Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

21 ноября 1985 г. N 4037-85

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ АРИЛОНА

ПО БЕНЗОЛСУЛЬФОНАМИДУ В ЗЕРНАХ ХЛОПКА, ПОЧВЕ И ВОДЕ

ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Краткая характеристика препарата

Арилон (хлорамин "Б") - кристаллогидрат натриевой соли бензолсульфонамида. Арилон показал хорошие результаты в качестве антисептика на хлопке.

                Cl

               /

      /\\  SO N    x 3H O                                C H  O NClSNa

     /  \\/  2 \       2                                  6 11 5

    ││   │      Na

    ││   │                                               Мол. масса 267,66.

     \  //

      \//

Арилон хорошо растворим в воде и водных растворах щелочей. При нагревании выше 150 °С разлагается с выделением газообразных продуктов разложения (HCl, Cl). В водных и кислых растворах нестабилен, в течение нескольких минут разлагается до бензолсульфонамида.

МДУ арилона в хлопке еще не установлен.

2. Методика определения арилона в зернах хлопка,

почве и воде тонкослойной хроматографией

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода.

Метод основан на извлечении арилона в виде бензолсульфонамида (БСА) из анализируемого объекта этилацетатом, перераспределении в солянокислый раствор, а затем, после подщелачивания, - в этилацетат и определении тонкослойной хроматографией.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода.

Диапазон измеряемых концентраций 0,1 - 0,5 мкг в хроматографируемой пробе по БСА.

Предел обнаружения                 арилон                  БСА

   в хлопке                      0,35 мг/кг             0,2 мг/кг

   в почве                       0,1 мг/кг              0,07 мг/кг

   в воде                        0,003 мг/л             0,002 мг/л

Дальнейшая метрологическая характеристика метода представлена в таблице 1.

Таблица 1

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

┌──────┬───────────────────┬──────────────┬──────────────────┬────────────┐

│Объект│Среднее значение   │  Стандартное │  Доверительный   │   Размах   │

│      │определения стан-  │отклонение при│интервал среднего │варьирования│

│      │                  _│ n = 15, S, % │ определения при  │    R, %    │

│      │дартных количеств С│              │р = 0,95, n = 5, %│            │

│      │при n = 15, %      │              │                  │            │

├──────┼───────────────────┼──────────────┼──────────────────┼────────────┤

│Хлопок│85,7               │+/- 11,2      │85,7 +/- 13,8     │70 - 100    │

│Почва │92,7               │+/- 7,0       │92,7 +/- 8,6      │80 - 100    │

│Вода  │86,7               │+/- 9,7       │86,7 +/- 12,1     │70 - 100    │

└──────┴───────────────────┴──────────────┴──────────────────┴────────────┘

2.1.3. Избирательность метода.

Метод селективен. Другие пестициды, применяемые на хлопчатнике, в том числе хлорорганические и фосфорорганические, определению не мешают.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, осч, ГОСТ 2609-79, свежеперегнанный.

Этилацетат, хч, ГОСТ 22300-76, свежеперегнанный.

Этиловый спирт 96-процентный, ТУ 6-09-1710-77.

Бензол, чда, ГОСТ 5955-75.

Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74.

Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.

    Na SO , хч, ГОСТ 4166-76, безводный.

      2  4

    KMnO , хч, ГОСТ 4220-75.

        4

о-Толидин, ч, ТУ 6-09-2992-73.

KI, йодистый кали, хч, ГОСТ 4232-74.

Соляная кислота, фиксанал, осч, ГОСТ 14261-77, 0,1 н, 10-процентный.

КОН, едкое кали, техн., ГОСТ 9285-78.

Уксусная кислота, осч, ГОСТ 18270-72, ледяная.

Проявляющий реагент 1. Растворяют 0,16 г о-толидина в 30 мл уксусной кислоты, доводят до 500 мл водой и прибавляют 1 г KI. Раствор хранить в темном месте.

    Хлорирующая  смесь.  Смешивают  равные  объемы 1,5-процентного раствора

KMnO  и 10-процентного  раствора HCl в чашечке Петри. Смесь в  чашке  Петри

    4

помещают  на  дно  хлорирующей  камеры  с  притертой крышкой. Для этой цели

обычно достаточно 10 - 12 мл хлорирующей смеси.

Проявляющий реагент 2. Смешивают 50 мл 1-процентного водного раствора KI с 50 мл 3-процентного водного свежеприготовленного, доведенного до кипения крахмала и 20 мл этилового спирта. При хранении на холоде раствор стабилен в течение нескольких дней.

Стандартные растворы бензолсульфонамида в ацетоне с содержанием 100 и 10 мкг/мл. Раствор 1 с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 10 мг бензолсульфонамида, помещенного в мерную колбу на 100 мл, в ацетоне. Для приготовления раствора 2 с содержанием 10 мкг/мл из раствора 1 пипеткой отбирают в мерную колбу на 100 мл 10 мл и доводят до метки ацетоном. Растворы 1 и 2 стабильны при хранении в холодильнике в течение одного месяца.

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Камера хроматографическая, ГОСТ 10565-75, или аналогичная.

Аппарат для встряхивания.

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76, с набором колб или аналогичный.

Делительные воронки, ГОСТ 8613-75, на 250 и 1500 мл.

Стеклянные пульверизаторы, ГОСТ 10391-74.

Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.

Пипетки, ГОСТ 20292-77, на 10, 15 и 2 мл.

Кофейная мельница.

Пробирки с пробками на шлифах, ГОСТ 10515-75, на 10 мл.

Круглодонные колбы, ГОСТ 9737-70, на 100 и 250 мл.

Плоскодонные колбы, ГОСТ 9737-70, на 100, 500 мл.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.

Камера хлорирующая с пришлифованной крышкой.

