Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

21 ноября 1985 г. N 4036-85

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ФЕНМЕДИФАМА И ДЕСМЕДИФАМА В ВОДЕ

ПРИРОДНЫХ ВОДОЕМОВ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Краткая характеристика препарата

┌───┬──────────┬───────────────────┬──────────┬─────┬──────┬───────────────┐

│ N │ Вещество,│    Структурная    │  Брутто  │ Мол.│Т пл.,│ Растворимость,│

│п/п│химическое│      формула      │  формула │масса│ °С   │      мг/л     │

│   │ название │                   │          │     │      │               │

├───┼──────────┼───────────────────┼──────────┼─────┼──────┼───────────────┤

│1. │Фенмедифам│  ___  NHCO CH     │C  H  N O │300,3│143 - │Т комн.        │

│   │(бетанал) │  --- /    2  3    │ 16 16 2 4│     │144   │вода - 3       │

│   │3-Метокси-│/     \            │          │     │      │ацет. - 20000  │

│   │карбамидо-│\\   //            │          │     │      │метанол - 50000│

│   │фенил-N-3-│  --- \            │          │     │      │хлф. - 20000   │

│   │метилфенил│       OCONHC H CH │          │     │      │гекс. - 500    │

│   │карбамат  │             6 4  3│          │     │      │бенз. - 2500   │

│   │          │                   │          │     │      │               │

│2. │Десмедифам│  ___  NHCO C H    │C  H  N O │300,3│120   │вода - 7       │

│   │3-Этокси- │  --- /    2 2 5   │ 16 16 2 4│     │      │ацет. - 400000 │

│   │карбамидо-│/     \            │          │     │      │метан - 180000 │

│   │фенил-N-  │\\   //            │          │     │      │бенз. - 1600   │

│   │фенилкар- │  --- \            │          │     │      │хлф. - 80000   │

│   │бамат     │       OCONHC H    │          │     │      │               │

│   │          │             6 5   │          │     │      │               │

└───┴──────────┴───────────────────┴──────────┴─────┴──────┴───────────────┘

Фенмедифам и десмедифам - гербициды, применяемые для борьбы с сорными растениями в посевах сахарной, столовой и кормовой свеклы.

    Оба соединения малотоксичные. ЛД   для  крыс: фенмедифама - 8000 мг/кг,

                                    50

десмедифама - 9600 мг/кг; СК   для рыб соответственно - 0,5 - 10 мг/л и 3,8

                            50

- 16,4 мг/л.

ПДК в воде природных водоемов 0,1 мг/л для обоих гербицидов.

2. Методика определения фенмедифама и десмедифама

в воде природных водоемов тонкослойной хроматографией

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении гербицидов из воды хлороформом с последующим определением с помощью тонкослойной хроматографии.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Диапазон измеряемых концентраций 0,15 - 1,00 мкг.

Предел обнаружения в пробе 0,002 мг/л.

    Среднее   значение  определения  стандартных  растворов  фенмедифама  и

            _

десмедифама С при n = 15 - 91,3% и 93,7% соответственно.

Стандартное отклонение S при n = 15 - +/- 6,9% и 6,7%.

Доверительный интервал среднего определения при р = 0,95 и n = 5 - 91,3 +/- 8,6% и 94,7 +/- 8,3% соответственно.

Размах варьирования R 80 - 100% для обоих гербицидов.

2.1.3. Избирательность метода

Метод селективен.

2.2. Реактивы и материалы

Хлороформ, х.ч., ГОСТ 20015-74, свежеперегнанный.

Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.

Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-79.

Этилацетат, х.ч., ГОСТ 22300-76.

Сульфат натрия, х.ч., ГОСТ 4166-76, безводный.

Этиловый эфир, х.ч., ГОСТ 6265-74.

Аммиак, ч., ГОСТ 3760-79, концентрированный.

4-Аминоантипирин, ч.д.а., ТУ 6-09-3948-75, 1-процентный водный раствор. Готовят ежедневно.

    Калий   железосинеродистый,   K [Fe(CN) ],   ч.д.а.,    ГОСТ   4206-81,

                                   3       6

4-процентный водный раствор.

    Соляная кислота, HCl, ч.д.а., ГОСТ 3118-77, уд. м. 1,19.

    Углекислый натрий, Na CO , ч.д.а.,  ГОСТ  83-79,  10-процентный  водный

                         2  3

раствор.

    Едкий калий, KOH, х.ч., ГОСТ 9285-78, 10-процентный водный раствор.

    Нитрит натрия, NaNO , ГОСТ 4197-74, 10-процентный водный раствор.

                       2

Сульфаниловая кислота, ч.д.а., ГОСТ 5821-78.

Проявляющий реактив на основе соли диазония. Для приготовления n проявляющего реактива растворяют 25 г сульфаниловой кислоты в 125 г 10-процентного КОН. Раствор охлаждают и смешивают со 100 мл 10-процентного раствора нитрита натрия. Реакционную смесь приливают к 40 мл охлажденной льдом соляной кислоты (уд. м. 1,19), разбавленной 20 мл воды. (При разбавлении соляную кислоту добавляют в воду, а не наоборот!) Полученную соль диазония отфильтровывают, промывают водой, этиловым эфиром, затем сушат на воздухе. Соль помещают в склянку с притертой пробкой и хранят в холодильнике. Хроматограмму опрыскивают свежеприготовленным раствором 0,1 г соли диазония в 20 мл 10-процентного раствора углекислого натрия.

Пластинки силуфол, производство ЧССР.

