"Методические указания по определению тиабендазола (текто) в овощах и фруктах (яблоки, лимоны, апельсины, томаты, морковь, лук, картофель, свекла, капуста), зерновых (пшенице, рисе), почве и воде методом тонкослойной хроматографии" // Технорма.RU

Утверждены

Минздравом СССР

19 сентября 1979 г. N 2084-79

30 июня 1984 г. N 3059-84

4 октября 1988 г. N 4699-88

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТИАБЕНДАЗОЛА (ТЕКТО) В ОВОЩАХ

И ФРУКТАХ (ЯБЛОКИ, ЛИМОНЫ, АПЕЛЬСИНЫ, ТОМАТЫ, МОРКОВЬ,

ЛУК, КАРТОФЕЛЬ, СВЕКЛА, КАПУСТА), ЗЕРНОВЫХ (ПШЕНИЦЕ, РИСЕ),

ПОЧВЕ И ВОДЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны Л.И. Лещинским, К.Ф. Новиковой, Н.Е. Ремизовой (ВНИИХСЗР).

Краткая характеристика препарата. Тиабендазол (текто) - системный

фунгицид широкого спектра действия. Действующее начало препарата

2-(4-тиазолил) бензимидазол. Брутто - формула C H N S. Молекулярная масса

10 7 3

201,3. В чистом виде - кристаллы белого цвета, т. пл. 296 - 304 °C. Хорошо

растворим в ацетоне (2,8 мг/мл), этилацетате (1,7 мг/мл). Растворимость в

воде при 25 °C меняется в зависимости от pH. При pH 5 - 12 составляет 0,05

мг/л, при pH < 5 она возрастает и при pH 2 - 10 г/л.

В картофеле МДУ 1 мг/кг, томатах - 0,1, зерне хлебных злаков - 0,2 мг/кг.

Принцип метода. Метод основан на извлечении тиабендазола из овощей и фруктов этилацетатом, перераспределении в соляную кислоту, а затем, после подщелачивания раствора, - в этилацетат, насыщенный водой, с последующим определением методом ТСХ. Экстракты из пшеницы дополнительно очищают микросублимацией в вакууме.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 138.

Таблица 138

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

┌───────────────┬────────────┬────────────────┬─────────────┬─────────────┐

│ Анализируемый │ Предел │Среднее значение│ Стандартное │Доверительный│

│ объект │определения,│ определения │ отклонение │ интервал │

│ │ мг/кг │ стандартных │ при n = 5, │ среднего │

│ │ или мг/л │ количеств при │ % │при p = 0,95 │

│ │ │ n = 15, % │ │ и n = 5, % │

├───────────────┼────────────┼────────────────┼─────────────┼─────────────┤

│Яблоки │0,07 │79 │+/- 7 │79 +/- 9 │

│Лимоны │0,07 │78 │+/- 9 │78 +/- 11 │

│Апельсины │0,07 │83 │+/- 12 │83 +/- 15 │

│Томаты │0,07 │86 │+/- 8 │86 +/- 10 │

│Морковь │0,07 │95 │+/- 5 │95 +/- 6 │

│Лук │0,07 │93 │+/- 7 │93 +/- 8 │

│Капуста │0,07 │97 │+/- 6 │97 +/- 1 │

│Картофель │0,07 │83 │+/- 11 │83 +/- 14 │

│Свекла │0,07 │83 │+/- 11 │83 +/- 14 │

│Пшеница │0,1 │85 │+/- 6 │85 +/- 7 │

│Рис │0,1 │79 │+/- 5 │79 +/- 6 │

│Почва │0,14 │80 │+/- 10 │80 +/- 12 │

│Вода │0,002 │83 │+/- 5 │83 +/ 7 │

└───────────────┴────────────┴────────────────┴─────────────┴─────────────┘

Примечание. Предел обнаружения - 1 мкг.

Избирательность метода. Метод селективен. Беномил, БМК, ридомил, байлетон, ФОП и ХОП определению не мешают.

Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. Этилацетат свежеперегнанный. Гексан ч.д.а. Хлороформ ч.д.а. Спирт этиловый, 96-процентный. Аммиак водный ч.д.а. Хлороводородная кислота (фиксанал) 0,1 н Едкое кали ч.д.а. Сульфат натрия безводный, ч.д.а. Уксусная кислота ч.д.а. Йодид калия х.ч. Карбонат натрия х.ч. Нитрат висмута основной ч.д.а.

Основной раствор - реактив Драгендорфа. Растворяют 850 мг основного азотнокислого висмута в 40 мл дистиллированной воды, добавляют 10 мл уксусной кислоты и раствор, содержащий 8 г KJ в 20 мл воды. Для проявления хроматограмм 1 мл полученного раствора разбавляют 2 мл уксусной кислоты и 10 мл дистиллированной воды (рабочий раствор). На обработку хроматограммы идет 2 - 3 мл раствора. Основной раствор стабилен при хранении в темном месте в течение длительного времени. Рабочий раствор готовят непосредственно перед обработкой хроматограммы. Стандартные растворы тиабендазола в ацетоне с содержанием 100 мкг/мл (раствор N 1); 10 мкг/мл (раствор N 2) и 1 мкг/мл (раствор N 3). Растворы стабильны при хранении в холодильнике 2 года, а при комнатной температуре - 6 мес.

