"Методические указания по определению актеллика и базудина в чае методами тонкослойной и газожидкостной хроматографии" // Технорма.RU

Утверждены

Минздравом СССР

22 мая 1985 г. N 3888-85

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АКТЕЛЛИКА И БАЗУДИНА В ЧАЕ

МЕТОДАМИ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Краткая характеристика препаратов. Актеллик - O-(2-

диэтиламино-6-метилпиримидил-4)-O,O-диметилтиофосфат. Брутто-

формула C H O N PS. Молекулярная масса 305,0. Общепринятое

11 20 3 3

название - пиримифос-метил. Химически чистое вещество актеллика -

жидкость светло-желтого цвета. Хорошо растворяется в большинстве

органических растворителей, слабо растворим в воде - 5 мг/л при

температуре 30 °C. Давление пара 0,013 Па. Разрушается в

сильнокислых и щелочных средах. ДСД актеллика 0,01 мг/кг, МДУ

актеллика в час 0,5 мг/кг.

Базудин - O-(2-изопропил-6-метилпиримидил-4)-O,O

диэтилтиофосфат. Брутто-формула C H O N PS. Молекулярная масса

12 21 3 2

304,36. Общепринятое название - диазинон. Действующее вещество

базудина - бесцветная маслянистая жидкость с т. кип. 89 °C при

-2

13,3 Па. Давление паров при 20 °C составляет 0,12 x 10 Па.

Летучесть 1,39 мг/куб. м при 20 °C. Инсектицид нестабилен в кислой

и щелочной среде. Растворимость в воде 40 мг/л, хорошо растворим

в большинстве органических растворителей.

Принцип метода. Метод основан на экстракции ФОП из чая водным раствором ацетона, последующем перераспределении препарата из водно-ацетоновой фракции в гексан и анализе содержания ФОП при помощи ГЖХ или ТСХ. В последнем случае необходима предварительная очистка экстракта на колонке с оксидом алюминия.

Метрологическая характеристика метода. Минимально детектируемое количество методом ГЖХ составляет: для актеллика - 0,5 - 1,0 нг, базудина - 0,1 нг. Нижний предел определения актеллика и базудина 0,1 мг/кг. Среднее значение определения (n = 10, p = 0,95) актеллика 89,2 +/- 8,02%; базудина 87,6 + 10,98%. Минимально детектируемое методом ТСХ количество актеллика и базудина 1 - 3 мкг.

Избирательность метода. Карбофос, протиофос и хостаквик определению не мешают.

Реактивы и растворы. Ацетон ч.д.а. Гексан х.ч. Бензол х.ч.

Сульфат натрия безводный ч.д.а. Хлорид натрия х.ч. Оксид

алюминия для хроматографии ч. I степени активности,

нейтральный. Пластинки "Силуфол" УФ . Хроматон N-AW-DMCS,

254

пропитанный 5% XE-60 (0,160 - 0,200 мм). Азот особой чистоты.

Водород электролитический. Сжатый воздух.

Проявляющие реагенты: N 1 - 0,2-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина ч. в гексане; N 2 - 2-процентный раствор 4-(п-нитробензил) пиридина ч. в ацетоне, 10-процентный раствор тетраэтиленпентамина ч. в ацетоне, 0,05 н водный раствор хлорида кальция.

Стандартные растворы актеллика и базудина в гексане - 1 мкг/мл для ГЖХ, 100 мкг/мл для ТСХ.

Приборы и посуда. Хроматограф "Цвет-106" или аналогичный прибор с ТИД. Аппарат для встряхивания колб. Испаритель ротационный вакуумный или аналогичный прибор для отгонки растворителей под вакуумом. Хроматоскоп. Колбы: конические со шлифами и пробками на 250 или 300 мл; круглодонные со шлифами на 100 мл; мерные на 100 мл. Воронки делительные на 500 мл. Колонки для адсорбционной хроматографии длиной 30 см с диаметром 15 мм. Камера хроматографическая. Опрыскиватель стеклянный. Пульверизаторы стеклянные. Пипетки на 0,1 и 1,0 мл. Цилиндры мерные на 50 и 100 мл. Микрошприц МШ-10М. Термостат. Колонки стеклянные для ГЖХ длиной 1 м с внутренним диаметром 3 мм.

Подготовка к анализу. Приготовление хроматографической колонки. Стеклянные хроматографические колонки заполняют хроматоном N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм), пропитанным 5% XE-60 по стандартной методике.

