Утверждены

Минздравом СССР

14 июля 1988 г. N 4669-88

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ФЮЗИЛАДА В СЕМЕНАХ И ЛИСТЬЯХ СОИ

МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны Л.И. Микадзе, Н.П. Лисецкой (ГрузНИИЗР).

    Краткая   характеристика   препарата.    Фюзилад   -   2-[4-(5-трифтор-

метилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой  кислоты  н-бутиловый эфир. Брутто-

формула C  H  F NO .

         19 20 3  4

Принцип метода. Метод основан на извлечении фюзилада из пробы органическим растворителем, гидролизе препарата (флуазифон-бутила) до кислоты флуазифона и определении последней методом ТСХ.

Метрологическая характеристика метода. Предел определения 0,5 мг/кг. Предел обнаружения 5 мкг в пробе. Среднее значение определения фюзилада, %: в листьях сои 82 +/- 9,2, в семенах 80 +/- 8,2 (n = 10, p = 0,95).

Реактивы и растворы. Ацетон. н-Гексан. Диэтиловый эфир. Четыреххлористый углерод. Сульфат натрия безводный. Силикагель АСК. Хлорид аммония х.ч. Ортофосфорная кислота. Хлороводородная кислота х.ч. Двууглекислый натрий х.ч., 0,5 н раствор. Муравьиная кислота концентрированная х.ч. Стандартный раствор фюзилада с содержанием 100 мкг/мл; стандартный раствор флуазифона 100 мкг/мл. Раствор для осаждения (коагуляции): 6,25 г хлорида аммония и 10 мл ортофосфорной кислоты помещают в колбу вместимостью 1 л и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.

Приборы и посуда. Делительные воронки. Аппарат для встряхивания. Ротационный испаритель. Вакуумный насос. Водяная баня. Мерные колбы на 100 мл. Микропипетки на 0,1; 0,2 мл. Камера для хроматографирования. Пластинки "Силуфол". Опрыскиватель стеклянный. Электромельница лабораторная. Мерные пипетки на 0,1 мл.

Ход анализа. Экстракция. Мелкоизмельченную пробу семян (10 г) заливают 20 мл хлороводородной кислоты, оставляют на 3 - 4 ч, затем заливают 50 мл н-гексана и оставляют на ночь.

Пробу измельченной зеленой массы сои (10 г) заливают смесью 50 мл н-гексана и хлороводородной кислоты (98:2), гомогенизируют и оставляют на ночь. Фильтруют через фильтровальную бумагу. Концентрируют экстракт до полного испарения гексана, оставляя только водный раствор. Температура водяной бани не должна превышать 40 °C. Для гидролиза фюзилада добавляют 20 мл раствора концентрированной хлороводородной кислоты и, закрыв колбу неплотно пробкой, помещают ее на водяную баню, нагретую до 60 °C, выдерживают при этой температуре 1 ч при периодическом помешивании, после чего колбу вынимают и охлаждают.

Полученный раствор осторожно переливают в делительную воронку, доводят pH раствора до 1, добавляют 100 мл диэтилового эфира и экстрагируют флуазифон путем встряхивания в течение 2 мин. Водный слой выливают, раствор диэтилового эфира выпаривают до сухого состояния. Растворяют остаток в 10 мл ацетона, добавляют 50 мл свежеприготовленного раствора для осаждения и 2 г силикагеля АСК, встряхивают в течение 30 с и оставляют на 10 мин., после чего раствор фильтруют в делительную воронку, промывают колбу 100 мл раствора для осаждения. Доводят pH раствора до 1. Экстрагируют флуазифон четыреххлористым углеродом (50 мл), водный слой отбрасывают. К полученному экстракту приливают 100 мл 1-процентного бикарбоната натрия. Встряхивают в течение 2 мин., раствор четыреххлористого углерода выливают. Водную фазу подкисляют раствором концентрированной хлороводородной кислоты до pH 1. Экстрагируют встряхиванием с четыреххлористым углеродом. Полученный раствор концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя досуха.

    Хроматографирование и проявление хроматограмм. Сухой остаток растворяют

несколькими  каплями  гексана  и  наносят  на  пластинку,  отступив 1 см от

нижнего  края,  рядом с пробой на линию старта наносят стандартные растворы

фюзилада (флуазифон-бутила) и флуазифона. Пластинку с нанесенными пробами и

стандартным  раствором  помещают  в  хроматографическую  камеру,  в которую

заливают  60  мл  диэтилового  эфира,  40  мл  н-гексана  и 2 мл муравьиной

кислоты,  что  и  служит подвижным растворителем. Хроматографическую камеру

подготавливают    предварительно   следующим   образом:   в   колонку   для

хроматографии помещают фильтровальную бумагу (диаметр 20 см) в вертикальном

положении,  затем  закрывают  камеру  крышкой  и ждут, пока растворитель не

поглотится  бумагой.  Прежде  чем  поместить  пластинку  в  камеру, следует

подождать  10 мин. После разгона подвижного растворителя до 10 см пластинку

вынимают   и   оставляют  на  несколько  минут  на  воздухе  для  испарения

растворителя.  Затем  пластинку  помещают  под источник УФ-света. Препараты

проявляются  в виде желтых пятен на белом фоне. Величина R  флуазифона 0,6.

                                                          f

Минимальное количество обнаруженного препарата 0,5 мг/кг.

Обработка результатов анализа. Количество гербицида определяют при сравнении интенсивности окраски и площади пятна пробы и стандарта. Пятна измеряют планиметром или с помощью промасленной миллиметровой бумаги. Содержание препарата (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

                                     AS

                                       2

                                 X = ---,

                                     PS

                                       1

    где:

    A - количество препарата, найденное в хроматографируемой пробе, мкг;

    S ,  S   -  площадь пятен соответственно стандартного раствора и пробы,

     1    2

кв. мм;

    P - масса анализируемой пробы, г.

Требования безопасности. Соблюдаются требования безопасности, рекомендованные при работе с химическими реактивами.