Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1987 г. N 4326-87

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СТОМПА В ЭФИРОМАСЛИЧНЫХ РАСТЕНИЯХ И

ЭФИРНЫХ МАСЛАХ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны Ю.С. Барановым (ВНИИЭМК).

Краткая характеристика препарата приведена в Методических указаниях N 3252-85.

Принцип метода. Метод основан на извлечении стомпа из растений ацетоном, очистке экстрактов перераспределением в системе двух несмешивающихся жидкостей, дополнительной очистке растительных экстрактов на колонке с оксидом алюминия и газохроматографическом определении с помощью ДПР и ТИД. Из эфирного масла стомп извлекают концентрированной серной кислотой, перераспределяют из разбавленной кислоты в н-гексан, очищают на колонке с оксидом и определяют методом ГЖХ.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 51.

Таблица 51

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТОМПА

В ЭФИРОМАСЛИЧНЫХ РАСТЕНИЯХ И ЭФИРНЫХ МАСЛАХ

(p = 0,95, n = 5)

┌────────────────────────────────────┬──────────────────┬────────┬────────┐

│             Параметры              │Исследуемый объект│  ДПР   │  ТИД   │

├────────────────────────────────────┼──────────────────┼────────┼────────┤

│Минимально детектируемое количество,│Растения и масла  │0,1     │2,0     │

│нг                                  │                  │        │        │

│Нижний предел определения, мг/кг    │Растения          │0,004   │0,08    │

│                                    │Масла             │0,02    │0,4     │

│Среднее значение определения, %     │Растения          │73,6    │75,3    │

│                                    │Масла             │72,2    │72,3    │

│Стандартное отклонение, %           │Растения          │+/- 2,50│+/- 2,66│

│                                    │Масла             │+/- 2,43│+/- 1,24│

│Доверительный интервал среднего, %  │Растения          │+/- 6,10│+/- 6,51│

│                                    │Масла             │+/- 5,95│+/- 3,05│

└────────────────────────────────────┴──────────────────┴────────┴────────┘

Избирательность метода. Метод селективен. Прочие пестициды, используемые на плантациях эфироносов, в том числе трефлан и нитрофор, определению не мешают.

Реактивы и растворы. Ацетон ч. н-Гексан ч. Серная кислота ч. Оксид алюминия для хроматографии ч. (размер частиц 100 - 200 мк, II степени активности по Брокману). Сульфат натрия безводный ч. Хроматон N-супер (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30. Хроматон N-супер (0,16 - 0,20 мм) с 5% XE-60. Стандартные растворы стомпа в ацетоне с содержанием 100; 10 и 1 мкг/мл. Для приготовления стандартного раствора на аналитических весах взвешивают 10 +/- 0,2 мг стомпа и помещают навеску в мерную колбу вместимостью 100 мл. Навеску растворяют в 10 - 15 мл ацетона и доводят до метки тем же растворителем. Раствор содержит 100 мкг стомпа в 1 мл. Из раствора пипеткой переносят в мерную колбу на 100 мл 10 мл раствора и доводят до метки ацетоном. Раствор содержит 10 мкг/мл стомпа. Растворы с концентрацией 1,0 и 0,1 мкг/мл готовят соответственно из исходных растворов с концентрацией 100 и 10 мкг/мл, отбирая по 1 мл раствора в мерную колбу на 100 и 10 мл и доводя до метки ацетоном. Растворы стомпа стабильны при хранении в холодильнике в течение 6 мес.

Приборы и посуда. Хроматограф газовый "Цвет-106" или аналогичный. Аппарат для встряхивания. Весы аналитические ВЛА-200 второго класса точности. Весы технические четвертого класса точности. Ротационный вакуумный испаритель. Гомогенизатор. Делительные воронки типа ВД. Воронки лабораторные типа В. Колбы: плоскодонные конические типа КНКШ; грушевидные остродонные типа ОКШ; мерные на 100 мл. Мензурки на 50 и 100 мл. Пипетки на 1 и 10 мл. Микрошприцы на 1 мкл (МШ-1) и 10 мкл (МШ-10). Колонки для хроматографирования длиной 100 мм с внутренним диаметром 15 мм.

Подготовка к определению. Органические растворители (ацетон, н-гексан) перед началом работы необходимо перегнать, сульфат натрия прокалить при температуре 300 - 400 °C. Хроматографическую колонку и детектор кондиционируют в режимных условиях в течение 2 ч. Для анализа отбирают среднюю пробу растений эфиромасличных культур - 50 г, эфирного масла - 10 г.