Стандартные растворы фенмедифама и десмедифама в ацетоне с содержанием 100 мкг/мл (раствор N 1) и 1 мкг/мл (раствор N 2). Растворы N 1 и N 2 стабильны при хранении в холодильнике в течение трех месяцев.

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Ротационный вакуумный испаритель с набором колб, ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Сушильный шкаф, ТУ 64-1-1411-76.

Хроматографическая камера с пришлифованной крышкой, ГОСТ 10565-75.

Камера для аммиака с пришлифованной крышкой.

Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.

Делительные воронки, ГОСТ 10054-75, на 250 мл.

Конические колбы, ГОСТ 9737-70, на 250 мл.

Пробирки градуированные конические с пробками на шлифах, ГОСТ 1770-74, на 10 мл.

Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 1 мл с делениями.

Микрошприц на 100 мкл, ГОСТ 10391-74.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.

2.4. Подготовка к определению

Хроматографическую камеру за один час до начала хроматографирования заполняют смесью подвижных растворителей этилацетат:гексан (2:5) для насыщения камеры парами растворителей. Объем подвижного растворителя должен по высоте находиться не выше чем 0,7 - 1,0 см от уровня дна камеры.

2.5. Отбор проб

Отбор проб воды проводят в соответствии с утвержденными "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР 21 августа 1979 г., N 2051-79.

2.6. Проведение определения

Пробу воды 100 мл помещают в делительную воронку на 250 мл и экстрагируют фенмедифам и десмедифам трижды хлороформом, порциями по 50 мл. Объединенный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (10 г), а затем порциями фильтруют в грушевидную колбу на 30 мл. Каждую порцию хлороформного экстракта концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 1 - 2 мл. Последнюю порцию экстракта концентрируют досуха. К сухому экстракту пипеткой добавляют 2 мл ацетона, колбу закрывают пробкой на шлифе и ее стенки тщательно обмывают растворителем. Из полученного раствора микрошприцем отбирают 100 мкл и переносят в коническую пробирку. В пробирку помещают заплавленный в верхней части стеклянный капилляр и концентрируют раствор на горячей водяной бане до объема 0,05 мл. Остаток с помощью того же капилляра, но с отломанным запаянным концом, переносят на хроматографическую пластинку. Параллельно на пластинку наносят серию стандартных растворов гербицидов с содержанием 0,2; 0,3; 0,4...1 мкг. Серию стандартов готовят следующим образом: из стандартных растворов N 2 в коническую пробирку пипеткой переносят 0,2; 0,3; 0,4...1 мл, в пробирки помещают заплавленные в верхней части капилляры и концентрируют растворы на горячей водяной бане до объема 0,05 мл. Хроматограмму развивают в системе этилацетат:гексан (2:5). После развития хроматограмму тщательно высушивают на воздухе, термостатируют в течение 5 мин. при 150 °С в сушильном шкафу, затем помещают в камеру с аммиаком, где выдерживают пластинку в течение 10 мин. Аммиак с пластинки отдувают на воздухе, а затем пластинку обрабатывают одним из двух способов.

    Способ 1. Пластинку   обрабатывают   1-процентным   водным    раствором

4-аминоантипирина,  а  затем  4-процентным   водным  раствором K [Fe(CN) ].

                                                                3       6

Фенмедифам  и десмедифам проявляются на пластинке в виде розовых  пятен  на

желтоватом фоне с R  0,32 +/- 0,05 и 0,42 +/- 0,05 соответственно.

                   f

Пятна стабильны при хранении в темноте в течение двух недель.

Способ 2. С использованием проявляющего реагента на обнове соли диазония. Пластинку обрабатывают свежеприготовленным раствором соли диазония. В этом случае гербициды проявляются в виде устойчивых оранжевых пятен на белом фоне. Хроматограммы стабильны при хранении даже на свету в течение длительного периода времени (более одного месяца).

Линейность определения гербицидов с использованием обоих проявляющих реагентов 0,2 - 1,0 мкг в хроматографируемой пробе.

Для расширения диапазона определения гербицидов на пластинку можно наносить не аликвотные части растворов, а весь раствор полностью. При большом содержании гербицидов в грушевидную колбочку пипеткой добавляют дополнительное замеренное количество ацетона и после этого отбирают аликвотную часть для хроматографирования.

2.7. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят путем сравнения площади и интенсивности окраски пятен рабочей пробы и серии стандартов.

Содержание фенмедифама и десмедифама в анализируемой пробе воды Х в мг/л вычисляют по формуле:

                                   С х V

                               Х = ------,

                                   V  х Р

                                    а

    где:

    С - количество гербицида, найденное в хроматографируемой пробе, мкг;

    V - общий объем раствора, мл;

    V  -  объем  аликвоты,  отобранной  для  хроматографирования,  мл  (при

     а

нанесении всей пробы V = V );

                          а

    Р - объем воды, отобранной для анализа, мл.

3. Требования безопасности

Соблюдать требования безопасности, установленные для работы с легковоспламеняющимися жидкостями и работы с крепкими кислотами и щелочами.

4. Разработчики

Настоящие Методические указания разработаны во ВНИИХСЗР с опытным заводом, г. Москва, Т.В. Алдошиной, К.Ф. Новиковой.

5. Настоящие Методические указания являются дополнением к методу определения бетанала в сахарной свекле тонкослойной хроматографией, разработанному М.А. Клисенко, Н.И. Киселевой (N 1112-73).

6. Апробаторы

1. НПО "Эфирмасло", Ю.С. Баранов.

2. ВИЭВ, В.Н. Полякова.