"Методические указания по определению хостаквика в овощах, фруктах, биологическом материале, почве и воде методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии" // Технорма.RU

Утверждены

Минздравом СССР

8 июля 1987 г. N 4349-87

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ХОСТАКВИКА В ОВОЩАХ, ФРУКТАХ,

БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ, ПОЧВЕ И ВОДЕ МЕТОДАМИ

ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны Д.Б. Гиренко, Л.Е. Морару, М.А. Клисенко (ВНИИГИНТОКС).

Хостаквик - О,О-диметил-О-(6-хлорбицикло[3.2.0]гептадиен-1,5-ил)фосфат.

Жидкость с т. кип. 90 - 91 °C при 2,7 Па. Давление паров при 25 °C 0,22 Па.

Хорошо растворим в н-гексане, метаноле, ксилоле (при 25 °C до 1000 г/л),

хуже растворим в н-гексане (130 г/л). Брутто-формула C H ClO P.

9 12 4

Молекулярная масса 250,5. Общепринятое название - гептенофос. ДСД - 0,003

мг/кг, МДУ в огурцах, томатах - 0,1 мг/кг, в яблоках - 0,1 мг/кг.

Принцип метода. Метод основан на определении хостаквика ГЖХ и ТСХ после извлечения его из исследуемой пробы органическим растворителем, очистке от коэкстрактивных веществ в системе жидкость - жидкость.

Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций 0,05 - 0,5 мг/кг. Предел определения 0,05 мг/кг (мг/л). Остальные параметры даны в таблице 43.

Таблица 43

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДОВ

ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХОСТАКВИКА

┌──────────────┬───────────────────────┬─────────────────────────┐

│Анализируемый │ Среднее значение │ Доверительный интервал │

│ объект │ определения, % │ среднего, % │

│ ├───────────┬───────────┼────────────┬────────────┤

│ │ ГЖХ │ ТСХ │ ГЖХ │ ТСХ │

├──────────────┼───────────┼───────────┼────────────┼────────────┤

│Картофель │69 │65 │+/- 3,9 │+/- 6,2 │

│Свекла │68 │67 │+/- 2,6 │+/- 3,9 │

│Огурцы │68 │72 │+/- 3,45 │+/- 3,9 │

│Томаты │67 │64 │+/- 4,1 │+/- 5,2 │

│Яблоки │70 │68 │+/- 2,4 │+/- 3,9 │

│Мясо │65 │64 │+/- 2,2 │+/- 5,2 │

│Печень │65 │64 │+/- 3,9 │+/- 5,2 │

│Вода │72 │73 │+/- 3,0 │+/- 3,9 │

│Почва │68 │62 │+/- 2,6 │+/- 6,1 │

└──────────────┴───────────┴───────────┴────────────┴────────────┘

Реактивы и растворы. Ацетон ч. Бензол ч. Гексан ч. Аммиак водный

25-процентный, ч.д.а. Нитрат серебра. Хлороводородная кислота ч. Сульфат

натрия безводный ч. Хлороформ ч. Хроматон N-AW (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30.

Пластинки "Силуфол". Азот особой чистоты, содержание O не более 0,003%.

Водород. Воздух.

Подвижная фаза для ТСХ: 1 - бензол; 2 - гексан-ацетон (2:1).

Для приготовления проявляющего реагента (водно-ацетонового раствора нитрата серебра) навеску нитрата серебра (0,5 г) растворяют в 5 мл дистиллированной воды, добавляют 7 мл аммиака (плотность 0,9 г/куб. см) и доводят объем до 100 мл ацетоном. Срок хранения в холодильнике 5 - 6 дней.

Основной стандартный раствор хостаквика, содержащий 100 мкг/мл вещества, готовят растворением 10 мг препарата в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Хранят в холодильнике не дольше 2 мес.

Приборы и посуда. Газовый хроматограф с ПФД по фосфору (типа "Цвет-164" или др.). Ротационный вакуумный испаритель для отгонки растворителей. Лампа ртутно-кварцевая. Посуда мерная. Воронки делительные вместимостью 500 и 1000 мл. Колбы: конические на 100 мл; грушевидные для отгонки растворителей. Камера хроматографическая. Пульверизатор стеклянный. Микрошприц на 10 мкл.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Измельченную пробу растительного материала (25 г) заливают 50 мл смеси ацетон-вода (5:1). Экстрагируют в течение 1 ч. Экстракцию повторяют дважды. Раствор фильтруют, фильтрат переносят в делительную воронку, добавляют 300 мл дистиллированной подкисленной HCl воды до pH 2 - 3 и дважды экстрагируют хостаквик хлороформом порциями по 30 мл. Объединенный органический растворитель сушат безводным сульфатом натрия, досуха упаривают на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °C. Досуха отгоняют на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона или гексана и хроматографируют.

