Утверждены

Минздравом СССР

4 октября 1988 г. N 4700-88

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ КРОТОНОЛАКТОНА В ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ

МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны В.М. Латашко, Л. Гваришвили (КПИ).

    Краткая характеристика препарата. Действующее вещество - кротонолактон,

2-(5H)-фуранон.  Брутто-формула C H O . Молекулярная масса 84,07. Химически

                                 4 4 2

чистый  кротонолактон - бесцветная  или  желтоватая подвижная маслообразная

жидкость,  т. кип. 86 - 87 °C при 1599,9 Па.  Хорошо растворим в полярных и

плохо - в неполярных  растворителях.  ДСД 0,003 мг/кг, МДУ в зерне кукурузы

0,2 мг/кг.

Принцип метода. Метод основан на экстракции кротонолактона из анализируемых проб зерна хлороформом, очистке экстрактов зерна осаждением белков и отделением липидов и определении массовой доли кротонолактона в сконцентрированных экстрактах методом ГЖХ с применением ДИП.

Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций 0,1 - 2,0 мг/кг. Предел обнаружения 0,002 мкг. Предел обнаружения в пробах 0,02 мг/кг. Среднее значение определения 86,2 +/- 1,1%. Доверительный интервал среднего значения определения 3,78% при p = 0,95 и n = 5.

Избирательность метода. Метод специфичен. Другие пестициды, применяемые на посевах кукурузы, определению не мешают.

Реактивы и материалы. Кротонолактон. Хлороформ ч.д.а. Сульфат натрия безводный, ч.д.а. Сульфат аммония.

Приборы, аппаратура, посуда. Хроматограф с ДИП. Хроматографическая колонка стеклянная размером 300 x 0,3 см. Испаритель ротационный. Аппарат для встряхивания. Микрошприц вместимостью 10 мкл. Лабораторная мельница для размола образцов. Вакуумный водоструйный стеклянный насос. Колбы: мерные, конические вместимостью 300 мл; Бунзена. Цилиндры. Пипетки различной вместимости. Воронки: химические диаметром 56 мм; делительная вместимостью 500 мл; Бюхнера. Весы аналитические типа ВЛР-200. Весы технические. Тигель фильтрующий типа ТФ с фильтром класса пор 10 или пор 16.

Подготовка к определению. Приготовление стандартного раствора кротонолактона. Стандартный раствор кротонолактона концентрацией 1 мг/мл готовят в мерной колбе вместимостью 100 мл, растворяя навески 0,1 г кротонолактона в 100 мл хлороформа. Раствор устойчив в течение 10 дней.

Приготовление градуировочных растворов и построение градуировочного графика. В 7 мерных колб вместимостью 25 мл вносят 0,25; 0,5; 1,0; 2,0; 2,5 и 5,0 мл стандартного раствора кротонолактона и приливают до метки хлороформ, что соответствует концентрации кротонолактона 0,01; 0,02; 0,04; 0,08; 0,10 и 0,20 мкг/мкл. Хроматографируют по 1 мкл каждого из полученных растворов трижды и строят график зависимости средних площадей пиков от массовой доли кротонолактона в пробах.

Подготовка хроматографической колонки. Хроматографическую колонку размером 300 x 0,3 см заполняют хроматоном N-AW-DMCS с 15% ПМФС-4, устанавливают в термостат хроматографа и, не присоединяя к детектору, продувают током азота со скоростью 30 куб. см/мин. Температуру термостата повышают на 10 °C/ч от 100 до 220 °C. Затем колонку термостатируют при температуре 140 °C в течение 8 ч.

Хранение проб. Срок хранения проб - не более 10 дней.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Навеску зерна кукурузы (100 г) измельчают на лабораторной мельнице. Измельченное зерно просеивают через сито диаметром 1 мм. Остаток на сите измельчают и вновь просеивают. Эту операцию проводят до тех пор, пока вся навеска не будет измельчена. Измельченную навеску помещают в коническую колбу с притертой пробкой вместимостью 300 мл и дважды экстрагируют хлороформом порциями по 100 мл при встряхивании по 60 мин. Экстракты фильтруют под вакуумом через фильтрующий тигель, после второй экстракции остаток на фильтре промывают трижды хлороформом порциями по 100 мл. Экстракты объединяют, пропускают через слой безводного сульфата натрия и очищают от белков и липидов: белки осаждают сульфатом аммония и отделяют фильтрацией, липиды отделяют на делительной воронке. Полученный экстракт концентрируют на роторном испарителе, отгоняя до 2 мл хлороформа. В сконцентрированном экстракте определяют массовую долю кротонолактона методом ГЖХ.

    Хроматографирование. Аликвоту очищенных экстрактов хроматографируют при

                                                     -10             -10

следующих условиях. Рабочая шкала электрометра 1 x 10    +/- 0,5 x 10    А.

Скорость  протяжки  ленты самописца  240 мм/ч.  Колонка  стеклянная  длиной

300 см,  внутренним  диаметром  0,3 см,  заполненная  хроматоном  N-AW-DMCS

(фракция  0,250 - 0,317 мм)  с 15%  ПФМС-4.  Температура,  °C:   термостата

колонок - 140 +/- 2,  испарителя -  245,  детектора  -  190.  Расход  газа-

носителя 30 мл/мин. Линейность детектирования от 0,005 до 0,2  мкг.  Объем,

вводимый  в испаритель,  1 - 2  мкл.  Минимально  детектируемое  количество

0,002 мкг. Абсолютное время удерживания  6  мин.  8 с.  Хроматографирование

проводят 5 раз, измеряют  площади  пиков,  соответствующих  кротонолактону,

вычисляют  среднее  значение.   По  среднему   значению   площади   пика  и

градуировочному графику находят массу кротонолактона в пробе.

Обработка результатов анализа. Содержание кротонолактона в зерне кукурузы (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

                                    100AV

                                         2

                                X = ------,

                                     V P

                                      1

    где:

    A - масса кротонолактона в хроматографируемом объеме пробы, мкг;

    V  - объем аликвоты, мкл;

     1

    V  - общий объем пробы, мл;

     2

    P - масса анализируемой пробы, г.

Для количественного определения кротонолактона в экстрактах из зерна кукурузы приемлем также метод сравнения.

Требования безопасности. Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях.