"Методические указания по определению дифоса (абата) в продуктах растениеводства методом тонкослойной хроматографии" // Технорма.RU

Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

22 мая 1985 г. N 3886-85

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИФОСА (АБАТА) В ПРОДУКТАХ

РАСТЕНИЕВОДСТВА МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

(Дополнение к N 1350-75 от 22.09.75)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Характеристика анализируемого пестицида

Бис(0,0-Диметилфосфорил-0-фенил-4)сульфид.

Структурная формула:

S S

││ --- --- ││

(CH O) P-O-// \\-S-// \\-O-P-(OCH ) .

3 2 \ ___ / \ ___ / 3 2

--- ---

Эмпирическая формула: C H O P S .

16 10 6 2 3

Молекулярная масса - 466.

Синонимы: абат, абат 500 Е, абат 4 Е, OMS-786.

Химически чистое вещество - белые кристаллы. Технический препарат - коричневая жидкость, содержащая 90 - 95% действующего вещества. Препарат нерастворим в воде, хорошо растворяется в органических растворителях (ацетоне, гексане, хлороформе, эфире, ацетонитриле). Устойчив к воздействиям слабых щелочей (при рН 8 и температуре 20 °С не гидролизуется в течение нескольких недель). Выпускается в форме 30% к.э. Зарубежный аналог дифоса - абат выпускается в виде 50% к.э. и 25% о.п.

Относится к малотоксичным соединениям. ЛД при введении препарата в

желудок белых крыс составляет 1360 - 2300 мг/кг, для белых мышей - 460

мг/кг. Проникает через кожу. Для кроликов при накожном нанесении ЛД - 970

- 1930 мг/кг. Раздражающее действие выражено слабо. Коэффициент кумуляции

- 5,7. Является инсектицидом контактно-кишечного действия. Эффективен в

борьбе с личинками комаров, мух, вредными насекомыми домашних животных, при

защите сельскохозяйственных культур от клопов, трипсов и других насекомых.

МДУ в сахарной свекле, овощах, цитрусовых и хлопковом масле - 0,3 мг/кг, в мясе, яйце - 1 мг/кг, в молоке - не допускается. ПДК в кормах для сельскохозяйственных животных на откорме - 0,25 мг/кг, лактирующих животных - не допускается.

2. Методика определения дифоса в продуктах

растениеводства методом трехслойной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на экстракции препарата из анализируемого объекта ацетоном, осаждении коэкстрактивных веществ из водно-ацетонового раствора уксуснокислым свинцом на холоде, переэкстрагировании дифоса в гексан, дополнительной очистке экстракта на колонке с силикагелем АСК, элюировании пестицида смесью бензола с гексаном, хроматографировании на пластинках "Силуфол" и проявлении азотнокислым серебром с бромфеноловым синим.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

- Диапазон определяемых концентраций пестицида в анализируемой пробе - 0,2 - 25 мкг.

- Предел обнаружения - 0,2 мкг в пробе или 0,02 мг/кг.

- Размах варьирования - 70 - 90%.

- Среднее значение определения стандартных количеств - 79,8%.

- Стандартное отклонение - 11,6.

- Относительное стандартное отклонение - 0,27.

- Доверительный интервал среднего при Р = 0,95 и н = 10 - 79,8 +/- 1,49.

2.2. Реактивы

Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79.

Бензол, ч.д.а., ГОСТ 5955-81.

Бромфеноловый синий, ч.д.а., ТУ 6-09-1058-76.

н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.

Кислота уксусная ледяная, х.ч., ГОСТ 18290-72.

Кислота лимонная, ч.д.а., ГОСТ 3652-74.

Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-76.

Натр едкий, х.ч., ГОСТ 4328-77.

Свинец уксуснокислый или свинец уксуснокислый основной, ч.д.а., ТУ 6-09-4140-75.

Серебро азотнокислое, ч., ГОСТ 1277-75.

Силикагель АСК, ГОСТ 3956-76.

Эфир диэтиловый, ГОСТ 6262-79.

Дифос, стандартный раствор в ацетоне, содержащий 100 мкг/мл препарата.

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Аппарат для встряхивания АВУ-1 или аналогичный, ТУ 64-1-1081-73.

Весы технические.

Весы торсионные - тип ВТ, ТУ 64-1-990-77.

Камера хроматографическая, ГОСТ 10565-75.

Камера для опрыскивания хроматограмм, ТУ 25-11-430-70.

Колонки стеклянные, внутренний диаметр 7 - 9 мм.

Опрыскиватели стеклянные, ГОСТ 10391-74.

Пластинки "Силуфол" производства ЧССР.

Посуда химическая по ГОСТ 23932-79 (колбы конические с притертыми пробками на 100 мл, воронки делительные на 200 мл, воронки химические диаметром 5 см, пробирки мерные на 10 мл, цилиндры на 10, 50 и 100 мл, микропипетки, стаканы химические).

Центрифуга лабораторная стационарная ЦЛС-3 или аналогичная (объем стаканов 80 - 100 мл).

Шкаф вытяжной.

Чашки фарфоровые для выпаривания диам. 5 - 7 см, ГОСТ 9147-73.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Приготовление 20% водного раствора уксуснокислого свинца: 20 г уксуснокислого свинца растворяют в 80 мл дистиллированной воды. При использовании основного уксуснокислого свинца 20 г его растворяют при подогревании в 80 мл 5% уксусной кислоты и рН раствора доводят едким натрием до 5,4 - 5,6. Хранят в закрытой посуде.

