Утверждены

Минздравом СССР

22 мая 1985 г. N 3884-85

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИЛОРА В МЕДЕ

МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

    Краткая     характеристика      препарата.   Дилор (3а,4,7,7а-

тетрагидро-4,7-метано-2,4,5,6,7,8,8-гептахлориндан) имеет  брутто-

формулу   C  H Cl .   Молекулярная   масса   375,34.  Общепринятое

           10 7  7

название -  дигидрогептахлор.  Кристаллическое вещество  кремового

цвета  со  слабым  запахом,  т. пл. 135 - 137 °C.  Плохо растворим

в  воде  (при 21 °C  0,014 мг/л),  но хорошо растворяется почти во

всех органических растворителях.

Разрешен для применения против колорадского жука на картофеле, свекловичного долгоносика на сахарной свекле, листовой филлоксеры на виноградной лозе, а также против других вредителей растений.

Допустимая суточная доза (ДСД) 0,02 мг/кг.

    Принцип  метода. Метод основан на извлечении дилора из водного

раствора  меда ацетоном с последующим перераспределением в гексан,

упаривании  экстракта,  очистке  на  колонке  с оксидом алюминия и

определении хроматографией на пластинках "Силуфол" УФ   .

                                                     254

Количество препарата определяют, сравнивая интенсивность окраски и площадь пятен пробы и стандарта.

Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций 0,5 - 20 мкг пестицида в анализируемой пробе. Предел обнаружения 0,5 мкг или 0,05 мг/кг. Среднее значение определения стандартных количеств дилора 94,1%. Стандартное отклонение 3,54%. Относительное стандартное отклонение 0,037. Доверительный интервал среднего при p = 0,95 и n = 9 +/- 2,7%.

Избирательность метода. Метод специфичен. Другие хлорорганические пестициды определению не мешают.

Реактивы и растворы. Оксид алюминия II степени активности, просеянный сквозь сито 250 меш и задержанный на сите 100 меш. Ацетон ч.д.а. Гексан х.ч. Сульфат натрия безводный ч.д.а. Ацетат свинца. Нитрат серебра ч.д.а. Спирт этиловый 96-процентный. Эфир диэтиловый х.ч. Дилор х.ч.

    Приборы   и   посуда.   Аппарат  для  встряхивания  АВУ-1  или

аналогичный.   Баня   водяная.   Весы   торсионные   ВТ.   Воронки

делительные.  Камеры  хроматографические.  Камера для опрыскивания

хроматограмм.  Колонки  хроматографические стеклянные с внутренним

диаметром   8   -   9   мм.   Пипетки   на  5  мл.  Пластинки  для

хроматографирования  "Силуфол"  УФ   . Посуда химическая (колбы на

                                  254

200   мл,   микропипетки,   пипетки,   цилиндры   мерные,  стаканы

химические, пробирки). Пульверизаторы стеклянные. Чашки фарфоровые

для выпаривания. Шкаф сушильный.

Подготовка к определению. Приготовление стандартного раствора дилора: 10 мг препарата х.ч. или 12,5 мг 80-процентного смачивающегося порошка растворяют в 100 мл гексана. Содержание пестицида составляет 100 мкг в 1 мл. Хранят в холодильнике в герметично закрытой посуде.

Приготовление проявляющего реагента. 0,5-процентный раствор нитрата серебра в этаноле: 0,5 г нитрата серебра растворяют в 2 - 3 мл дистиллированной воды и доводят 96-процентным этиловым спиртом до 100 мл. Хранят в герметично закрытой посуде в защищенном от света месте. Пригоден для анализа в течение 1 мес.

Приготовление хроматографических колонок. В качестве хроматографических колонок используют пипетки на 5 мл с внутренним диаметром 8 - 9 мм. Для этого в узкой градуированной части отрезают кусочек пипетки (отрезок 5 - 6 см), а в узкий конец оставшейся пипетки вставляют ватный тампон и через воронку насыпают последовательно слой безводного сульфата натрия, оксида алюминия II степени активности и опять сульфата натрия. Высота слоя оксида алюминия - 2 см, сульфата натрия - по 1 см. Колонку фиксируют в штативе. Готовят ее обычно перед использованием.

    Приготовление  хроматографических  пластинок  "Силуфол" УФ   .

                                                              254

Пластинку  помещают в камеру с водой, после прохождения воды через

всю  пластинку  ее  вынимают и 5 - 10 мин. выдерживают в сушильном

шкафу   при   температуре   65  -  70  °C.  Пластинки  могут  быть

использованы  непосредственно  после приготовления или через 1 - 2

сут.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. В колбу отвешивают 10 г меда, помешивая стеклянной палочкой, растворяют в 10 мл дистиллированной воды. Из водного раствора меда препарат экстрагируют 30 мл ацетона, встряхивая пробу в течение 15 мин. Затем содержимое колбы переносят в делительную воронку. После разделения слоев нижний (водный раствор меда) сливают в колбу и повторно экстрагируют 10 - 15 мл ацетона, встряхивая колбу 10 мин. С помощью делительной воронки отделяют ацетоновый экстракт и объединяют его с первой порцией ацетона. Затем объединенный ацетоновый экстракт переносят в делительную воронку, добавляют 60 мл дистиллированной воды и 15 мл гексана и встряхивают в течение 2 мин. После разделения слоев нижний (водно-ацетоновый экстракт) сливают в чистую колбу, а верхний (гексановый) - в чистый химический стакан. Водно-ацетоновый экстракт переносят в ту же делительную воронку и дилор повторно экстрагируют 10 мл гексана. Гексановые экстракты объединяют в делительной воронке, промывают 1 - 2 раза дистиллированной водой порциями по 50 мл, затем сушат 5 - 10 г безводного сульфата натрия в течение 15 - 20 мин. и отгоняют в фарфоровой чашке при температуре водяной бани 40 - 45 °C до объема 2 - 3 мл. Полученный концентрат (2 - 3 мл) переносят в хроматографическую колонку, предварительно промытую 3 мл смеси гексана с эфиром (10:1), и дилор элюируют еще 3 мл этой же смеси. Элюат концентрируют под вытяжкой при комнатной температуре до объема 0,4 - 0,5 мл и переносят в мерную пробирку.

    Тонкослойная  хроматография.  Очищенный и упаренный гексановый

экстракт   с  помощью  микрошприца  или  микропипетки  наносят  на

хроматографическую  пластинку "Силуфол" УФ    на расстоянии 1,5 см

                                          254

от ее нижнего края в одну точку. Диаметр пятна не должен превышать

5  -  6  мм.  Рядом с пробой наносят известные количества дилора в

гексане (стандарты). Затем пластинку помещают в хроматографическую

камеру  с  гексаном. При подъеме подвижного растворителя на высоту

10  см  от  линии  старта  ее  вынимают из камеры. После испарения

гексана  пластинку  опрыскивают  0,5-процентным  раствором нитрата

серебра  в  этаноле  и сразу же помещают под лампу ПРК-4 на 5 - 10

мин. в зависимости от  концентрации  препарата.  Для  опрыскивания

одной пластинки требуется 2 - 3 мл проявляющего реагента.

    Дилор  проявляется  в  виде  темно-серых  пятен на белом фоне.

Величина R  дилора составляет 0,45 - 0,48.

          f

Обработка результатов анализа. Количество дилора в меде (X, мг/кг) определяют путем сравнения интенсивности окраски и площадей пятен пробы и стандартных растворов препарата и рассчитывают по формуле:

                                 AS

                                   2

                             X = ---,

                                 S P

                                  1

    где:

    A  - содержание препарата в стандартном растворе, наносимом на

пластинку, мкг;

    S  - площадь пятна стандартного раствора, кв. мм;

     1

    S  - площадь пятна пробы, кв. мм;

     2

P - масса исследуемой пробы меда, г.

Для более точного определения количества дилора в меде проводят два параллельных исследования проб. Рядом с опытной пробой первой повторности на пластинку наносят 2 и 8 мкг дилора в гексане. При определении содержания дилора во второй повторности пробы рядом с ней на пластинку наносят количества препарата в гексане, наиболее близкие к выявленному в первой повторности. Получив результаты, проводят расчет по той же формуле.

Требования безопасности. Соблюдают обычные правила безопасности, рекомендуемые для работы с химическими реактивами.