"Методические указания по определению примицида в растительном материале и в почве с помощью тонкослойной и газожидкостной хроматографии" // Технорма.RU

Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

21 ноября 1985 г. N 4028-85

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПРИМИЦИДА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ И В ПОЧВЕ

С ПОМОЩЬЮ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Краткая характеристика препарата

1.1. Примицид, пиримифос-этил, ПП 211

Контактный инсектицид. Предложен для борьбы с обитающими в почве вредителями, в том числе с проволочниками на картофеле и кукурузе; мухами на луке, моркови и капусте; долгоносиками на сахарной свекле.

1.2. Активное вещество: 0-(2-диэтиламино-6-метилпиримидил-4)-0,0-диэтилтиофосфат.

1.3. Структурная формула:

S / 3

││ ---

(C H O) P -O-// \\N C H N PO S

2 5 2 \ ___ / 13 24 3 3

N ---

\ М.м. 333,4.

N(C H )

2 5 2

1.4. Технический продукт - бесцветная с желтым оттенком маслянистая жидкость. Растворимость в воде при 30 °С 1 мг/куб. м, смешивается со многими органическими растворителями. Устойчив в нейтральной среде, сравнительно быстро разрушается при нагревании с растворами щелочей и минеральных кислот. Выпускается в виде 30% с.п., 50-процентного э.к., 5 и 10-процентных гранул и 20-процентного порошка для обработки семян.

ЛД для крыс при оральном введении 140 - 200 мг/кг, при аппликации на

кожу 1000 - 2000 мг/кг. Токсичен для пчел и большинства других полезных

насекомых.

2. Методика определения примицида в растительном

материале и в почве хроматографией в тонком слое

и газожидкостной хроматографией

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении примицида из растительных проб

50-процентным водным ацетоном. Из почвы экстрагируют инсектицид смесью

ацетона с 0,05 н раствором CaCl в соотношении 1:1. Очистка экстрактов -

способом перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями.

Количественное определение проводят методами газожидкостной хроматографии и

хроматографией в тонком слое.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

ГЖХ ТСХ

Минимально детектируемое количество 1 мг 0,5 мкг

Нижний предел определения 0,001 мг/кг 0,1 мг/кг

Р - размах варьирования, %

в растениях 89 - 95 85 - 90

в почве 94 - 98 90 - 95

С - среднее значение определения, %

в растениях 32,2 87,5

в почве 95,8 92,5

S - стандартное отклонение, %

в растениях 4,56 3

в почве 2,16 3

Доверительный интервал среднего при

Р = 0,95 и n = 5, %

для растений 92,2 -/+ 12,6 87,5 +/- 8,3

для почвы 95,8 +/- 5,9 92,5 +/- 8,3

2.1.3. Избирательность метода

Другие фосфорорганические инсектициды определению не мешают.

2.2. Реактивы, растворы и материалы

Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.

Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-79.

Кальций хлористый, ч., ГОСТ 4161-77.

Натрий сернокислый, безводный, ч.д.а, ГОСТ 4166-79.

Уголь активированный марки Кад-молотый или ОУ-А.

Стекловата.

Хроматографические пластинки "Силуфол-UV-254", ЧССР.

Хроматон N-супер, пропитанный 5% SE-30 (0,125 - 0,160 мм), ЧССР.

Хроматон N-супер, пропитанный 5% XE-60 (0,125 - 0,160 мм), ЧССР.

Хроматон N-супер, пропитанный 5% OV-17 (0,125 - 0,160 мм), ЧССР.

Хроматон N-супер, пропитанный 2% ПЭГС (полиэтиленгликольсукцинат) (0,125 - 0,160 мм), ЧССР.

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Водород электролитический.

Сжатый воздух.

Проявляющие реагенты:

1. 0,5% раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане (ч., ТУ 6-09-05-63-74), после опрыскивания пластинки нагревают при 110 °С в течение 5 мин.

2. 2% раствор 4-(р-нитробензил)пиридина (ч., ТУ 6-09-15-93-74) в ацетоне, после нагревания хроматограммы при 110 °С в течение 5 мин. и вновь опрыскивают 10% раствором тетраэтиленпентамина (ч., ТУ 6-09-05-804-78) в ацетоне.

3. 0,05% раствор бромфенолового синего (ч.д.а., ТУ 6-09-3719-74) в 0,5% раствора азотнокислого серебра (х.ч., ГОСТ 1277-75), приготовленного на ацетоне. После проветривания хроматограммы и прогревания ее в термостате при 35 - 40 °С вновь опрыскивают 5% раствором уксусной кислоты (х.ч., ГОСТ 18290-72) или лимонной кислоты (х.ч., ГОСТ 3652-69).

Основной стандартный раствор примицида в ацетоне или в гексане - 100 мкг/куб. см.

Рабочие стандартные растворы готовят разбавлением основного раствора - 10 мкг/куб. см, 1 мкг/куб. см, 0,1 мкг/куб. см.

2.3. Приборы и аппаратура, посуда

Газовый хроматограф "Цвет-106".

Хроматографические колонки стеклянные длиной 1 м и внутренним диаметром 3 мм.

Ротационный вакуумный испаритель, ТУ 25-11-917-74.

Аппарат для встряхивания колб, ТУ 64-1-1081-73.

Холодильник бытовой.

Термостат.

Хроматоскоп (хемоскоп).

Хроматографическая камера, ГОСТ 10565-75.

Колбы конические со шлифами и пробирками на 100 и 250 куб. см, ГОСТ 10394-72.

Колбы круглодонные для отгонки растворителей, ГОСТ 17004-74.

Делительные воронки на 250 куб. см, ГОСТ 8613-75.

Воронки, ГОСТ 8613-75.

Колбы мерные на 100 куб. см, ГОСТ 1770-74.

Микропипетки 0,1 - 0,2 куб. см, ГОСТ 20292-74.

Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.

Опрыскиватель стеклянный, ГОСТ 19391-74.

Микрошприц МШ-10, ТУ 2.833.106.

Пробирки с притертыми пробками на 10 куб. см, ГОСТ 1770-74.

2.4. Подготовка к определению

Растительную пробу измельчают на кусочки 0,5 х 0,5 х 0,5 куб. см и отбирают среднюю пробу 25 г.

Почву естественной влажности или воздушно-сухую просеивают через сито и для анализа отбирают 10 г.

Отбор проб растений и почвы проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб с/х продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР 21 августа 1979 г. N 2051-79.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов

Анализируемые навески помещают в конические колбы емкостью 250 куб. см.

Растительные пробы экстрагируют трижды, заливая 50 куб. см смеси ацетон -

вода (1:1) и встряхивая в течение 30 мин. Экстракты отфильтровывают через

бумажный фильтр. Объединенные экстракты помещают на 1 час в холодильник,

после охлаждения фильтруют через стекловату. Далее экстракты в делительных

воронках экстрагируют трижды по 20 мл гексаном. Гексановый слой сливают в

конические колбы с безводным сернокислым натрием (30 - 50 г) с добавлением

незначительного количества активированного угля (20 - 50 мг) для очистки

экстракта. Интенсивно помешивают содержимое колбы и отфильтровывают через

бумажный фильтр в круглодонные колбы. Отгоняют растворитель до объема 1

куб. см под вакуумом на ротационном испарителе при температуре не более 40

°С. При необходимости экстракты подвергают дополнительной очистке. После

концентрирования под вакуумом до 1 куб. см остаток растворителя испаряют на

воздухе. К сухому остатку приливают 30 куб. см смеси ацетона с 0,05 н CaCl

(соотношение компонентов 1:1), пробу переносят в делительную воронку,

фильтруя через бумажный фильтр, колбу споласкивают еще 20-ю куб. см смеси

ацетона с хлористым кальцием. В воронку добавляют 30 куб. см гексана для

извлечения токсиканта. Гексановую фракцию отделяют, водосолеацетоновую

дважды промывают 20-ю куб. см гексана. Объединенный гексановый экстракт

фильтруют через слой безводного сернокислого натрия и концентрируют до 0,5

- 1,0 куб. см.

Почва. 10 г пробы экстрагируют трижды, заливая 50-ю куб. см смеси

ацетон - 0,05 н водный раствор CaCl (1:1) и встряхивая в течение 30 мин.

Экстракты отфильтровывают через бумажный фильтр в делительную воронку и экстрагируют трижды 20-ю куб. см гексана. Гексановый слой сливают в конические колбы на 100 куб. см с безводным сернокислым натрием (30 - 50 г) с добавлением незначительного количества активированного угля (20 - 50 мг) для очистки экстракта. Интенсивно помешивают содержимое колбы и отфильтровывают через бумажный фильтр в круглодонные колбы. Отгоняют растворитель до объема 1 куб. см под вакуумом на ротационном испарителе при температуре не более 40 °С.