Приборы, аппаратура и посуда. Хроматоскоп или другой источник УФ-света

длиной волны 250 - 260 нм. Хроматографическая камера. Ротационный вакуумный

испаритель с набором колб. Аппарат для встряхивания. Масляный насос.

Вакуумный водоструйный насос. Колбы: плоскодонные на 500 мл; конические на

500 мл; грушевидные на 50 мл; мерные на 100 мл. Цилиндры мерные на 10 и

100 мл. Пробирки градуированные с пробками на шлифах с оттянутым концом на

5 мл. Микрошприц на 500 мкл. Пипетки на 1; 2 и 5 мл. Делительные воронки на

250 и 500 мл. Пульверизаторы стеклянные. Пластинки "Силуфол" УФ .

254

Кофейная мельница. Почвенное сито.

Подготовка хроматографических камер. За 1 ч до начала хроматографирования камеры заполняют смесью подвижных растворителей хлороформ-этиловый спирт-аммиак (100:10:0,2) и гексан-ацетон-аммиак (50:50:0,1) для насыщения камеры парами подвижных растворителей. Объем подвижного растворителя в камере должен по высоте находиться не выше чем на 0,7 - 1 см от уровня дна камеры.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстракта. Измельченную с помощью ножа пробу овощей или фруктов (15 г) помещают в плоскодонную колбу на 500 мл, заливают 50 мл этилацетата и экстрагируют фунгицид в течение 30 мин. с помощью механического встряхивания колбы. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку на 500 мл. Экстракцию тиабендазола повторяют еще 2 раза тем же количеством этилацетата. Из объединенного экстракта извлекают фунгицид 0,1 н раствором соляной кислоты 3 раза порциями по 30 мл. Этилацетатный слой отбрасывают. Солянокислую фракцию собирают в другой делительной воронке на 250 мл. К объединенному раствору приливают 3,5 мл 4 н KOH до pH 10 и экстрагируют тиабендазол 5 раз этилацетатом, насыщенным водой, порциями по 30 мл. Объединенный в конической колбе на 500 мл экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (25 - 30 г), затем порциями фильтруют через бумажный фильтр в грушевидную колбу на 50 мл и каждый раз отгоняют растворитель с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 1 - 2 мл. Последнюю порцию растворителя отгоняют до объема - 0,1 мл. При хроматографировании пробу наносят полностью.

Навеску размолотого риса (20 г) помещают в коническую колбу вместимостью 500 мл, заливают 75 мл этилацетата и экстрагируют фунгицид в течение 30 мин. с помощью механического встряхивания колбы. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку вместимостью 500 мл. Экстракцию тиабендазола повторяют еще 2 раза тем же количеством этилацетата. Из объединенного экстракта фунгицид извлекают 0,1 н раствором соляной кислоты 3 раза порциями по 30 мл. Этилацетатный слой отбрасывают. Солянокислотную фракцию собирают в другой делительной воронке вместимостью 250 мл. К объединенному раствору пипеткой добавляют 4,5 мл 4 н NaOH до pH 12 и тщательно встряхивают воронку. Экстрагируют тиабендазол 5 раз этилацетатом порциями по 30 мл. Объединенный этилацетатный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (25 - 30 г), затем порциями фильтруют через бумажный фильтр в грушевидную колбу вместимостью 50 мл и каждый раз отгоняют растворитель с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 1 - 2 мл. Последнюю порцию растворителя отгоняют досуха. К сухому остатку пипеткой добавляют 1 мл ацетона. Колбу закрывают пробкой и ее стенки тщательно обмывают растворителем. На хроматограмму наносят микрошприцем аликвотную часть полученного раствора (от 0,1 до 0,5 мл).

Навеску пшеницы (20 г) проводят через все операции, как и навеску риса. Сконцентрированный до объема 1 - 2 мл экстракт с помощью 10 - 12 мл ацетона переносят в патрон сублиматора (см. рис. 1) и проводят доочистку экстракта микросублимацией в вакууме в течение 20 мин. при температуре более 90 °C и давлении 6,67 Па (0,05 мм рт. ст.). По окончании сублимации тиабендазол смывают с помощью "пальца" сублиматора 10 мл ацетона в градуированную пробирку вместимостью 10 мл. В пробирку помещают заплавленный в верхней части стеклянный капилляр и ее содержимое концентрируют на горячей водяной бане до объема 1 мл. Пробирку закрывают пробкой на шлифе. На хроматограмму наносят микрошприцем аликвотную часть раствора (от 0,1 до 0,5 мкл).

