Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1987 г. N 4356-87

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БАЙТАНА И БАЙТАНА-УНИВЕРСАЛА В ЗЕРНЕ,

ПОЧВЕ И ВОДЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны А.Ф. Скурьятом, П.П. Кислушко, М.Н. Кивачицкой, Б.Б. Ешманской, Л.В. Зубкевичем (БелНИИЗР); Д.Б. Гиренко, Л.Е. Морару (ВНИИГИНТОКС).

Краткая характеристика препаратов дана в Методических указаниях N 5034-89.

Байтан-универсал - препарат, состоящий из 15% байтана, 7,5% имазолила и 2% фуберидазола, наполнителя и вспомогательных веществ (табл. 118).

Таблица 118

КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТОВ

┌────────┬──────────────────┬────────────┬─────────┬──────────────────────┐

│Пестицид│    Химическое    │Брутто-     │ Т. пл., │    Растворимость,    │

│        │     название     │формула     │   °C    │      г на 100 г      │

│        │                  │(молекуляр- │         ├───────┬──────────────┤

│        │                  │ная масса)  │         │в воде │в органических│

│        │                  │            │         │       │растворителях │

├────────┼──────────────────┼────────────┼─────────┼───────┼──────────────┤

│Байтан  │1-(4-Хлорфенокси)-│C  H  O N Cl│112      │0,01   │н-Гексан - 1  │

│(триади-│3,3-диметил-      │ 14 18 2 3  │         │       │Дихлорметан - │

│менол)  │1-(III-1,2,4-     │(295,6)     │         │       │10 - 20       │

│        │триазол)-1-ил-2-  │            │         │       │Изопропанол - │

│        │бутанол           │            │         │       │10 - 20       │

│        │                  │            │         │       │Толуол - 1 - 5│

│Фубери- │2-(2-Фурил)-      │C  H ON     │286 - 288│0,0078 │Циклогексан - │

│дазол   │бензимидазол      │ 11 8  2    │         │       │около 1       │

│        │                  │(184,2)     │         │       │Изопропанол - │

│        │                  │            │         │       │около 5       │

│        │                  │            │         │       │Дихлорметан - │

│        │                  │            │         │       │около 1       │

│        │                  │            │         │       │Толуол -      │

│        │                  │            │         │       │около 1       │

│        │                  │            │         │       │0,1 н HCl -   │

│        │                  │            │         │       │0,0016        │

│        │                  │            │         │       │0,1 н NaOH -  │

│        │                  │            │         │       │0,229         │

│Имазолил│1-(Аллилокси-2,4- │C  H  ON Cl │-        │Слабо  │Легко         │

│        │дихлорфенилэтил)- │ 14 14  2  2│         │раство-│растворим     │

│        │имидазол          │(297,2)     │         │рим    │              │

└────────┴──────────────────┴────────────┴─────────┴───────┴──────────────┘

Принцип метода. Метод основан на извлечении препарата из анализируемой пробы органическим растворителем, очистке экстракта на пластинках "Силуфол" с последующим определением методом ГЖХ с ТИД или методом ТСХ.

Метрологическая характеристика метода. Метрологические данные приведены в таблице 119.

