"Методические указания по определению хлорорганических инсектицидов в гуза-пае и хлопковой шелухе хроматографическими методами" // Технорма.RU

Утверждены

Минздравом СССР

11 октября 1988 г. N 9712-88

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ИНСЕКТИЦИДОВ В ГУЗА-ПАЕ

И ХЛОПКОВОЙ ШЕЛУХЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ

Краткая характеристика препаратов приведена в Методических указаниях.

Методика определения ГХЦГ, ДДТ и метаболитов в гуза-пае

Принцип метода. Методика основана на извлечении ХОИ из измельченной пробы парами органического растворителя, очистке экстракта методом колоночной хроматографии, концентрировании его и последующем определении с помощью ГЖХ или ТСХ.

Хроматографическое определение в тонком слое проводят на пластинках "Силуфол" в н-гексане. Пластинки проявляют раствором азотнокислого серебра с последующим облучением их УФ-светом. Для определения методом ГЖХ используют ДЭЗ.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 8.

Таблица 8

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ

┌──────────┬─────────────┬─────────┬─────────┬───────────┬────────────┬────────┐

│ Пестицид │ Минимально │Предел │Среднее │Стандартное│Средняя │Довери- │

│ │детектируемое│определе-│значение │отклонение,│квадратичная│тельный │

│ │ количество │ния, │определе-│ % │ошибка сред-│интервал│

│ │ │мг/кг │ния, % │ │него арифме-│при p = │

│ │ │ │ │ │тического, %│0,95, % │

├──────────┴─────────────┴─────────┴─────────┴───────────┴────────────┴────────┤

│ Газожидкостная хроматография │

│ │

│4,4'-ДДТ │0,06 нг │0,007 │89,4 │10,2 │3,4 │8,6 │

│4,4'-ДДЭ │0,01 нг │0,003 │87,3 │15,5 │5,2 │13,5 │

│альфа-ГХЦГ│0,001 нг │0,002 │92,5 │16,4 │5,5 │13,4 │

│гамма-ГХЦГ│0,001 нг │0,001 │94,2 │13,8 │4,6 │11,0 │

│ │

│ Тонкослойная хроматография │

│ │

│гамма-ГХЦГ│0,01 мкг │0,01 │89,4 │4,3 │1,4 │3,5 │

│ДДТ │0,01 мкг │0,05 │85,2 │5,4 │1,8 │4,8 │

└──────────┴─────────────┴─────────┴─────────┴───────────┴────────────┴────────┘

Избирательность метода. Метод избирателен в присутствии остаточных количеств ФОП и коэкстрактивных веществ. Если в пробах присутствуют полихлорированные бифенилы, проводят дополнительное дегидрохлорирование.

Реактивы и растворы. н-Гексан ч. Петролейный эфир (40 - 70 °C). Ацетон ч. Серная кислота х.ч. Сульфат натрия безводный х.ч. Силикагель КСКГ, измельченный, просеянный через сито 100 меш (0,14 мм). Нитрат серебра х.ч. Аммиак водный 25-процентный. Пероксид водорода х.ч. Вода дистиллированная. Хлорид кальция х.ч. Газ-носитель - азот особой чистоты. Твердый носитель N-AW-DMCS (80 - 100 меш) с 5% SE-30. Бумага фильтровальная.

Приборы и посуда. Весы лабораторные второго класса точности с предельной нагрузкой 200 г. Пластины для хроматографии "Силуфол" (15 x 15 см). Аппарат Нааба или Сокслета <*>. Колонки хроматографические. Ротационный вакуумный испаритель. Пульверизатор стеклянный. Электроплитка бытовая. Микрошприцы на 10 мкл МШ-10. Набор пипеток и микропипеток. Цилиндры мерные. Камера для хроматографирования. Осветитель ОКН-11 (или ртутно-кварцевая лампа ДРТ-230). Хроматограф "Газохром-1109" или любой другой с ДЭЗ.

