───────────────────────────────┬─┘             └───────────┬───────────┘

       \/                              \/                          \/

┌───────────────┐                ┌───────────────┐     ┌───────────────────────┐

│1/2 экстракта -│                │1/2 экстракта -│     │   Реэкстракция HCl    │

│определение СП │                │определение ФОП│     │   (3 x 50 мл), pH 1   │

└──────┬────────┘                └─────┬─────────┘     └───────────┬───────────┘

       \/                              \/                          \/

┌──────────────────────┐   ┌───────────────────────┐   ┌───────────────────────┐

│  Разбавление водой   │   │   Разбавление водой   │   │       Отделение       │

│ (300 мл), экстракция │   │ (100 мл), экстракция  │   │солянокислого раствора │

│в н-гексан (3 x 30 мл)│   │в хлороформ (2 x 30 мл)│   └───────────┬───────────┘

└──────┬───────────────┘   └───────────┬───────────┘               \/

       \/                              \/              ┌───────────────────────┐

┌───────────────┐          ┌───────────────────────┐   │Промывка солянокислого │

│Определение СП │          │    Анализ по схеме    │   │ раствора н-гексаном   │

└──┬─────────┬──┘          │   идентификации ФОП   │   └───────────┬───────────┘

   \/        \/            │       на основе       │               \/

┌─────┐   ┌─────┐          │  хроматоферментного   │   ┌───────────────────────┐

│ ТСХ │   │ ГЖХ │          │         метода        │   │Подщелачивание раствора│

└─────┘   └─────┘          └┬───────────────┬──────┘   │   NaOH до pH 11 - 12  │

                            \/              \/         └───────────┬───────────┘

            ┌───────────────────┐  ┌───────────────┐               \/

            │Определение севина │  │Определение ФОП│   ┌───────────────────────┐

            │   методом ТСХ     │  └────────┬──────┘   │Экстракция этилацетатом│

            └───────────────────┘           │          └───────────┬───────────┘

                                      ┌─────┴───┐                  \/

                                      \/        \/     ┌───────────────────────┐

                                   ┌─────┐   ┌─────┐   │ Анализ БМК и беномила │

                                   │ ТСХ │   │ ГЖХ │   │  по БМК методом ТСХ   │

                                   └─────┘   └─────┘   └───────────────────────┘

Рис. 14. Схема анализа синтетических пиретроидов,

фосфорорганических пестицидов, севина, беномила и БМК

в плодово-овощной продукции

В случае, когда нет необходимости определять остаточные количества синтетических пиретроидов, фосфорорганические пестициды, севин, беномил и БМК можно извлекать из единой пробы путем экстракции этилацетатом, последующего разделения на две равные части, в одной из которых определяют фосфорорганические пестициды и севин, в другой - беномил и БМК (рис. 15).

           ┌─────────────────────────────────────────┐

           │       Измельченная навеска образца      │

           └───────────────────┬─────────────────────┘

                               \/

           ┌─────────────────────────────────────────┐

           │Экстракция этилацетатом (3 раза по 50 мл)│

           └───────────────────┬─────────────────────┘

             ┌─────────────────┴───────────────────┐

             \/                                    \/

┌────────────────────────┐          ┌────────────────────────────┐

│Определение ФОП и севина│          │ Определение беномила и БМК │

│ (1/2 часть экстракта)  │          │    (1/2 часть экстракта)   │

└────────────┬───────────┘          └─────────────┬──────────────┘

             \/                                   \/

    ┌───────────────────┐           ┌────────────────────────────┐

    │  Анализ по схеме  │           │Перераспределение в раствор │

    │ идентификации ФОП │           │           HCl, pH 1        │

    │    на основе      │           └──────────────┬─────────────┘

    │хроматографического│                          \/

    │      метода       │           ┌────────────────────────────┐

    └──┬─────────────┬──┘           │   Промывка солянокислого   │

       \/            \/             │    раствора хлороформом    │

┌───────────┐  ┌───────────┐        └──────────────┬─────────────┘

│Определение│  │Определение│                       \/

│севина ТСХ │  │    ФОП    │        ┌────────────────────────────┐

└───────────┘  └─┬───────┬─┘        │Подщелачивание солянокислого│

                 \/      \/         │       экстракта до pH 11   │

              ┌─────┐ ┌─────┐       └──────────────┬─────────────┘

              │ ТСХ │ │ ГЖХ │                      \/

              └─────┘ └─────┘       ┌────────────────────────────┐

                                    │   Экстракция этилацетатом  │

                                    └──────────────┬─────────────┘

                                                   \/

                                    ┌────────────────────────────┐

                                    │    Анализ методом ТСХ      │

                                    └────────────────────────────┘

Рис. 15. Схема анализа фосфорорганических пестицидов,

севина, беномила и БМК при совместном присутствии

Ход анализа. Экстракция синтетических пиретроидов, фосфорорганических пестицидов, севина, беномила, БМК. Измельчают овощи, фрукты до 0,5 - 1 см, взвешивают по 100 г средней пробы для анализа. Из подготовленного образца дважды экстрагируют пестициды смесью ацетон - вода (7:3) по 100 мл, встряхивая на аппарате для встряхивания каждый раз по 30 мин. Экстракты объединяют, сливая их через фильтр "красная лента". Полученный экстракт делят на две равные части, одну из которых используют для определения синтетических пиретроидов, а другую - для фосфорорганических пестицидов и севина. Из оставшегося образца (овощи, фрукты) беномил и БМК трижды экстрагируют этилацетатом порциями по 100, 75, 75 мл на аппарате для встряхивания по 20 мин. Экстракты объединяют, сливая их через фильтр "красная лента".

Определение синтетических пиретроидов. Половину водно-ацетонового экстракта переносят в делительную воронку, прибавляют 300 мл воды и дважды экстрагируют н-гексаном по 30 мл. Гексановые экстракты объединяют, сушат безводным сульфатом натрия и проводят дальнейшее определение так, как описано на с. 299 (т. 1).

Определение фосфорорганических пестицидов и севина. Половину водно-ацетонового экстракта (100 мл) переносят в делительную воронку, прибавляют 100 мл воды и дважды экстрагируют хлороформом по 30 мл. Хлороформ сливают через воронку со слоем безводного сульфата натрия в колбу для отгонки. Растворитель упаривают на ротационном испарителе под вакуумом при температуре бани 45 °C до 5 мл, прибавляют в колбу 1 мл этанола, а затем продолжают упаривать растворитель до 1 мл. Остаток переносят из колбы в мерную пробирку и ацетоном доводят точно до 2 мл. Далее проводят идентификацию фосфорорганических пестицидов и севина хроматоферментным методом с использованием различных условий активации в соответствии со схемой анализа ФОП, описанной в Унифицированной методике.

В случае необходимости проводят последующее определение фосфорорганических пестицидов методом ГЖХ или ТСХ.

    Следует    отметить,    что    при   определении   ингибиторов

холинэстеразы  по указанной схеме на пластинке без активации севин

обнаруживается совместно с фосфорорганическими пестицидами. Нижний

предел  обнаружения  севина  0,3  нг.  При  хроматографировании  в

хлороформе величина R  севина (0,34 +/- 0,05) близка к величине R

                     f                                           f

ДДВФ  (0,30  +/-  0,05).  Для  идентификации  этих  пестицидов при

совместном  присутствии  оставшийся  экстракт (2 мл) упаривают под

вакуумом при комнатной температуре до 0,2 мл и анализируют методом

ТСХ,  применяя  различные  проявляющие  реагенты:  для севина - на

основе   солей   диазония   по   методике  "Определение  севина  в

биологических   объектах   и   воде",   N   1559-76  от  20.12.76,

опубликованной   в   книге   "Методы   определения  микроколичеств

пестицидов" (М.: Колос, 1983. С. 162 - 163); для ДДВФ - проявление

реагентами  на основе AgNO  или резорцина по методике "Определение

                          3

ДДВФ   в   растительном   материале,  почве  и  воде  тонкослойной

хроматографией"  N  1112-73 от 30.08.73 (М.: Колос, 1977. С. 115 -

117)  или  по  методике  "Определение  хлорофоса  в воде, фруктах,

овощах,  молоке,  мясе  и  кормах хроматографией в тонком слое"  N

1112-73  от  30.08.73  (М.:  Колос,  1977. С. 163 - 166), где ДДВФ

определяют как метаболит хлорофоса.

    Определение  беномила  и  БМК.  Беномил  и  БМК  определяют из

экстракта  этилацетата,  полученного  так,  как  описано  выше. Из

этилацетата  пестициды  (в виде БМК) реэкстрагируют в подкисленный

до  pH  1  водный  раствор  (50  мл  x 3), дважды промывают водный

раствор  хлороформом  по  30  мл,  хлороформ  отбрасывают.  Водный

раствор  подщелачивают  4  н  раствором  едкого  натра до  pH 11 и

экстрагируют  БМК этилацетатом. Экстракт сушат безводным сульфатом

натрия,  концентрируют  до  0,3  мл  и  количественно  наносят  на

хроматографическую  пластинку "Силуфол". Пластинку последовательно

хроматографируют  сначала  в бензоле, давая растворителю подняться

на   12  см,  затем  вынимают  ее  из  камеры,  дают  растворителю

испариться  с  пластинки,  а  затем хроматографируют в ПФ бензол -

метанол  (9:1),  давая  растворителю подняться на 10 см. Проявляют

бромфеноловым   реагентом   без  последующей  обработки  пластинок

раствором лимонной или уксусной кислоты. Беномил и БМК проявляются

в  виде  желтых  пятен  на голубом фоне, R  БМК - 0,30, беномила -

                                          f

0,75. Пределы обнаружения каждого 5 мкг.

Определение фосфорорганических пестицидов, севина, беномила и БМК. Из измельченной средней пробы овощей и фруктов (0,5 - 1 см) берут навеску 100 г, трижды экстрагируют препараты этилацетатом по 100, 75, 75 мл, встряхивая на аппарате по 20 мин. Экстракты объединяют, сливая через воронку со слоем безводного сульфата натрия. Полученный экстракт делят на две части, в одной из которых определяют беномил и БМК, как описано выше, а в другой - фосфорорганические пестициды и севин. Для этого экстракт упаривают на ротационном испарителе под вакуумом до 5 мл, прибавляют 1 мл этанола и продолжают упаривать под вакуумом до ~ 1 мл. Пробу переносят в мерную пробирку, доводят экстракт в пробирке до 2 мл ацетоном и анализируют, как описано выше.

В основу разработки положены: Методические указания по определению синтетических пиретроидов (амбуш, децис, рипкорд, сумицидин) методами ГЖХ и ТСХ в растениях, почве, воде водоемов, N 2473-81 от 22.10.81; Унифицированная методика определения остаточных количеств фосфорорганических пестицидов, N 3222-85 от 11.03.85; Методические указания по определению фосфорорганических пестицидов в растительных продуктах и биологических субстратах методом ТСХЭ, N 2086-79 от 19.10.79; Методические указания по определению остаточных количеств БМК и бенлата по БМК в растительных объектах, почве и воде методом ТСХ, N 1914 от 27.09.78.