"Временные методические указания по определению регулятора роста растений ЭБФ-5 в воде, растительном материале методом тонкослойной хроматографии" // Технорма.RU

Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

21 ноября 1985 г. N 4031-85

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РЕГУЛЯТОРА РОСТА РАСТЕНИЙ ЭБФ-5 В ВОДЕ,

РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Краткая характеристика препарата

ЭБФ-5 - ди(бета-хлорэтил)-бета-[1-(2-бензилбензимидазолил)]-этилфосфонат.

OCH CH Cl

│ 2 2

CH -CH -P-OCH CH Cl

│ 2 2 ││ 2 2

N ││

// \ / \ O ---

│ ││ C-CH --// \\

\\ / \ // 2 \ ___ /

N ---

Эмпирическая формула C H Cl N O P.

20 23 2 2 3

Молекулярная масса 441,1.

Химически чистый препарат представляет собой белое кристаллическое вещество с точкой плавления 179 - 181 °С, хорошо растворимое в ацетоне, этаноле, хлороформе, тетрагидрофуране, диметилсульфоксиде и малорастворимое в воде.

Лабораторный образец гигроскопичен и кроме основного продукта (97%) содержит небольшое количество воды (1,1%), исходного 2-бензилбензимидазола (0,3%) и продуктов дегидрохлорирования винифоса и целевого продукта (1,6%).

ЭБФ-5 рекомендуется для применения в качестве эффективного регулятора роста растений на посевах моркови, свеклы, томатов, огурцов.

2. Методика определения ЭБФ-5 в воде, растительном материале

Метод основан на извлечении ЭБФ-5 из пробы хлороформом, очистке экстракта в кислой среде, реэкстракции препарата в щелочной среде и хроматографировании в тонком слое силикагеля. Для дополнительной очистки применяют ступенчатую хроматографию. Первой подвижной фазой служит бензол, второй - смесь бензол - ацетон (1:1). Зоны локализации ЭБФ-5 обнаруживаются в виде ярко-розовых пятен после обработки пластинки 0,2% водным раствором эозина. Пределы обнаружения составляют 0,02 - 0,15 мг/кг (л). Аналитическая открываемость 93,1 - 85,6%.

2.1.2. Метрологическая характеристика методики (при n = 5, р = 0,95)

┌────────┬────────────────────────────────────────────────────────────────┐

│Анализи-│ Метрологические параметры │

│руемый ├───────┬──────────┬─────────┬───────────┬─────────┬─────────────┤

│объект │Предел │Диапазон │Среднее │Стандартное│Довери- │Относительное│

│ │обнару-│определя- │значение │отклонение,│тельный │ стандартное │

│ │жения, │емых кон- │% обнару-│ S │интервал │ отклонение, │

│ │мг/кг │центраций,│жения при│ │среднего │ S , % │

│ │(л) │мг/кг (л) │n = 5 │ │результа-│ 2 │

│ │ │ │ │ │та │ │

├────────┼───────┼──────────┼─────────┼───────────┼─────────┼─────────────┤

│Вода │0,02 │0,02 - 3,3│93,1 │1,13 │+/- 2,37 │1,21 │

│Томаты │0,15 │0,15 - 1,5│87,2 │1,95 │+/- 5,44 │2,23 │

│Огурцы │0,15 │0,15 - 1,5│88,0 │0,88 │+/- 2,47 │1,00 │

│Свекла │0,15 │0,15 - 1,5│85,6 │1,93 │+/- 5,37 │2,25 │

│Морковь │0,15 │0,15 - 1,5│86,0 │0,63 │+/- 1,75 │0,73 │

└────────┴───────┴──────────┴─────────┴───────────┴─────────┴─────────────┘

2.1.3. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии ХОП, а также близких по области применения таких регуляторов роста растений, как гидрел, дигидрел, кампозан, ГМК, ДЯК.

2.2. Реактивы и материалы

Хлороформ, х.ч., ГОСТ 215-74.

н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.

Бензол, х.ч., ГОСТ 5955-75.

Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79.

Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-76.

Азотнокислое серебро, х.ч., ГОСТ 1277-75.

Аммиак водный, ч.д.а., ГОСТ 3760-79.

Соляная кислота, х.ч., ГОСТ 3118-77, 0,5 н водный раствор.

Натр едкий, х.ч., ГОСТ 4328-77, 20% водный раствор.

Эозин Н индикатор, ч.д.а., ТУ 6-09-183-70, 0,1% водный раствор.

Пластинки "Силуфол" UV-254 (ЧССР).

Фильтры бумажные "синяя лента", ТУ 6-09-1678-77.

Стандартный раствор ЭБФ-5 в хлороформе с содержанием 100 мкг/мл.

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Ртутно-кварцевая лампа ПРК-2 или ПРК-4, ТУ 16-535-280-74.

Аппарат для встряхивания жидкости в лабораторной посуде, ТУ 64-1-1081-73.

Прибор для отгонки растворителя, ТУ 25-11-917-74.