Построение градуировочного графика. Для количественного определения актеллика и базудина во введенной аликвоте используют метод абсолютной калибровки, который заключается в построении графической зависимости высоты (площади) хроматографического пика от содержания вещества в стандартной пробе. По оси ординат откладывают значения высот (площадей) хроматографических пиков в мм (кв. мм), а по оси абсцисс - абсолютное количество исследуемого вещества, соответствующее данному пику.

Градуировочный график необходимо строить в день газохроматографического анализа проб в тех же условиях, особенно при работе с ТИД.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Выделяют среднюю пробу чая массой 10 г. Из проб чая актеллик и базудин извлекают 75 - 100 мл смеси ацетона с водой (1:1). Экстрагируют при встряхивании 30 - 60 мин. После этого растительные экстракты помещают в холодильную камеру для вымораживания восков. Затем пробы фильтруют через бумажные фильтры. Далее проводят переэкстракцию актеллика и базудина из объединенного фильтрата в гексан, прибавляя последний порциями по 25 мл, каждый раз встряхивая в делительной воронке в течение 3 - 5 мин. Экстракцию повторяют три раза. Гексановые фракции высушивают фильтрованием через слой безводного сульфата натрия (20 - 25 г), объединяют и концентрируют до небольшого объема (1 - 0,5 мл) под вакуумом при температуре 40 °C.

Экстракты из проб чая нуждаются в дополнительной очистке, ее проводят на колонке длиной 30 см с внутренним диаметром 15 мм, заполненной последовательно сульфатом натрия (3 - 4 г), оксидом алюминия (4 - 5 г) и снова сульфатом натрия (1,5 - 2 г). Колонку предварительно промывают бензолом (30 - 40 мл). Актеллик и базудин элюируют бензолом (20 мл). Растворитель отгоняют под вакуумом до небольшого объема. Количество инсектицида в пробе определяют хроматографическими методами.

При ГЖХ очистку экстрактов чая можно не проводить.

Хроматографирование в тонком слое. Пробу с помощью капилляра

или микропипетки наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол"

УФ . Параллельно на пластинку наносят серию стандартных

254

растворов с содержанием 3; 5 и 10 мкг действующего вещества

актеллика или базудина. Хроматографируют в системе гексан - ацетон

(4:1), проветривают. Для обнаружения определяемых соединений

пластины просматривают в УФ-свете хроматоскопа и обрабатывают либо

0,2-процентным раствором 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане

(затем нагревают в течение 30 с в термостате при температуре 100 -

120 °C), либо 2-процентным раствором 4-(п-нитробензил)-пиридина с

последующим нагреванием при 100 - 120 °C и обработкой

10-процентным раствором тетраэтиленпентамина.

Значение R актеллика 0,50 +/- 0,01, R базудина в указанной

f f

системе растворителей - 0,38 +/- 0,01.

Газожидкостное хроматографирование. С помощью микрошприца

аликвотную часть исследуемого раствора (1 - 2 мкг) вводят в

испаритель хроматографа с ТИД. Скорость потока газа-носителя

(азота) 25 мл/мин., водорода - 15 - 18 мл/мин., воздуха - 170

мл/мин. Температура (°C): термостата колонок - 190, детектора и

-10

испарителя - 220. Рабочая шкала электрометра 2,5 x 10 А.

Скорость движения ленты самописца 1 см/мин. Время удерживания

актеллика в данных условиях - 2 мин. 51 с, базудина - 54 с.

Обработка результатов анализа. При использовании метода ТСХ

содержание пестицида в исследуемом объекте (X, мг/кг) вычисляют по

формуле:

X = -,

где:

A - количество препаратов, найденное по хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;

P - навеска исследуемой пробы, г.

Количественное определение препарата в анализируемой пробе при использовании метода ГЖХ проводят с помощью градуировочного графика. Содержание препарата в анализируемой пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

X = ---,

V P

где:

V - общий объем раствора, мл;

V - объем аликвоты, введенный в хроматограф, мкл;

C - количество препарата в аликвоте, определенное по

градуировочному графику, нг;

P - навеска анализируемого вещества, г.

Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит "зашкаливание", готовят более разбавленные растворы, добавляя к конечному раствору известное количество гексана или разбавляя отобранную аликвоту до определенного объема.

Требования безопасности. Соблюдают общепринятые правила безопасности при работе с горючими растворителями и ФОП.