Таблица 119

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

БАЙТАНА И БАЙТАНА-УНИВЕРСАЛА

┌────────────┬────────┬───────────┬───────┬────────┬────────┬─────────────┐

│Составляющие│Анали-  │Минимальное│Нижний │Среднее │Стан-   │Доверительный│

│  байтана-  │зируемая│детекти-   │предел │значение│дартное │  интервал   │

│ универсала │проба   │руемое     │опреде-│опреде- │отклоне-│  среднего   │

│            │        │количество,│ления, │ления, %│ние, %  │ при n = 5,  │

│            │        │мкг        │мг/л;  │        │        │  p = 0,95   │

│            │        │           │мг/кг  │        │        │             │

├────────────┴────────┴───────────┴───────┴────────┴────────┴─────────────┤

│                   Метод газожидкостной хроматографии                    │

│                                                                         │

│Байтан      │Зерно   │-          │0,026  │90,8    │+/- 3,5 │+/- 4,5      │

│            │Почва   │0,004      │0,030  │95,9    │+/- 4,9 │+/- 5,2      │

│            │Вода    │           │0,007  │95,0    │+/- 3,9 │+/- 5,0      │

│Имазолил    │Зерно   │           │0,058  │67,8    │+/- 6,9 │+/- 7,0      │

│            │Почва   │0,006      │0,050  │74,8    │+/- 6,9 │+/- 7,9      │

│            │Вода    │0,012      │0,012  │81,3    │+/- 6,3 │+/- 7,1      │

│Фуберидазол │Зерно   │           │0,016  │93,0    │+/- 5,0 │+/- 7,4      │

│            │Почва   │0,002      │0,010  │97,0    │+/- 3,3 │+/- 4,2      │

│            │Вода    │           │0,005  │99,5    │+/- 7,9 │+/- 10,1     │

│                                                                         │

│                    Метод тонкослойной хроматографии                     │

│                                                                         │

│Байтан      │Вода    │5          │0,1    │85,0    │+/- 5,0 │+/- 6,4      │

│            │Зерно   │5          │0,5    │69,0    │+/- 4,9 │+/- 5,2      │

└────────────┴────────┴───────────┴───────┴────────┴────────┴─────────────┘

Избирательность метода. Другие препараты, близкие по сфере применения в данных условиях хроматографирования, определению не мешают.

    Реактивы  и  растворы.  Для  газожидкостной  хроматографии: ацетон х.ч.

Этиловый  спирт  х.ч.  Пластинки  "Силуфол"  УФ   . Азот особой чистоты. 3%

                                               254

OV-17  на  газ-хроме  Q.  5% SE-301 на хроматоне N-AW-DMCS. Этилацетат х.ч.

Стандартный  раствор байтана-универсала в ацетоне (10 и 30 мкг/мл). Фильтры

плотные  "синяя  лента",  диаметр  10  см.  Для тонкослойной хроматографии:

ацетон  ч.  Хлороформ  ч.  Безводный  сульфат  натрия  ч. Нитрат серебра ч.

Бромфеноловый   синий  ч. Лимонная кислота, 2-процентный раствор. Пластинки

"Силуфол".  Подвижная  фаза  ацетон-хлороформ (1:9).  Проявляющий  реагент:

0,05 г  бромфенолового  синего  растворяют  в 10 мл ацетона;  0,5 г нитрата

серебра растворяют  в  20  мл  воды  и прибавляют  60 мл ацетона.  Растворы

сливают в мерную колбу на 100 мл  и  доводят  объем  раствора  ацетоном  до

метки.  После   обработки   бромфеноловым  синим  пластинку   обесцвечивают

2-процентным  раствором  лимонной  кислоты.  Стандартный  раствор  байтана,

содержащий 100 мкг/мл, готовят, растворяя 10 мг препарата в мерной колбе на

100 мл ацетона. Хранят в холодильнике не более 2 мес.

Приборы, аппаратура и посуда. Ротационный прибор-испаритель ИР. Мерная посуда. Воронки делительные и химические. Аппарат для встряхивания. Микрошприц на 10 мкл. Колбы: круглодонные на шлифе на 250 мл; конические на шлифе на 250 и 500 мл. Хроматограф "Цвет-106" или другой марки с ТИД. Секундомер. Камера для хроматографирования. Хроматоскоп.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстракта методом ГЖХ. Пробу воды (200 мл) в делительной воронке дважды экстрагируют по 100 мл этилацетата в течение 3 - 5 мин. Осушенный и объединенный экстракт концентрируют на ротационном испарителе. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и аликвоту вводят в хроматограф.

    Навеску  почвы  (100  г), измельченного зерна (10 - 20 г)  экстрагируют

100 - 200 мл этилацетата на приборе для встряхивания в течение 1,5 ч. Затем

экстракцию  повторяют,  встряхивая анализируемую пробу в течение 30 мин. со

100   мл  этилацетата.  Осушенный  и  объединенный  экстракт  упаривают  на

ротационном испарителе до объема 0,2 - 0,3 мл и проводят очистку. Для этого

на  пластинку "Силуфол" УФ   , предварительно промытую в камере с ацетоном,

                          254

в виде полосы наносят сконцентрированный экстракт, рядом - пятна стандартов

имазолила,  фуберидазола  и  байтана.  Пластинку  хроматографируют  в смеси

бензол-ацетон (11:1). Если  коэкстрактивные  вещества  находятся  близко от

места   нанесения  полосы  пробы,  то  после  высушивания  хроматографируют

повторно  в  той  же смеси. Нельзя допускать перегрузки стартовой полосы. В

случае,  если  экстракт сильно насыщен, его необходимо нанести на несколько

пластин.  Под  УФ-светом  отмечают место расположения пятен стандартов и на

том  же  уровне,  с  некоторым запасом, отмечают зону пробы. Полосу с зоной

пробы  вырезают,  измельчают ножницами и помещают  в  коническую  колбу  на

250 мл,  заливают  100 мл  ацетона  и встряхивают  в течение  1 ч.  Раствор

фильтруют  через  складчатый  фильтр,  предварительно  промытый   ацетоном.

Экстракцию повторяют  еще 2 раза порциями по 50 мл,  встряхивая  по 30 мин.