--------------------------------

<*> Руководство по методам исследования, технологическому контролю и учету производства в масложировой промышленности. Л.: ВНИИЖ, 1965.

Подготовка к определению. Насыщенный раствор сульфата натрия в серной кислоте: 20 г соли заливают 200 мл концентрированной серной кислоты. Хранят не более 1 мес. в плотно закрытой склянке.

Силикагель КСКГ, пропитанный серной кислотой: в ступке заливают силикагель раствором, приготовленным из 40 г сульфата натрия и 20 мл концентрированной серной кислоты, готовят перед использованием.

Проявляющий реагент. 0,1 г нитрата серебра растворяют в 2 мл 25-процентного аммиака и доводят объем до 50 мл ацетоном, затем добавляют 0,1 мл пероксида водорода, раствор перемешивают и хранят в темном месте.

Стандартные растворы ХОП готовят растворением навески химически чистых препаратов в н-гексане. Растворы с концентрацией 100 мкг/мл хранят не дольше одного года. Раствор смеси препаратов, взятых в соотношении ДДТ:ДДЭ:альфа-ГХЦГ:гамма-ГХЦГ, равном 6:2:1:1, с концентрацией по ДДТ 3 мкг/мл, хранят не дольше 5 - 6 мес. Рабочий раствор готовят путем разбавления раствора смеси пестицидов до требуемой концентрации и используют для калибровки прибора.

Подготовка хроматографической колонки. Колонку заполняют стекловатой на высоту 1 см, затем силикагелем КСКГ на высоту 3,5 см и силикагелем КСКГ, пропитанным серной кислотой, на высоту 4,5 см. Колонку промывают 30 мл н-гексана или петролейного эфира.

Ход анализа. Навеску гуза-паи (50 г) делят на две равные части, помещают в патроны из фильтровальной бумаги и проводят экстракцию каждой части в аппарате Нааба или Сокслета 150 - 300 мл н-гексана (для ГЖХ) или петролейного эфира (для ТСХ) в течение 3 - 4 ч. Экстракт охлаждают и элюируют через хроматографическую колонку с сорбентами. После прохождения экстракта колбу и колонку промывают 50 мл н-гексана или петролейного эфира. Полученные элюаты от одной пробы объединяют, отгоняют растворитель до 1 - 2 мл (ГЖХ) или 0,2 - 0,3 мл (ТСХ).

Параллельно с анализируемой пробой при анализе методом ТСХ готовят два модельных экстракта, каждый из которых получают из 5 г того же образца. В них вносят стандартный раствор пестицидов определенной концентрации. При анализе методом ГЖХ аликвоты по 2 - 6 мкл вводят в хроматограф.

Хроматографирование (ГЖХ). Используют хроматограф

"Газохром-1109" или любой другой с ДЭЗ. Твердый носитель -

хроматон N-AW-DMCS (0,12 - 0,16 мм) с 5% SE-30. Длина колонки 2 м.

Расход газа-носителя через колонку 45 мл/мин.; на продувку

детектора - 75 - 80 мл/мин. Температура (°C): колонки - 210 - 220,

испарителя - 225, детектора - 240. Объем вводимой пробы 2 - 6 мкл.

Скорость протяжки ленты самописца 60 мм/мин. Рабочая шкала

-10

электрометра 2 x 10 А. Время выхода ДДЭ принято за 1, время

выхода остальных препаратов определяют относительно ДДЭ:

альфа-ГХЦГ - 0,25; гамма-ГХЦГ - 0,41; ДДД - 1,25; ДДТ - 1,58.

Содержание ХОП в гуза-пае (X, мг/кг) определяют по формуле:

AH V

2 2

X = -----,

H V P

1 1

где:

A - содержание пестицидов в стандартном растворе, введенном в

хроматограф, нг;

H , H - высоты пиков соответственно стандартного раствора и

1 2

анализируемой пробы, мм;

V - объем аликвоты экстракта, введенной в хроматограф, мкл;

V - конечный объем экстракта пробы, мл;

P - навеска пробы, г.