Пробу воды (500 мл) помещают в делительную воронку, подкисляют 0,1 н хлороводородной кислотой до pH 2 - 3, хорошо перемешивают и экстрагируют хлороформом трижды порциями по 50 мл. Пропускают экстракт через слой сульфата натрия и упаривают до объема 0,3 - 0,5 мл на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °C. Досуха отгоняют на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона или гексана и хроматографируют.

Пробу почвы (20 г) помещают в коническую колбу, заливают 50 мл смеси ацетон-вода (5:1). Экстрагируют в течение 1 ч. Экстракцию повторяют дважды, экстракты фильтруют, объединяют, переносят в делительную воронку, добавляют 300 мл дистиллированной воды, подкисленной хлороводородной кислотой до pH 2 - 3, и дважды экстрагируют хостаквик хлороформом порциями по 30 мл. Объединенный органический растворитель сушат безводным сульфатом натрия, упаривают на ротационном испарителе, досуха концентрируют на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют.

Пробу биологического материала массой 10 г (мышцы, печень, почки и др.) измельчают и заливают 30 мл смеси ацетон-вода (5:1). Экстрагируют в течение 1 ч. Экстракцию повторяют дважды. Раствор фильтруют, фильтрат переносят в делительную воронку, добавляют 500 мл подкисленной до pH 2 - 3 дистиллированной воды и экстрагируют хлороформом дважды порциями по 30 мл. Объединенный органический растворитель сушат безводным сульфатом натрия, упаривают на ротационном испарителе, а затем досуха на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона (гексана) и хроматографируют.

Идентификация и количественное определение хостаквика. При определении

методом ГЖХ используют носитель хроматон N-AW с 5% SE-30. Колонка

стеклянная длиной 1 м, диаметром 3 мм. Расход газа-носителя (азота) 50

мл/мин.; водорода 65 +/- 5 мл/мин.; воздуха 120 +/- 5 мл/мин. Шкала

-8

электрометра 2 x 10 А. Температура (°C): колонки - 180, испарителя - 220.

Вводимый объем 4 мкл. Линейный диапазон детектирования 0,6 - 50 нг.

Минимально детектируемое количество 0,6 нг. Время удерживания при указанных

условиях 45 с.

При определении методом ТСХ пробу, сконцентрированную до 0,3 мл,

количественно переносят на пластинку с сорбентом. Параллельно наносят серию

стандартных растворов с содержанием препарата 2; 5 и 10 мкг хостаквика.

Хроматографируют первоначально в бензоле, просушивают, а затем в системе

гексан-ацетон (2:1). После высушивания пластинку обрабатывают

водно-ацетоновым раствором нитрата серебра и подвергают УФ-облучению в

течение 30 мин. Хостаквик проявляется в виде пятен черного цвета на белом

фоне (R 0,5 +/- 0,05).

Обработка результатов анализа. При использовании метода ГЖХ количественное определение проводят путем сравнения рассчитываемого пика с пиком, полученным при введении известного количества стандартного вещества (при условии, что пики близки по величине и определение ведется в диапазоне линейности детектора). Количественную оценку пиков хроматограммы проводят по площади пика, рассчитывая ее как произведение высоты пика на ширину, измеренную на половине высоты. Расчет количества препарата в пробе (X, мг/кг или мг/л) ведут по формуле:

C V S

ст 2

X = ------,

S V P

ст 1

где:

C - содержание препарата во введенном в хроматограф стандарте, нг;

ст

S - площадь пика исследуемого раствора, кв. мм;

S - площадь пика стандартного раствора препарата, введенного в

ст

хроматограф, кв. мм;

V - объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл;

V - общий объем экстракта после упаривания, мл;

P - навеска анализируемой пробы, г.

При определении методом ТСХ содержание хостаквика в исследуемой пробе

(X, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле:

X = -,

где:

A - количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;

P - навеска или объем пробы, г или мл.

Требования безопасности. Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.