Объединенный экстракт упаривают до 0,5 мл, доводят точно до объема 1 - 2 мл

и 2 - 5 мкл вводят в хроматограф.

    Условия  газожидкостного  хроматографирования.  Определение проводят на

хроматографе  "Цвет-106"  с  ТИД. Используют стеклянную колонку длиной 1 м,

диаметром  3  мм.  Носитель  газ-хром  Q  (0,16  -  0,20  мм)  с  3% OV-17.

Температура   колонки   230  °C,   испарителя  290  °C.  Время удерживания:

фуберидазола - 1 мин. 30 с; байтана - 1 мин. 45 с; имазолила - 2 мин. 30 с.

Линейность детектирования сохраняется для фуберидазола в пределах 2 - 8 нг;

байтана  -  1 - 6 нг;  имазолила - 4 - 10 нг.  Рабочая  шкала  электрометра

        -12

100 x 10    А.  Расход  газов:  азота - 75 мл/мин.,  воздуха - 150 мл/мин.;

водорода - 27 мл/мин.  Скорость  движения  ленты  самописца  600 мм/ч.  Для

колонки  с 5% SE-30  температура  испарителя  230 °C,  температура  колонки

                                            -10

210 °C. Рабочая шкала  электрометра  2  x 10    А. Расход газов тот же, что

и  для  колонки  с OV-17. Время  удерживания  фуберидазола  45  с,  байтана

1  мин. 15 с, имазолила 1 мин. 30 с.

Расчет результатов анализа. Для количественного определения измеряют высоту пиков проб и стандартных растворов. Содержание каждого из компонентов байтана-универсала в пробе (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по формуле:

                                   C  H  V

                                    ст пр

                               X = -------,

                                   H  V P

                                    ст 1

    где:

    C   - содержание одного из компонентов байтана-универсала в стандартном

     ст

растворе, нг;

    H  ,  H    - высоты пиков соответственно стандартного раствора и пробы,

     ст    пр

мм;

    V - объем конечного экстракта, мл;

    V  - объем экстракта пробы, введенного в испаритель, мкл;

     1

    P - навеска пробы, г или мл.

Экстракция и очистка экстрактов методом ТСХ. Пробу воды (500 мл) помещают в делительную воронку и трижды экстрагируют хлороформом порциями по 30 мл. Объединяют органический слой, сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют до объема 0,3 - 0,5 мл на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °C. Сконцентрированную пробу наносят на хроматографическую пластинку.

Пробу зерна (25 г) помещают в коническую колбу, приливают 40 мл смеси ацетон-вода (7:3), встряхивают в течение 1 ч. Экстракцию повторяют дважды. Раствор фильтруют, фильтрат переносят в делительную воронку, приливают 300 мл дистиллированной воды, хорошо перемешивают. Из водного раствора дважды экстрагируют хлороформом по 30 мл. Объединенный органический растворитель сушат безводным сульфатом натрия, упаривают на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °C до объема 0,3 - 0,5 мл и наносят на хроматографическую пластинку.

Экстракцию проб из яблок и ягод проводят так же, как из зерна.

    Идентификация    и    количественное    определение   байтана.   Пробу,

сконцентрированную до объема 0,3 - 0,5 мл, количественно наносят при помощи

капиллярной  пипетки  на  хроматографическую  пластинку так,  чтобы диаметр

пятна  не  превышал 1 см.  Центр  пятна должен быть на расстоянии 1,5 см от

нижнего  края  пластинки.  Колбу с экстрактом 2 - 3 раза смывают небольшими

порциями хлороформа, который также наносят в центр пятна. Справа и слева от

пробы  наносят  серию  стандартных  растворов препарата,  содержащих 2; 5 и

10 мкг  препарата.  Пластинку  хроматографируют в системе  хлороформ-ацетон

(9:1).   После   хроматографирования   пластинку   высушивают  на  воздухе,

обрабатывают  из  пульверизатора  проявляющим  реагентом.  Затем  пластинку

обесцвечивают  раствором лимонной кислоты.  Байтан проявляется в виде пятна

ярко-голубого  цвета.  Величина  R  0,42 +/- 0,05.  В  системе   подвижного

                                  f

растворителя    толуол-ацетон-аммиак    (32:10:1)   величина   R    байтана

                                                                f

0,34 +/- 0,05.

    Содержание байтана в исследуемой пробе (X, мг/кг или мг/л) вычисляют по

формуле:

                                      A

                                  X = -,

                                      P

где:

A - количество препарата, найденное на хроматограмме, при сравнении со стандартом, мкг;

P - навеска или объем пробы, г или мл.

Требования безопасности. Выполняются в соответствии с "Правилами устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР" N 2455-81 от 20.10.1981.