Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1987 г. N 4329-87

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РЕСИНА В ВОДЕ, КОРНЕПЛОДАХ И БОТВЕ СВЕКЛЫ

МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

    Краткая характеристика  препарата.  Ресин  -  5,6,7-трихлор-3-

фенил-2Н-1,2,4-бензотиадиазиноксид-1. Брутто-формула C  H OCl N S.

                                                      13 7   3 2

Молекулярная масса 345,64.  Химически чистое вещество - кремоватый

порошок  без  запаха  с  т. пл. 225 - 230 °C,  труднорастворимый в

хлороформе, ацетонитриле, диметилформамиде. Растворимость  в воде,

бензоле, эфире при 20 °C 0,1%. МДУ в  корнеплодах  сахарной свеклы

0,04 мг/кг; ПДК в воде 0,002 мг/л.

Ресин применяется совместно с ТМТД в виде дуста при предпосевной обработке семян свеклы для повышения полевой всхожести.

Принцип метода. Метод основан на извлечении ресина из воды, корнеплодов и ботвы свеклы органическим растворителем, очистке экстрактов, хроматографировании в тонком слое силикагеля, УФ-облучении и проявлении зон локализации препарата аммиакатом серебра.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 153.

Таблица 153

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

┌──────────────────────────────────────┬──────────────────────────────────┐

│              Параметры               │       Анализируемый объект       │

│                                      ├────────────┬──────────┬──────────┤

│                                      │    вода    │корнеплоды│   ботва  │

│                                      │            │  свеклы  │  свеклы  │

├──────────────────────────────────────┼────────────┼──────────┼──────────┤

│Диапазон определяемых концентраций,   │0,004 - 0,04│0,02 - 0,2│0,04 - 0,4│

│мг/л, мг/кг                           │            │          │          │

│Среднее значение определения, %       │95,5        │88,66     │89,31     │

│Стандартное отклонение, %             │+/- 0,35    │+/- 2,88  │+/- 1,76  │

│Доверительный интервал среднего       │+/- 0,14    │+/- 1,34  │+/- 0,72  │

│значения определения при n = 25 и     │            │          │          │

│p = 0,95                              │            │          │          │

└──────────────────────────────────────┴────────────┴──────────┴──────────┘

Примечание. Предел определения 1 мкг.

Избирательность метода. Определению не мешают соединения, применяемые совместно с ресином и близкие по области применения (ТМТД, гидрел, дигидрел, ГМК, хлорхолинхлорид, этрел).

Реактивы и материалы. Ресин х.ч. Хлороформ ч.д.а. Нитрат серебра ч.д.а. н-Гексан ч. Сульфат натрия безводный ч. Аммиак 25-процентный водный ч.д.а. Ацетон ч.д.а. Этиловый эфир. Бензол ч.д.а. Гидроксид натрия х.ч. Хлороводородная кислота х.ч. Бумага индикаторная универсальная (pH 1 - 10). Эфир петролейный. Стандартные растворы ресина в хлороформе с содержанием соединения 5, 10, 20, 50, 100 мкг/мл. Хранить в холодильнике не более 2 недель. Проявляющий реагент: 0,85 г нитрата серебра помещают в мерную колбу на 100 мл и растворяют в нескольких миллиметрах дистиллированной воды, прибавляют 2,5 мл концентрированного раствора аммиака. Содержимое колбы перемешивают, доводят уровень раствора до метки дистиллированной водой. Хранят проявляющий реагент в защищенном от света месте не более 2 недель.

    Приборы,  аппаратура,  посуда. Ротационный испаритель.  Колбы:

грушевидные  для  отгонки  растворителей;  конические  на  500 мл;

мерные  на  50,  100  мл. Пластинки для тонкослойной хроматографии

"Силуфол"    УФ   .    Пипетки    на   1,   5,   10   мл.   Камера

               254

хроматографическая.  Воронки  делительные  на  500 мл; химические.

Пульверизатор   стеклянный.  Механический  встряхиватель.  Ртутно-

кварцевая лампа ПРК-4.

