Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1987 г. N 4380-87

УНИФИЦИРОВАННЫЙ МЕТОД

ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТКОВ ПЕСТИЦИДОВ

ПРИ ИХ СОВМЕСТНОМ ПРИСУТСТВИИ В ПИЩЕВЫХ РАЦИОНАХ

Унифицированный метод предназначен для определения пестицидов различного химического строения (ХОП, ФОП, симм-триазинов, производных 2,4-Д и ТХА) в пищевых рационах. Основу его составляет схема, которая позволяет проводить определение пестицидов названных групп из одной пробы (рис. 18).

                 ┌───────────────────────────────────────┐

                 │Гомогенизированная навеска рациона 60 г│

                 └──────────────────┬────────────────────┘

                                    │ подкислить до pH 3

                                    \/

                 ┌───────────────────────────────────────┐

                 │ Экстракция органическим растворителем │

                 │(гексан - ацетон, 1:2) общий V = 300 мл│

                 └──────────────────┬────────────────────┘

         ┌──────────────────────────┼──────────────────────────────┐

         \/                         \/                             \/

┌────────────────┐        ┌───────────────────┐         ┌──────────────────┐

│  Определение   │        │  Определение ХОП  │         │ Определение ФОП  │

│ 2,4-Д и ТХА в  │        │ и симм-триазинов  │         │в 100 мл экстракта│

│100 мл экстракта│        │в 100 мл экстракта │         └─────────┬────────┘

└────────┬───────┘        └─────────┬─────────┘                   │

         │        │\                │                             │

         \/       │ \               │          ┌────────────────┐ │

     ┌────────┐   │  \              \/         │  Определение   │ │

     │ Анализ │   │1 н\   ┌─────────────────┐  │ симм-триазинов │ │

     └────────┘   │HCl/-->│Перераспределение├─>│ в солянокислом │ │

                  │  /    └─────────┬───────┘  │слое по методике│ │

                  │ /               \/         └───────┬────────┘ │

                  │/      ┌───────────────────┐        \/         │

                          │ Органический слой │    ┌────────┐     │

                          │    упаривают,     │    │ Анализ │     │

                          │растворяют остаток │    └────────┘     │

                          │ в 10 мл н-гексана;│                   │

                          │очищают конц. H SO │                   \/

                          │               2  4│     ┌──────────────────────┐

                          └─────────┬─────────┘     │   Упарить до 5 мл.   │

                                    \/              │Анализировать по схеме│

                          ┌───────────────────┐     │  идентификации ФОП   │

                          │  Определение ХОП  │     │  хроматоферментным   │

                          │    по методике    │     │       методом        │

                          └───────────────────┘     └──────────────────────┘

Рис. 18. Схема определения пестицидов различных групп

в пищевом рационе

В основу унифицированной схемы положены методики определения пестицидов указанных групп, утвержденные Минздравом СССР и опубликованные в сборниках "Методические указания по определению пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде".

Принцип метода. Метод основан на извлечении пестицидов различного химического строения (ХОП, ФОП, симм-триазинов, производных 2,4-Д и ТХА) из единой пробы трехфазной смесью растворителей (водный раствор HCl, гексан, ацетон), разделении экстракта на три равные части, в одной из которых определяют производные 2,4-Д и ТХА, во второй - ХОП и симм-триазины, в третьей - ФОП в соответствии с представленной схемой. Для аналитического определения используют методы ГЖХ и ТСХ.

Ход анализа. Экстракция. Доводят pH гомогенизированной смеси рациона (60 г) до pH 3 1 M водным раствором хлороводородной кислоты в стакане на 0,5 л, приливают 150 мл смеси гексан - ацетон (1:2), перемешивают электромешалкой 30 мин. Содержимое стакана переносят в центрифужный стакан, центрифугируют и сливают растворитель. Вместо центрифугирования можно фильтровать с отсасыванием в колбу Бунзена через плотный фильтр. Остаток промывают двумя порциями смеси гексана с ацетоном по 75 мл, каждый раз центрифугируют и объединяют. Общий объем экстракта 300 мл. Делят экстракт на три равные части, одну из которых используют для определения производных 2,4-Д и трихлорацетата натрия; вторую - для определения ХОП и триазинов; третью - для определения ФОП.

Определение 2,4-Д и ТХА. Экстракт 100 мл (1/3 часть) помещают в круглодонную колбу на 1 л, прибавляют 8 мл концентрированной соляной кислоты, упаривают ацетон и гексан на ротационном испарителе и затем выдерживают 1 ч на кипящей водяной бане с обратным холодильником.

После охлаждения содержимое колбы переносят дистиллированной водой (3 x 30 мл) в делительную воронку и трижды экстрагируют диэтиловым эфиром (50, 30 и 30 мл). Объединенный эфирный экстракт промывают небольшими порциями дистиллированной воды (15 - 20 мл) до нейтральной реакции промывных вод и затем трижды экстрагируют тремя порциями 0,5 М водного раствора бикарбоната натрия по 20 мл. Объединенный водный экстракт дважды промывают хлороформом порциями по 20 мл и 20 мл н-гексана, отбрасывают эти растворители, подкисляют концентрированной хлороводородной кислотой до pH 1 и экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира (50, 30 и 30 мл). Объединенный эфирный экстракт промывают дистиллированной водой (порциями по 15 - 20 мл) до нейтральной реакции промывных вод, упаривают растворитель на ротационном испарителе до 2 мл и затем досуха потоком сухого воздуха. Сухой остаток метилируют диметилсульфатом и определяют ТХА [1].