Ход анализа. Свежесрезанные эфиромасличные растения (50 г) гомогенизируют со 150 мл ацетона в течение 15 - 20 мин. со скоростью 8000 об./мин., встряхивают 30 - 40 мин. Экстракты фильтруют через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 мл. Стакан гомогенизатора промывают ацетоном трижды порциями по 20 мл и через фильтр присоединяют смыв к основному фильтрату. Упаривают ацетон на ротационном испарителе до объема 10 мл при температуре бани 50 °C. Остаток количественно с 50 мл н-гексана переносят в делительную воронку вместимостью 500 мл с 250 мл дистиллированной воды. Встряхивают 1 - 2 мин. и отделяют верхний слой. Операцию повторяют еще дважды. Верхние слои объединяют, высушивают, пропуская через 100 г безводного сульфата натрия, и упаривают до объема 5 мл на ротационном испарителе. Остаток переносят на колонку с 6 г оксида алюминия, предварительно промытую 12 мл смеси н-гексан-ацетон (9:1). После того как раствор полностью поглотится сорбентом, отгонную колбу смывают 5 мл смеси н-гексан-ацетон (9:1) и переносят на колонку. Операцию проделывают три раза. Стомп элюируют 50 мл смеси гексан-ацетон (9:1). Элюат упаривают на ротационном испарителе досуха. Остаток растворяют в 1 мл ацетона и 2 мкл вводят в испаритель хроматографа.

Навеску эфирного масла мяты, герани, кориандра (10 г) помещают в коническую колбу на 100 мл, добавляют 10 мл н-гексана и выдерживают 20 мин. для растворения. Затем прибавляют 20 мл концентрированной серной кислоты, встряхивают и выдерживают 5 мин. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 500 мл с 250 мл дистиллированной воды и реэкстрагируют стомп н-гексаном трижды порциями по 30 мл. Объединенные экстракты сушат, пропуская через 100 г безводного сульфата натрия, и концентрируют до объема 5 мл на ротационном испарителе. Остаток переносят на хроматографическую колонку. Дальнейший анализ проводят так же, как анализ растений.

Условия хроматографирования. Используют стеклянные колонки спиральной формы длиной 1 м с внутренним диаметром 3 мм. Расход газа-носителя при работе с ТИД 40 мл/мин., при работе с ДПР - 60 мл/мин. Расход водорода 16 мл/мин., воздуха - 400 мл/мин. Температура (°C): испарителя - 230, термостата колонок - 190, термостата детекторов - 230. Хроматографируемый объем 2 мкл. Остальные условия хроматографирования приведены в таблице 52.

Таблица 52

УСЛОВИЯ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ

┌─────────────────────────┬───────────────────────┬───────────────────────┐

│        Параметры        │       5% SE-30        │       5% XE-60        │

│                         ├───────────┬───────────┼───────────┬───────────┤

│                         │    ТИД    │    ДПР    │    ТИД    │    ДПР    │

├─────────────────────────┼───────────┼───────────┼───────────┼───────────┤

│Время удерживания стомпа │5 мин. 30 с│7 мин. 15 с│6 мин. 42 с│8 мин. 30 с│

│Линейный динамический    │2 - 2000   │0,1 - 10   │2 - 2000   │0,1 - 10   │

│диапазон, нг             │           │           │           │           │

│                         │        -12│       -12 │        -12│       -12 │

│Рабочая шкала            │100 x 10   │20 x 10    │100 x 10   │20 x 10    │

│электрометра, А          │           │           │           │           │

└─────────────────────────┴───────────┴───────────┴───────────┴───────────┘

Обработка результатов анализа. Количество стомпа в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

                                     HV

                                       1

                                 X = ----,

                                     V KA

                                      2

    где:

    H - высота пика препарата в анализируемой пробе, мм;

    V  - объем анализируемой пробы, мл;

     1

    V  - объем инъектируемой пробы, мкл;

     2

    A - навеска, г;

    K - калибровочный коэффициент, который определяют по следующей формуле:

                            H     H           H

                         1   1     2           n

                     K = - (--- + --- + ... + ---),

                         n  CV    CV          CV

                              1     2           n

    где:

    H , H , H  - высоты пиков стандартного раствора стомпа, мм;

     1   2   n

    V , V , V   -  объемы   стандартного   раствора   стомпа,   вводимые  в

     1   2   n

хроматограф, мкл;

    C - концентрация  стандартного  раствора - 10 мкг/мл (ТИД),  0,1 мкг/мл

(ДПР).

Содержание стомпа в пробах растений и эфирных масел вычисляют как среднее из трех параллельных определений.

Требования безопасности. Следует руководствоваться правилами безопасности при работе с соединениями третьего класса токсичности и легколетучими растворителями.