2.5.2. Хроматография в тонком слое

Экстракт после определения ГЖХ доупаривают до 0,2 куб. см и наносят при помощи капиллярной пипетки на расстоянии 2 см от нижнего края хроматографической пластинки "Силуфол-UV-254". Если в пробе содержится много инсектицида, то рекомендуется брать часть пробы и наносить экстракт в 3 - 5 точек диаметром не более 0,5 см. Стенки колб тщательно смывают несколькими каплями гексана и также наносят в центр пятна. Справа и слева от пробы наносят стандартные растворы, содержащие 1, 5, 10, 20 мкг действующего вещества препарата в зависимости от количества препарата в пробе. Хроматографические пластинки ставят в камеру для хроматографирования со смесью растворителей гексан:ацетон в соотношении 4:1. Край пластинки должен быть погружен в смесь растворителей на 0,5 см. Когда фронт растворителя поднимается на высоту 10 см, пластинку вынимают, подсушивают на воздухе и обрабатывают одним из проявляющих реагентов (2.3). Необходимо отметить, что наиболее чувствительным проявителем является 2,6-дибром-N-хлорхинонимин, а также 4-(р-нитробензил)пиридин.

Пластинки "Силуфол-UV-254" можно смотреть под хроматоскопом без предварительной обработки проявителем.

R примицида в системе гексан - ацетон (4:1) составляет 0,6 +/- 0,05.

2.5.3. Определение методом газожидкостной хроматографии

После отгонки растворителя к сухому остатку добавляют 1 - 2 куб. см гексана, колбу закрывают пробкой и тщательно обмывают ее внутреннюю поверхность. Аликвотную часть пробы (1 - 5 мкл) вводят в испаритель хроматографа.

Условия хроматографирования приведены в таблице.

Таблица

УСЛОВИЯ ГАЗОЖИДКОСТНОГО ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ ПРИМИЦИДА <*>

--------------------------------

<*> Хроматограф "Цвет-106" с ТИД, скорость движения ленты самописца 0,2 см/мин.

┌─────────────────────────┬───────────┬───────────┬───────────┬───────────┐

│Насадка колонки │5% SЕ-30 на│5% ХЕ-60 на│5% OV-17 на│2% ПЭГС на │

│ │хроматоне │хроматоне │хроматоне │хроматоне │

│ │N-супер │N-супер │N-супер │N-супер │

│ │(0,125 - │(0,125 - │(0,125 - │(0,125 - │

│ │0,160 мм) │0,160 мм) │0,160 мм) │0,160 мм) │

│ │ │ │ │ │

│Длина колонки и внутрен- │100 х 3,0 │100 х 3,0 │100 х 3,0 │100 х 3,0 │

│ний диаметр, см х мм │ │ │ │ │

│ │ │ │ │ │

│ │ -10 │ -10 │ -10│ -10│

│Рабочая шкала │2 х 10 │2 х 10 │0,4 х 10 │0,4 х 10 │

│электрометра, А │ │ │ │ │

│ │ │ │ │ │

│Скорость потока азота, │27 │27 │27 │27 │

│мл/мин. │ │ │ │ │

│ │ │ │ │ │

│Скорость потока водорода,│16 │16 │16 │16 │

│мл/мин. │ │ │ │ │

│ │ │ │ │ │

│Скорость потока воздуха, │312 │312 │312 │312 │

│мл/мин. │ │ │ │ │

│ │ │ │ │ │

│Температура колонки, °С │205 │205 │230 │210 │

│ │ │ │ │ │

│Температура испарителя, │230 │230 │230 │230 │

│°С │ │ │ │ │

│ │ │ │ │ │

│Время удерживания │4 мин. │3 мин. │3 мин. │2 мин. │

│примицида │26 сек. │2 сек. │15 сек. │22 сек. │

└─────────────────────────┴───────────┴───────────┴───────────┴───────────┘

2.6. Обработка результатов анализа

Содержание примицида в исследуемом объекте в случае тонкослойной хроматографии вычисляют по формуле:

Х = -,

где:

Х - содержание препарата в пробе, мг/кг;

А - количество препарата, обнаруженное в пробе при сравнении со стандартом, мкг;

Р - навеска исследуемой пробы, г.

Содержание примицида в пробе в случае газожидкостной хроматографии определяют методом стандартов и рассчитывают по формуле:

S х Y х С х Y

2 1 1 3

Х = -----------------,

S х Y х Р

1 2

где:

Х - количество препарата в пробе, мг/кг;

С - количество препарата в стандартном растворе, мкг/куб. см;

S - площадь пика стандартного раствора, кв. мм;

S - площадь пика анализируемого раствора, кв. мм;

Y - объем стандартного раствора, введенный в хроматограф, куб. мм;

Y - объем анализируемого раствора, введенный в хроматограф, куб. мм;

Y - объем экстракта анализируемой пробы, куб. см;

Р - навеска пробы, г.

3. Техника безопасности

Соблюдаются обычные требования по технике безопасности, необходимые при работе с органическими растворителями, кислотами и щелочами.

4. Разработчики

Петрова Т.М., Хамнаева Е.И. - Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений, г. Ленинград.

5. Методические указания апробированы во ВНИИХСЗР (Новикова К.Ф.).