Для определения 2,4-Д растворяют в 2 - 3 мл н-гексана продукт метилирования и переносят этот раствор на стеклянный фильтр N 4 (d = 2,5 см) с 1 г силикагеля. Промывают силикагель 15 мл н-гексана и элюируют метиловый эфир 2,4-Д 25 мл бензола. Бензольный элюат упаривают на ротационном испарителе до 1 мл и затем досуха потоком сухого воздуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл н-гексана и определяют метиловый эфир 2,4-Д [2].

Определение ХОП и симм-триазинов. Экстракт 100 мл (1/3 часть) помещают в делительную воронку на 500 мл, прибавляют 50 мл 1 н водного раствора HCl, осторожно встряхивают и дают слоям разделиться. Сливают в другую делительную воронку на 500 мл нижний водный слой, а из органического экстрагируют еще дважды по 25 мл 1 н водным раствором HCl. Водные экстракты объединяют и определяют в этой фазе симм-триазины.

    Органическую фазу сливают через слой безводного Na SO  в колбу

                                                      2  4

для  отгонки  растворителей  и  досуха  упаривают  на  ротационном

вакуумном  испарителе  при  температуре бани не более 45 °C. Сухой

остаток  из  колбы  смывают  10  -  15  мл н-гексана в делительную

воронку  на  50  мл,  чистят  концентрированной  серной кислотой и

анализируют  по  методике  определения  ХОП  в продуктах питания и

объектах окружающей среды [3 - 5].

Водную фазу подщелачивают 200 мл 1 н едкого натра до pH 7 - 8, прибавляют 15 мл насыщенного раствора хлорида натрия и 50 мл дистиллированной воды и трижды экстрагируют хлороформом порциями по 50 мл. Экстракт объединяют, высушивают над безводным сульфатом натрия и упаривают на ротационном испарителе досуха при температуре бани 50 °C. Колбу смывают 1 мл смеси гексан - ацетон (1:1) и аликвоту вводят в хроматограф либо эфиром наносят пробу на пластинку и анализируют ТСХ. Степень определения триазинов при использовании схемы - 70 - 75%. Условия ГЖХ и ТСХ определения триазинов проводят по [6].

Определение ФОП. Экстракт 100 мл (1/3 часть) переносят в колбу для отгонки растворителей, фильтруя через безводный сульфат натрия. Растворитель отгоняют на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не более 40 °C до 0,5 мл. Экстракт переносят в мерную пробирку, ополаскивая колбу небольшими порциями ацетона. Объем в пробирке доводят ацетоном точно до 5 мл, перемешивают и анализируют хроматоферментным методом [7].

Количественную оценку и расчет результатов анализа проводят методом сравнения с идентифицированным стандартом, как описано в методике.

На втором этапе исследования вместо хроматоферментного определения (или параллельно) можно применить соответствующий метод ГЖХ или ТСХ (см. методические указания) при использовании в качестве стандарта пестицида, идентифицированного на первом этапе исследования.

В основу разработки положены:

1. Методические указания по определению трихлорацетата натрия и трихлоруксусной кислоты в воде, почве и растительном материале газожидкостной хроматографией // Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде. М.: Колос, 1983. С. 212 - 214.

2. Методические указания по определению остаточных количеств 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты (2,4-Д) в воде, почве, фураже, продуктах питания растительного и животного происхождения, в биологическом материале хроматографическими методами. N 2830-83 от 24.08.83.

3. Определение ДДТ, ДДЭ, ДДД, альдрина, дильдрина, гептахлора, кельтана, метоксихлора, эфирсульфоната и других ядохимикатов в воде, почве, продуктах питания, кормах и биологических средах хроматографией в тонком слое // Методы определения микроколичеств пестицидов. М.: Колос, 1977. С. 9 - 17.

4. Определение альдрина, гексахлорана, гептахлора, ДДТ, ДДД, ДДЭ в воде, овощах, фруктах и биологическом материале газожидкостной хроматографией. М.: Колос, 1977. С. 17 - 20.

5. Методические указания по определению хлорорганических пестицидов в воде, продуктах питания, кормах и табачных изделиях хроматографией в тонком слое. N 2142-80 от 28.01.80 (см. [1], с. 34 - 45).

6. Методические указания по определению остаточных количеств симм-триазинов в зерне, фруктах, овощах, почве, воде хроматографическими методами (см. [1], с. 215 - 223).

7. Методические указания по определению фосфорорганических пестицидов в растительных продуктах и биосубстратах энзимохроматографическим методом. N 2086-79 от 20.10.79 (см. там же, с. 122 - 127).