Водоструйный вакуумный насос стеклянный, ГОСТ 10696-75.

Колба круглодонная короткогорлая со шлифом, ГОСТ 10394-72.

Воронки делительные на 100 мл, ГОСТ 8613-75.

Воронки химические, ГОСТ 8513-75.

Колбы конические на 250 мл, ГОСТ 10394-72.

Колбы мерные на 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Пипетки на 1, 5, 10 мл, ГОСТ 20292-74.

Микропипетки на 0,1 мл, ГОСТ 20292-74.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 10565-75.

Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Проявляющий реактив - аммиакат серебра

0,85 г азотнокислого серебра помещают в мерную колбу на 100 мл и растворяют в нескольких мл дважды дистиллированной воды, прибавляют 2,0 мл концентрированного аммиака. Содержимое колбы перемешивают, доводят уровень раствора до метки дистиллированной водой. Хранят раствор в темной склянке не более 3-х месяцев.

2.4.2. Проявляющий реактив - 0,1% раствор эозина

0,1 г эозина растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Хранят раствор не более 3-х месяцев.

2.5. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (МЗ СССР, ГСЭУ, Москва, 1980 г., N 2051-79 от 21.08.1979).

Отобранные пробы хранить в стеклянной или полиэтиленовой таре в сухом и защищенном от света месте.

2.6. Проведение определения

2.6.1. Экстракция и очистка

Вода. 100 мл воды помещают в делительную воронку и экстрагируют ЭБФ-5 хлороформом трижды порциями по 50 мл. Объединенные экстракты высушивают безводным сернокислым натрием и отгоняют растворитель на ротационном испарителе при температуре 55 - 60 °С. Остаток количественно наносят на хроматографическую пластинку.

Растительный материал (томаты, огурцы, свекла, морковь). 20 г измельченной пробы экстрагируют хлороформом на аппарате для встряхивания в течение 1 часа. Экстракт отфильтровывают через бумажный фильтр. Пробы трижды промывают хлороформом. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе досуха при температуре 55 - 60 °С. К сухому остатку прибавляют 10 - 15 мл 0,5 н соляной кислоты, тщательно ополаскивают колбу и переносят в делительную воронку. Колбу еще 2 раза промывают 10 - 15 мл 0,5 н соляной кислоты. Объединенный кислотный экстракт промывают дважды по 15 - 20 мл гексана. Гексановые экстракты отбрасывают, а раствор кислоты подщелачивают 20% раствором едкого натра до рН = 8 - 9 и экстрагируют ЭБФ-5 хлороформом трижды по 15 - 20 мл. Объединенный экстракт проводят через воронку с безводным сернокислым натрием, растворитель отгоняют при температуре 55 - 60 °С, остаток наносят на пластинку.

2.6.2. Хроматографирование

После отгонки растворителя пробы с помощью хлороформа количественно

наносят на пластинки "Силуфол" на расстоянии 1 см от нижнего края пластинки

(размеры пластинки 15 х 15 см). Хроматографирование проводят восходящим

способом. Сначала хроматографируют в бензоле. При этом ЭБФ-5 остается на

старте, а примеси, содержащиеся в пробе, продвигаются вверх. После

подсушивания пластинки на воздухе проводят вторичное хроматографирование в

смеси бензол - ацетон (1:1). После хроматографирования пластинку высушивают

и опрыскивают проявляющим реактивом - 0,1% раствором эозина. Зоны

локализации препарата обнаруживаются в виде темно-розовых пятен с величиной

R = 0,6 +/- 0,01.

Альтернативные условия хроматографирования: подвижная фаза - гексан -

ацетон (10:7), проявитель - водный раствор аммиаката серебра. Пластинку до

и после обработки проявляющим реактивом подвергают УФ-облучению в течение 1

часа до обработки и 5 - 10 минут после обработки. В этих условиях ЭБФ-5

проявляется в виде бурых пятен на светло-сером фоне с величиной

R = 0,45 +/- 0,01.

2.7. Обработка результатов анализа

Количественная оценка проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен проб и стандартного раствора.

Содержание ЭБФ-5 в анализируемой пробе определяют по следующей формуле:

Х = -,

где:

Х - содержание ЭБФ-5 в исследуемой пробе, мг/л или мг/кг;

А - количество ЭБФ-5, найденное путем сравнения со стандартами, мкг;

Р - масса или объем исследуемой пробы, г или л.

3. Требования техники безопасности

При работе с ЭБФ-5 необходимо выполнять все требования техники безопасности, необходимые при работе с ядовитыми и легковоспламеняющимися веществами.

4. Разработчики

1. Бунятян Юрий Андраникович - филиал ВНИИГИНТОКСа, г. Ереван.

2. Петросян Маргарита Суреновна - филиал ВНИИГИНТОКСа, г. Ереван.

3. Джагацпанян Сусанна Арутюновна - филиал ВНИИГИНТОКСа, г. Ереван.