Навеску почвы (15 г), помещенную в плоскодонную колбу вместимостью

250 мл, увлажняют 3 мл 1 н раствора Na CO (20% массы пробы), заливают

2 3

50 мл этилацетата и экстрагируют тиабендазол с помощью механического

встряхивания колбы в течение 30 мин. Дальнейший анализ почвы проводят по

схеме, описанной для риса.

В 1 л воды пипеткой добавляют 5 мл 1 н раствора Na CO и экстрагируют

2 3

тиабендазол в делительной воронке вместимостью 500 мл этилацетатом,

насыщенным водой, 4 раза порциями по 150; 100; 50 и 50 мл. Из экстракта,

объединенного в делительной воронке вместимостью 0,5 л, извлекают

тиабендазол 0,1 н хлороводородной кислотой трижды порциями по 30 мл.

Дальнейшие определения проводят по схеме, описанной для риса.

Хроматографирование. Остаток, полученный из экстрактов овощей и фруктов, с помощью стеклянного капилляра количественно наносят на пластинку "Силуфол" УФ254. Справа и слева от пробы капилляром наносят стандартные растворы тиабендазола, содержащие 1; 2; 3; 4 и 5 мкг препарата. Стандартные растворы готовят следующим образом: в серию конических пробирок пипеткой помещают 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 и 0,5 мл стандартного раствора N 2 и концентрируют растворы, нагревая пробирки на водяной бане до объема ~ 0,1 мл.

Аликвотную часть полученных экстрактов из пшеницы, риса, почвы и воды

(0,1 - 0,5 мл) с помощью микрошприца на 500 мкл наносят на

хроматографическую пластинку "Силуфол" УФ . Справа и слева от пробы тем

254

же шприцем наносят серию стандартных растворов тиабендазола с содержанием

1; 2; 3; 4 и 5 мкг. Шкалу стандартов при аликвоте 0,1 мкл и 0,5 мкг готовят

в градуированных пробирках согласно таблице 139.

Таблица 139

ШКАЛА СТАНДАРТОВ

┌───────────────────────────────┬───────────────────────────────┬─────────┐

│ Нанесение 0,1 мл │ Нанесение 0,5 мл │Нанесено │

├───────────┬───────┬───────────┼───────────┬───────┬───────────┤на плас- │

│стандартный│ацетон,│содержание,│стандартный│ацетон,│содержание,│тинку, │

│раствор, мл│ мл │ мкг/мл │раствор, мл│ мл │ мкг/мл │мкг │

├───────────┼───────┼───────────┼───────────┼───────┼───────────┼─────────┤

│1 │9 │1 │2 │8 │0,2 │1 │

│2 │8 │2 │4 │6 │0,4 │2 │

│3 │7 │3 │6 │4 │0,6 │3 │

│4 │6 │4 │8 │2 │0,8 │4 │

│5 │5 │5 │10 │0 │1 │5 │

└───────────┴───────┴───────────┴───────────┴───────┴───────────┴─────────┘

Аналогичным образом готовят стандартные растворы при нанесении аликвоты, промежуточной между 0,1 и 0,5 мкл.

При определении тиабендазола в овощах, фруктах, пшенице, воде и почве

хроматограмму развивают в системе подвижных растворителей

гексан-ацетон-аммиак (50:50:0,1) или хлороформ-этиловый спирт-аммиак

(100:10:0,1). При определении фунгицида в рисе предварительно развивают

хроматограмму в хлороформе, а затем после высушивания - в одной из

указанных выше систем подвижных растворителей. После развития хроматограммы

и высушивания пластинок на воздухе пятна тиабендазола проявляют под лампой

УФ-света. Зоны локализации тиабендазола обнаруживаются в виде фиолетовых

пятен па зеленом фосфоресцирующем фоне с R 0,49 +/- 0,02 в первой системе

ПР и 0,57 +/- 0,02 - во второй. Пятна можно наблюдать в течение нескольких

месяцев. Линейный диапазон детектирования 1 - 5 мкг. При необходимости для

обнаружения пятен можно использовать реактив Драгендорфа. При обработке

хроматограмм этим проявителем тиабендазол проявляется на пластинках в виде

оранжевых пятен на белом фоне, с линейным диапазоном определения 1 - 5 мкл.

Пятна стабильны в течение 7 - 8 мин.

Обработка результатов анализа. Количественное определение тиабендазола проводят путем сравнения площади и интенсивности окраски пятен рабочей пробы и серии стандартов. Содержание тиабендазола в анализируемой пробе (X, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле:

X = ---,

V P

где:

A - содержание тиабендазола в хроматографируемой пробе, мкг;

V - общий объем раствора, из которого отбирают аликвоту для

хроматографирования, мл;

V - объем аликвоты, отобранный для хроматографирования, мл (при

внесении всей пробы V = V);

P - навеска или объем анализируемой пробы, г или мл.

Требования безопасности. Соблюдать требования безопасности, принятые для работы с легковоспламеняющимися жидкостями и пестицидами.