Хроматографирование (ТСХ). На хроматографическую пластинку количественно переносят пробу и модельные экстракты. Хроматографируют в н-гексане, просушивают и обрабатывают пластину раствором проявляющего реагента, затем облучают УФ-светом в течение 10 - 15 мин., помещая пластинку на расстоянии 20 см от источника. Пятна препаратов окрашены в черно-серый цвет и расположены от стартовой линии в следующем порядке: гамма-ГХЦГ; 4,4'-ДДТ; 2,4'-ДДТ. Содержание препаратов в пробе (X, мг/кг) определяют сравнением размера и окраски пятен проб и модельных экстрактов. Расчет ведут по общепринятой формуле:

X = -,

где:

A - содержание препарата в экстракте гуза-паи, найденное на хроматограмме, мкг;

P - навеска пробы, кг.

Требования безопасности. Необходимо соблюдать правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.

Методика определения гамма-ГХЦГ и ДДТ в хлопковой шелухе

методом тонкослойной хроматографии

Принцип метода. Метод основан на экстракции ХОИ парами органического растворителя, последующей очистке экстракта методом колоночной хроматографии, концентрировании и идентификации анализируемых веществ методом ТСХ.

Метрологическая характеристика метода. Нижний предел определения гамма-ГХЦГ 0,02 мг/кг. Среднее значение определения 85 +/- 1,5%. Доверительный интервал среднего (p = 0,95, n = 5) +/- 3,4%. Нижний предел определения ДДТ 0,01 мг/кг. Среднее значение определения ДДТ 95 +/- 0,7%. Доверительный интервал среднего (p = 0,95, n = 5) +/- 1,7%.

Реактивы и растворы. н-Гексан ч. Петролейный эфир (40 - 70 °C) высушенный, перегнанный. Ацетон х.ч. Сульфат натрия безводный х.ч. Силикагель КСК, фракция 0,14 мм. Нитрат серебра. Кислота серная х.ч. Аммиак ч. Пероксид водорода х.ч. Вода дистиллированная. Бумага фильтровальная. Препараты ДДТ х.ч., гамма-ГХЦГ х.ч. Стекловата. Хлорид калия ч.

Приборы и посуда. Ртутно-кварцевая лампа ДРТ-230 или осветитель ОКН-11. Весы лабораторные второго класса точности с предельной нагрузкой 200 г. Пластины для хроматографии "Силуфол" (15 x 15 см). Аппарат Нааба. Колонки хроматографические. Роторный вакуумный испаритель. Пульверизатор стеклянный. Электроплитка с закрытым обогревом. Шкафы сушильные. Микрошприцы на 10 мкл МШ-10 или микропипетки на 0,1 - 0,2 мл. Цилиндры мерные. Камеры для хроматографирования (эксикатор).

Подготовка к определению. Насыщенный раствор безводного сульфата натрия в серной кислоте. Растворяют 20 г соли в 200 мл концентрированной серной кислоты. Хранят в склянке с притертой пробкой.

Силикагель, пропитанный серной кислотой. В ступке заливают силикагель насыщенным раствором сульфата натрия в серной кислоте в соотношении 2 массовые части на 1 объемную часть и тщательно перемешивают (готовить перед использованием).

Хроматографическую колонку заполняют стекловатой на высоту 1 см, затем силикагелем на высоту 3,5 см и силикагелем, пропитанным серной кислотой, на высоту 4,5 см. Колонку промывают 30 мл петролейного эфира.

Проявляющий реагент: 0,1 г нитрата серебра растворяют в 2 мл аммиака и доводят объем до 50 мл ацетоном, затем добавляют 0,1 мл пероксида водорода. Раствор перемешивают и хранят в темном месте.

Стандартный раствор ХОИ с концентрацией 1 мг/мл: растворяют 0,01 г (в расчете по д.в.) ГХЦГ и 0,01 г 4,4'-ДДТ в 10 мл н-гексана. Хранят в холодильнике. Перед использованием раствор ДДТ разбавляют до концентрации 0,25 мг/мл.