Ход анализа. Экстракция. Пробу воды (250 мл) помещают в колбу на 500 мл, добавляют 100 мл хлороформа и экстрагируют на встряхивателе в течение 20 мин. Органический слой отделяют при помощи делительной воронки в колбу для отгонки растворителя, сливая через слой безводного сульфата натрия. Воду вновь экстрагируют 100 мл хлороформа в течение 20 мин. на встряхивателе. Объединенные экстракты упаривают на роторном испарителе при температуре 60 °C и количественно переносят на хроматографическую пластинку при помощи хлороформа - 3 раза по 0,2 мл.

Навеску свеклы (50 г) или ботвы (25 г) измельчают и помещают в колбу на 250 мл, заливают 30 мл хлороформа и экстрагируют на встряхивателе в течение 20 мин. Хлороформ сливают через слой безводного сульфата натрия в колбу для отгонки растворителя. Экстракцию повторяют еще дважды. Объединенный экстракт выпаривают на роторном испарителе при температуре 60 °C. Затем колбу охлаждают и извлекают ресин в виде натриевой соли тройной экстракцией 5-процентным раствором едкого натра порциями по 3 мл. Водную фазу отфильтровывают через фильтр, подкисляют 0,5 М раствором хлороводородной кислоты до pH 5 - 6 и оставляют на 15 мин. Ресин из воды извлекают на встряхивателе, дважды обрабатывая хлороформом порциями по 10 мл в течение 10 мин. Экстракты объединяют, промывают дистиллированной водой до нейтральной реакции и сливают через слой безводного сульфата натрия в колбу для отгонки растворителя. Хлороформ выпаривают на ротационном испарителе при 60 °C. Сухой остаток количественно, трижды обрабатывая хлороформом по 0,2 мл, переносят на пластинку "Силуфол".

Условия хроматографирования. При исследовании воды пластинку с нанесенными экстрактами помещают в хроматографическую камеру со смесью гексан - ацетон (1,25:1) и хлороформ - ацетон (16:1). После поднятия фронта растворителей на 10 - 12 см пластинку вынимают и сушат на воздухе.

При хроматографировании экстрактов из корнеплодов свеклы пластинки хроматографируют ступенчатым способом в двух подвижных фазах: 1 - бензол, 2 - гексан - ацетон (1,25:1). В первой камере пластинку оставляют на 1 ч. После полного испарения остатков бензола проводят разделение во второй камере, поднимая растворитель на 10 - 12 см. Затем пластинку вынимают и сушат на воздухе.

    Исследуя ботву свеклы, пластинку помещают  в камеру с системой

растворителей  петролейный  эфир - этиловый эфир (9:1) и поднимают

подвижную  фазу  на  10  -  12 см. Удалив с пластинки растворитель

первой  камеры,  ее  помещают  в камеру с подвижной фазой гексан -

ацетон  (1,25:1)  и поднимают фронт на 10 - 12 см. Затем пластинку

вынимают  и сушат  на воздухе. После хроматографирования пластинку

подвергают  УФ-облучению  в  течение  60  мин.  Затем обрабатывают

раствором  аммиаката  серебра  и  вновь помещают под УФ-лампу на 5

мин.  Зоны  локализации ресина проявляются в виде темно-коричневых

пятен на светло-сером фоне с величиной R  0,66 +/- 0,02.

                                        f

    Обработка  результатов  анализа.  Количество препарата в пробе

(X,  мг/л  или  мг/кг)  определяют сравнением площади пятна проб и

стандартных растворов по формуле:

                               AS

                                 2

                           X = ---,

                               PS

                                 1

    где:

    A  -  количество  ресина  в  пятне  стандартного  раствора  (в

диапазоне линейности), мкг;

    P - количество анализируемой пробы, мл или г;

    S , S  - площади пятен соответственно стандартного  раствора и

     1   2

пробы, кв. мм.

Требования безопасности. Необходимо соблюдать правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.