Утверждены

Минздравом СССР

4 октября 1988 г. N 4704-88

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИРЕТРОИДОВ (АМБУШ, ЦИМБУШ)

В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ

ХРОМАТОГРАФИИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны: Л.Г. Адейшвили, Э.В. Твалчерелидзе, О.Н. Сейнишвили (ГрузНИИЗР); Р.В. Чирикашвили (Грузинский зоотехническо-ветеринарный учебно-исследовательский институт).

Дополнение к "Методическим указаниям по определению синтетических пиретроидов в растениях, почве, воде водоемов методом газожидкостной хроматографии" N 2473-81 от 22.10.81.

Краткая характеристика препаратов приведена в Методических указаниях N 2473-81.

Принцип метода. Метод основан на экстракции препаратов из мяса, внутренних органов и яиц птиц хлороформом, очистке экстрактов ледяной смесью ацетон-вода (2:1) и активированным углем и количественном определении препаратов на хроматографе с ДПР.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 76.

Таблица 76

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

АМБУША И ЦИМБУША В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ

┌───────────┬─────────────┬───────────────┬─────────────┬─────────────────┐

│Исследуемый│   Предел    │    Среднее    │ Стандартное │  Доверительный  │

│  объект   │определения, │   значение    │отклонение, %│интервал среднего│

│           │    мг/кг    │определения, % │             │ при p = 0,95, % │

│           ├──────┬──────┼───────┬───────┼──────┬──────┼────────┬────────┤

│           │  а   │  ц   │   а   │   ц   │  а   │  ц   │   а    │   ц    │

├───────────┼──────┼──────┼───────┼───────┼──────┼──────┼────────┼────────┤

│Мясо       │0,1   │0,05  │79     │80     │5,3   │6,5   │6,7     │7,2     │

│Мышцы      │0,1   │0,05  │80     │82     │5,5   │6,3   │7,0     │8,6     │

│Печень     │0,1   │0,05  │75     │76     │7,4   │4,0   │8,6     │5,7     │

│Легкие     │0,1   │0,05  │69     │73     │6,0   │5,2   │6,7     │6,0     │

│Сердце     │0,1   │0,05  │82     │77     │7,2   │5,8   │9,2     │7,0     │

│Яйцо       │0,3   │0,10  │62     │66     │8,4   │6,0   │8,2     │6,4     │

└───────────┴──────┴──────┴───────┴───────┴──────┴──────┴────────┴────────┘

Примечание: а - амбуш, ц - цимбуш.

Реактивы и растворы. Ацетон ч.д.а. Хлороформ ч.д.а. н-Гексан ч. Бензол ч.д.а. Сульфат натрия безводный. Уголь активированный. Фильтры "синяя лента". Наполнитель газохроматографической колонки - инертный носитель хроматон N-AW-DMCS с 5% XE-60. Газ-носитель - аргон особой чистоты.

Стандартные растворы: N 1 - раствор амбуша (или цимбуша) концентрацией 100 мкг/мл. Для его приготовления 10 мг х.ч. вещества растворяют в гексане в 100-миллилитровой мерной колбе. Срок хранения готового раствора в холодильнике 2 мес.; N 2 - растворы амбуша (или цимбуша) концентрацией 1; 5 и 10 мкг/мл. Из стандартного раствора амбуша (или цимбуша) N 1 отбирают 1; 5 или 10 мл в мерные колбы и доводят объем растворов гексаном до 100 мл. Приготовленные растворы хранят в холодильнике не дольше 2 недель.

Приборы и посуда. Ротационный испаритель. Механический встряхиватель. Хроматограф с ДПР. Колбы: конические с притертой пробкой на 150 и 250 мл; мерные на 50 и 100 мл. Воронки химические диаметром 2 - 6 см. Пипетки вместимостью 1; 2; 5 и 10 мл. Микропипетки на 0,1 и 0,2 мл. Пробирки с притертой пробкой на 10 мл. Колонка стеклянная для хроматографа длиной 0,5 м с внутренним диаметром 3 мм.

Подготовка к определению. Для подготовки газохроматографической колонки ее промывают бензолом (до набивки сорбентом) и затем высушивают, продувая сухим воздухом. Для заполнения колонки готовую набивку заводского изготовления засыпают в подсоединенную к вакуумному насосу колонку, в один конец которой помещена стекловата. С другого конца в нее засыпают сорбент. Для полной набивки при заполнении колонки постукивают по ее стенкам. Заполненную колонку помещают в термостат хроматографа и продувают газом-носителем в течение 48 ч при температуре 280 °C. При этом скорость газа-носителя 200 мл/мин.

Отбор проб. Пробы мяса и внутренних органов птиц отбирают из трех птиц, а яиц - из 20 штук. Для анализов образцы берут по 10 г в двух повторностях. Пробы хранят в морозильной камере холодильника не дольше 3 сут.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. По 10 г мелкоизмельченных навесок мяса, мышц, печени, легких, сердца и взболтанной массы яиц помещают в конические колбы и в каждую из них добавляют по 15 мл хлороформа. Содержимое встряхивают в течение 10 мин., после чего его фильтруют через бумажный фильтр, а массу яиц - через вату. Экстракцию пиретроидов повторяют дважды. Остаток на фильтре (или на вате) промывают 5 - 10 мл хлороформа. Экстракты объединяют и высушивают безводным сульфатом натрия. Объединенные экстракты упаривают при температуре 40 °C на ротационном испарителе до минимального объема 0,5 мл (экстракты можно упаривать при комнатной температуре под током воздуха). Остаток затем растворяют в 30 мл охлажденного раствора ацетона с водой (2:1) и в течение 30 мин. выдерживают на холоде. После этого экстракт фильтруют, остаток промывают холодным раствором ацетона с водой. Из фильтрата выпаривают ацетон на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Из водного раствора пиретроиды трижды экстрагируют в делительной воронке н-гексаном порциями по 10 мл. Если экстракт получился окрашенным, к нему добавляют 0,5 г активированного угля и в течение 5 мин. выдерживают при 40 °C, после чего фильтруют и конечный объем фильтрата доводят до 2 мл. Из этих 2 мл и берут аликвотную порцию для количественного определения пестицида (5 мкл).

    Условия   хроматографирования.   Используют  колонку  длиной   0,5 м  с

внутренним  диаметром  3  мм.  Носитель - хроматон  N-AW-DMCS  с  5% XE-60.

Газ-носитель - аргон  особой  чистоты.  Расход  газа-носителя  60  мл/мин.,

воздуха - 200 мл/мин.  Температура  (°C):   детектора  и  испарителя - 270,

                                            -12

колонки - 230.  Шкала  электрометра  20 x 10    А.  Скорость протяжки ленты

600 мм/ч. Время удерживания амбуша - 4 мин. 15 с, цимбуша - 7 мин. 10 с.

Обработка результатов анализа. Количество препаратов в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

                                    AH V

                                      2 2

                                X = -----,

                                    H V P

                                     1 1

    где:

    A - количество   препарата   в  стандартном   растворе,   введенном   в

хроматограф, нг;

    H  - высота  пика   стандартного   раствора   препарата,  введенного  в

     1

хроматограф, мм;

    H  - высота пика препарата в пробе, мм;

     2

    V  - объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл;

     1

    V  - объем  экстракта,  из которого берут  аликвотный объем для ввода в

     2

хроматограф, мл;

    P - масса анализируемой пробы, г.

Требования безопасности. Необходимо соблюдать правила безопасности, рекомендуемые для работ с органическими растворителями и огнеопасными веществами, а также со сжатыми газами.