Ход анализа. Из пробы шелухи выделяют методом диагонального деления 100 г. Затем прощупыванием тонкого слоя шелухи выбирают все семена и взвешивают их с точностью до 0,001 г. На анализ берут две пробы по 50 г шелухи, содержащей половину выделенных и измельченных семян. Навеску 50 г делят на две равные части, помещают каждую в патрон из фильтровальной бумаги и заряжают аппараты Нааба. Экстракцию каждой части пробы проводят 120 - 150 мл петролейного эфира (40 - 70 °C) или н-гексана в течение 1,5 - 2 ч. Затем экстракты концентрируют до объема примерно 30 мл и пропускают каждый через предварительно подготовленные хроматографические колонки. После прохождения экстракта каждую колбу и колонку промывают 50 мл петролейного эфира. Очищенный экстракт от двух параллельных колонок объединяют и концентрируют, отгоняя растворитель почти досуха, затем остаток количественно переносят в мерную пробирку на 5 - 10 мл и доводят объем гексаном до 2 мл. Получают экстракты пробы 1 и пробы 2.

Параллельно с анализируемыми пробами готовят два модельных экстракта, каждый из которых получают из 5 г той же шелухи, в которые внесены: в первый - 10 мкл раствора гамма-ГХЦГ (1 мг/мл) и 10 мкл раствора 4,4'-ДДТ (0,25 мг/мл), во второй - 10 мкл раствора 4,4'-ДДТ (0,25 мг/мл) и 2,5 мкл раствора ГХЦГ (1 мг/мл).

Хроматографирование. Экстракты проб и модельные экстракты (по 0,2 мл) наносят на хроматографическую пластинку. Диаметр каждого пятна после полного перенесения вещества на пластинку не должен превышать 1 см.

Пластинку с нанесенными растворами после высыхания пятен проб и модельных экстрактов помещают в камеру для хроматографирования, в которую за 30 мин. до начала хроматографирования налит н-гексан. Край пластинки должен быть погружен в растворитель не более чем на 0,5 см.

После поднятия фронта растворителя на высоту 10 - 11 см пластинку вынимают, сушат в вытяжном шкафу и затем опрыскивают раствором проявляющего реагента.

Для проявления пятен ХОИ пластинку облучают УФ-светом в течение 10 - 15 мин. на расстоянии 20 см от источника света. При наличии ХОИ на пластинке появляются пятна серо-черного цвета.

Обработка результатов анализа. ПДК гексахлорана (сумма изомеров) и ДДТ (сумма изомеров) в кормах для молочного скота составляет по 0,05 мг/кг, а для откормочного скота - 0,2 мг/кг и 0,5 мг/кг соответственно.

Для определения возможности использования хлопковой шелухи в рационах сельскохозяйственных животных сравнивают размер и окраску пятен при анализе исследуемого образца и модельных экстрактов (свидетелей). При этом учитывают, что пятна хлорорганических ядохимикатов располагаются в следующем порядке от линии старта: гамма-ГХЦГ; 4,4'-ДДТ (основное пятно); 2,4'-ДДТ.

Хлопковая шелуха считается пригодной для использования в рационе откормочного скота, если цвет пятна, соответствующего гексахлорану в пробе, менее интенсивен, чем цвет пятна свидетеля (C = 1 мг/мл), или если цвет пятна, соответствующего ДДТ в пробе 1, менее интенсивен, чем пятна ДДТ в свидетеле (0,25 мг/мл).

Хлопковая шелуха считается пригодной для использования в рационе молочного скота, если цвет пятен ГХЦГ и ДДТ в пробе 2 менее интенсивен, чем цвет пятен в свидетеле.

Требования безопасности. Соблюдают правила безопасности при работе с химическими реактивами, пестицидами и легковоспламеняющимися жидкостями.