2.4.2. Приготовление 10% водного раствора уксусной кислоты: в колбу к 10 мл ледяной уксусной кислоты добавляют 90 мл дистиллированной воды.

2.4.3. Приготовление проявляющих реактивов

Реактив N 1 - 25 мг бромфенолового синего растворяют в 5 мл ацетона и объем доводят до 50 мл 0,25% раствором азотнокислого серебра (0,125 г азотнокислого серебра растворяют в 15 мл дистиллированной воды и добавляют 35 мл ацетона). Хранят в закрытой посуде из темного стекла при температуре +4 - 6 °С в течение месяца.

Реактив N 2 - 2% раствор лимонной кислоты: 2 г лимонной кислоты растворяют в 98 мл дистиллированной воды. Хранят в закрытой посуде при температуре +4 - 6 °С в течение 5 - 6 дней.

2.4.4. Подготовка колонки для очистки экстрактов анализируемых проб: в нижний конец стеклянной колонки помещают ватный тампон, затем насыпают последовательно натрий сернокислый безводный слоем 1 см, силикагель АСК 5 - 6 см и опять натрий сернокислый безводный 1 см.

2.4.5. Отбор проб производят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79 за N 2051-79.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов.

Навеску измельченной растительной массы, корнеклубнеплодов по 10 г помещают в колбу с притертой пробкой, заливают 30 мл ацетона, тщательно перемешивают и экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 1 часа. Навеску комбикорма в 10 г экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 1 часа. Навеску комбикорма в 10 г экстрагируют ацетоном дважды порциями по 30 мл, встряхивая по 30 минут.

Ацетоновый экстракт отфильтровывают в чистую колбу через воронку с ватным фильтром. Пробы промывают 10 мл ацетона и пропускают через тот же фильтр. К объединенному экстракту добавляют 20 мл дистиллированной воды, 1 мл уксуснокислого свинца (при исследовании комбикорма 40 мл воды) и помещают в испаритель бытового холодильника на 1 час (экстракты комбикорма лучше оставлять в испарителе холодильника на ночь). Охлажденные пробы центрифугируют при 3000 оборотах в минуту в течение 3 минут. Надосадочную жидкость сливают в делительную воронку (при анализе комбикорма после центрифугирования надосадочную жидкость дополнительно фильтруют через воронку с фильтром). В делительную воронку добавляют 10 мл 10% раствора уксусной кислоты и 60 мл дистиллированной воды (при анализе комбикорма 120 мл дистиллированной воды). Затем дифос реэкстрагируют из этой смеси гексаном трижды, используя по 15 мл экстрагента. При плохом разделении слоев в связи с образованием эмульсии добавляют 5 мл насыщенного раствора сернокислого натрия. Объединенный гексановый экстракт сушат над безводным сернокислым натрием. Концентрирование гексановых экстрактов проводят в вытяжном шкафу при комнатной температуре до 1 - 2 мл и пропускают для доочистки через колонку с силикагелем АСК. Выпаривательные чашки ополаскивают 2 - 3 раза 1 - 2 мл гексана и сливают в ту же колонку. Дифос элюируют 25 - 30 мл смеси бензол - гексан в соотношении 3:1. Затем бензол-гексановые экстракты концентрируют в сушильном шкафу при комнатной температуре до объема 0,1 - 0,2 мл.

2.5.2. Хроматографирование

Конечный экстракт наносят на пластинку "Силуфол" на расстоянии 1,5 см от ее нижнего края. Слева и справа наносят стандартные растворы с известным количеством дифоса. Диаметр нанесенного пятна не должен превышать 0,5 см.

Пластинку помещают в камеру со смесью диэтилового эфира и н-гексана в соотношении 1:2. После того как фронт растворителя поднимется на высоту 10 см, пластинку вынимают из камеры и оставляют на воздухе до удаления растворителя.

2.5.3. Проявление

После испарения подвижных растворителей пластинку опрыскивают

бромфеноловым синим с азотнокислым серебром и оставляют на воздухе для

подсыхания. Затем пластинку обрабатывают 2% водным раствором лимонной

кислоты. Дифос проявляется в виде синих пятен на лимонно-желтом фоне.

Величина R составляет 0,32.

2.6. Обработка результатов

Количество дифоса в анализируемом объекте определяют путем сравнения площади и интенсивности окраски пятна пробы и стандартных растворов препарата с использованием формулы:

А x 100

Х = -------,

М x К

где:

Х - количество препарата в исследуемом материале, мг/кг, мг/л;

А - количество препарата, обнаруженное на пластинке, мкг;

М - масса исследуемой пробы, г или мл;

100

--- - поправка с учетом потерь пестицида в процессе анализа, где

К - процент определения препарата = 80%.

3. Требование безопасности

Соблюдаются требования безопасности, рекомендуемые при работе с химическими реактивами и фосфорорганическими пестицидами.

4. Разработчики

Старшие научные сотрудники - Малинин О.А., доктор ветеринарных наук, Шуляк В.Д., кандидат биологических наук, Ярошенко В.И., кандидат ветеринарных наук, Зайцева Л.Д., кандидат ветеринарных наук, старший ветврач Ярошенко С.С.

Лаборатория фармакологии с токсикологией УНИИЭВ, г. Харьков.