Чашечки Петри, ГОСТ 19908-74.

Микрошприц на 100 мкл.

Пластинки силуфол, 150 х 150 см, производство ЧССР.

2.4. Подготовка к определению

Хроматографические камеры за один час до начала хроматографирования заполняют смесью подвижных растворителей гексан:этилацетат (1:1) или бензол:ацетон (7:3). Объем подвижного растворителя в камере должен по высоте находиться не выше чем 0,7 - 1 см от уровня дна камеры.

2.5. Отбор проб

Отбор проб проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР 21 августа 1979 г., N 2051-79.

2.6. Подготовка проб к анализу

Зерна хлопка измельчают на кофейной мельнице до консистенции муки грубого помола. Для определения берут 3 - 5 проб массой по 10 г. Почву просеивают, отбирают средние пробы массой по 15 г. Перед анализом почву увлажняют 2 мл воды.

2.7. Проведение определения

Хлопок, почва. Навеску анализируемого образца помещают в плоскодонную колбу на 500 мл, заливают 75 мл перегнанного этилацетата и экстрагируют БСА на механическом встряхивателе в течение 30 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в круглодонную колбу на 250 мл. Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 50 мл этилацетата. Объединенный этилацетатный экстракт концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема около 2 мл, а почвенный экстракт досуха. К остатку в колбе приливают 15 мл 0,1 н HCl в экстракт из хлопка и 30 мл 0,1 н HCl - в почвенный экстракт. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку на 250 мл. Стенки колбы тщательно обмывают 0,1 н HCl порциями по 15 и 30 мл. Полученные растворы также фильтруют в делительную воронку. В результате жир из хлопкового экстракта остается на бумажном фильтре. Если делительная воронка все-таки испачкалась жиром, солянокислотный экстракт переносят в другую воронку, при этом жир остается на стенках первой колонки. Далее к экстракту добавляют 1,25 мл 4 н КОН до pH = 10. БСА извлекают экстракцией этилацетатом, порциями по 30 мл три раза. Экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (15 - 20 г), фильтруют и концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя досуха.

К сухому остатку от хлопка пипеткой приливают 1 мл этилацетата, а к почвенному экстракту - 0,5 мл ацетона. Колбу закрывают пробкой и тщательно обмывают стенки колбы растворителем. Для хроматографирования отбирают аликвоты в 100 мкл.

Вода. К 1 л воды, помещенной в делительную воронку емкостью 1,5 л, приливают 1 мл 4 н КОН и экстрагируют БСА этилацетатом, насыщенным водой, порциями по 150 мл и два раза по 100 мл. Этилацетатный экстракт концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя досуха. Остаток с помощью 0,1 н HCl (30 мл х 3) переносят в делительную воронку на 500 мл, в воронку добавляют 1,25 мл 4 н КОН и трижды экстрагируют БСА этилацетатом порциями по 30 мл. Этилацетатный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия, а затем порциями концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема около 2 мл. Последнюю порцию концентрируют досуха. К сухому остатку пипеткой приливают 1 мл ацетона, колбу закрывают пробкой на шлифе и ее стенки тщательно обмывают растворителем. Для ТСХ отбирают аликвоту в 100 мкл.

    На  пластинку наносят микрошприцем 100 мкл полученного раствора. Справа

и   слева   от  рабочей  пробы  на  пластинку  микрошприцем  наносят  серию

стандартных   растворов   2  в  количестве   10,  20,  30...  50  мкл,  что

соответствует 0,1; 0,2; 0,3;... 0,5  мкг  БСА.  Хроматограмму  развивают  в

смеси  этилацетата с   гексаном  (1:1)   или  бензола  с  ацетоном   (7:3).

После развития хроматограммы  пластинку во  влажном  состоянии  помещают  в

камеру с хлорирующей  смесью  на  2 -  3  мин., затем пластинку вынимают из

камеры, помещают ее под  тягу  и дают возможность избытку хлора испариться,

после   чего   обрабатывают   пластинку   из  пульверизатора  о-толидиновым

реагентом. Бензолсульфонамид проявляется на  пластинках  в  виде  сиреневых

пятен на белом  фоне  с  R  =  45  +/-  0,03  в  первой  системе  подвижных

                          f

растворителей и с  R  =  0,50  +/-  0,03 -  во  второй.  Линейный  диапазон

                    f

определения 0,1 - 0,5  мкг  БСА.  Пятна  стабильны  в  течение  длительного

времени.

Хроматограмму можно проявлять также проявляющим реагентом 2. В этом случае БСА проявляется на пластинках в виде голубых пятен на белом фоне с нижним пределом определения 0,1 - 0,2 мкг.

2.8. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят путем сравнения площади и интенсивности окраски пятен рабочей пробы и серии стандартов.

Содержание арилона в анализируемой пробе X в мг/кг вычисляют по формуле:

                                    С х V х К

                                Х = ---------,

                                      V  х Р

                                       а

    где:

    С  -  количество  бензолсульфонамида,  найденное  на  пластинке методом

соотношения со стандартом, мкг;

    V - общий объем раствора, мл;

    V  - объем аликвоты, взятой для хроматографирования, мл;

     а

    Р - навеска анализируемой пробы в г;

    К - коэффициент пересчета БСА на арилон, равен 1,71.

3. Требования безопасности

Соблюдать требования безопасности, принятые для работы с легковоспламеняющимися жидкостями, кислотами и щелочами.

4. Разработчики

Методические указания разработаны во ВНИИ химических средств защиты растений с опытным заводом, г. Москва, Л.И. Лещинской, К.Ф. Новиковой.

5. Апробаторы

1. НПО "Эфирмасло", Ю.С. Баранов.

2. ВИЭВ, В.Н. Полякова.