Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

12 апреля 1985 г. N 3254-85

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ

ХРОМАТОГРАФИИ АНАЛОГА ЮВЕНИЛЬНОГО ГОРМОНА П-ХЛОРФЕНИЛОВОГО

ЭФИРА ГЕРАНИОЛА В ЗЕРНЕ ПШЕНИЦЫ, ПОЧВЕ, ВОДЕ

И ЗЕЛЕНЫХ ЛИСТЬЯХ РАСТЕНИЙ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Краткая характеристика препарата

п-Хлорфениловый эфир гераниола-1-(4-хлорфенокси)-3,7-диметил-2,6-октадиен.

                                    --

                                  //  \\

    CH -CH=CH -CH -CH -C=CH-CH -O-\ __ /-Cl                     C  H  ClO

      3 │    2   2   2 │      2     --                           16 21

        CH             CH

          3              3                                      М.м. 264,5.

                                                  20

    Желтоватая  жидкость   со  слабым  запахом,  п   = 1,5291,  температура

                                                  Д

кипения при 1  мм рт. ст. 155 °С, плохо  растворим   в   воде, растворим  в

органических  растворителях,   стабилен   в   нейтральной  среде. ЛД    для

                                                                    50

крыс  -  более  5000  мг/кг.  Рекомендуется   использовать   для  борьбы  с

вредителями овощных и оранжерейных культур, зерна.

2. Методика определения п-хлорфенилового эфира гераниола

в зерне пшеницы, почве, воде и зеленых листьях растений

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении п-хлорфенилового эфира гераниола органическим растворителем, очистке экстрактов методом препаративной хроматографии на окиси алюминия, идентификации методом тонкослойной хроматографии и количественном определении методом газожидкостной хроматографии с пламенно-ионизационным детектором на неподвижных фазах SE-30 и XE-60.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Диапазон определяемых концентраций 0,002 - 5,0 мг/кг. В таблицах 1 и 2 приведены средние значения определений, стандартное отклонение и доверительный интервал для различных концентраций.

Таблица 1

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ТСХ МЕТОДА

ОБНАРУЖЕНИЯ П-ХЛОРФЕНИЛОВОГО ЭФИРА ГЕРАНИОЛА

В ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ (ДЛЯ n = 4)

┌────────┬──────────────┬─────────┬───────────┬─────────────┬─────────────┐

│Анализи-│   Диапазон   │Размах   │  Среднее  │Относительное│Доверительный│

│руемый  │  задаваемых  │варьиро- │ значение  │ стандартное │интервал в % │

│объект  │концентраций, │вания в %│определения│ отклонение  │при Р = 0,95 │

│        │    мг/кг     │         │    в %    │     в %     │             │

├────────┼──────────────┼─────────┼───────────┼─────────────┼─────────────┤

│Зерно   │0,10 - 2,87   │83 - 91  │87,1       │1,2          │3,2          │

│        │            -3│         │           │             │             │

│Вода    │(2 - 5) х 10  │72 - 99  │88,2       │5,2          │14,0         │

│Почва   │0,05 - 1,00   │75 - 96  │86,4       │5,2          │14,0         │

│Листья  │0,24 - 5,00   │68 - 86  │74,3       │8,5          │13,4         │

└────────┴──────────────┴─────────┴───────────┴─────────────┴─────────────┘

Таблица 2

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ГЖХ МЕТОДА КОЛИЧЕСТВЕННОГО

ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛОВОГО П-ХЛОРФЕНИЛОВОГО ЭФИРА ГЕРАНИОЛА

В ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

┌───────┬────────────┬────────────┬─────────────┬─────────────┬───────────┐

│Объект │  Задано,   │   Число    │ Обнаружено  │ Стандартное │  Доверит. │

│       │   мг/кг    │параллельных│   в % при   │отклонение, %│интервал, %│

│       │            │определений │  Р = 0,95   │             │           │

├───────┼────────────┼────────────┼─────────────┼─────────────┼───────────┤

│Зерно  │2,876       │4           │71,6 +/- 4,4 │2,8          │4,4        │

│       │2,014       │3           │73,9 +/- 3,8 │1,6          │3,8        │

│       │0,096       │3           │71,5 +/- 15,2│6,1          │15,2       │

│       │          -3│            │             │             │           │

│Вода   │5,03 х 10   │3           │93,4 +/- 12,8│5,2          │12,8       │

│       │          -3│            │             │             │           │

│       │2,02 х 10   │4           │68,7 +/- 4,8 │3,0          │4,8        │

│Почва  │1,00        │5           │75,3 +/- 3,6 │2,9          │3,6        │

│       │0,048       │3           │77,2 +/- 5,9 │2,4          │5,9        │

│Листья │5,00        │4           │76,8 +/- 7,4 │4,7          │7,4        │

│       │0,24        │4           │76,2 +/- 12,7│8,0          │12,7       │

└───────┴────────────┴────────────┴─────────────┴─────────────┴───────────┘

2.1.3. Избирательность метода в присутствии пестицидов, близких по химическому строению и области применения

Близким по строению и области применения является р-бромфениловый эфир гераниола, однако в системах гексан - этилацетат (9:1) и гексан - ацетон (4:1) они четко разделяются. Фосфорорганические пестициды не мешают определению п-хлорфенилового эфира гераниола.

2.2. Реактивы и материалы

Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.

Циклогексан, ч., ТУ 6-09-4357-77.

Диэтиловый эфир, для наркоза.

Натрий сернокислый б/в, х.ч., ГОСТ 4166-81.

Алюминия окись для хроматографии II ст. активности, ТУ 6-09-3916-83.

Алюминия окись II ст. акт. по Брокману, пр-во ВНР "Реахим".

Йод кристаллический.

Хроматон N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30.

Хроматон N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм) с 5% XE-60.

Стандартный раствор п-хлорфенилового эфира гераниола в гексане - 100 мкг/мл и 10 мкг/мл.

2.3. Приборы и посуда

Хроматограф серии "Цвет" с пламенно-ионизационным детектором.

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75.

Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.

Колбы конические емк. 250 мл, ГОСТ 10394-72.

Колбы круглодонные емк. 500, 250, 100 мл, ГОСТ 10394-72.

Фильтр Шотта N 3.

Воронка делительная емк. 2 л, ГОСТ 8613-75.

Воронки химические, ГОСТ 8613-75.

Пипетки 1 - 10 мл, ГОСТ 20292-74.

Микропипетки 0,1 - 0,2 мл, ГОСТ 1770-74.

Стеклянные пластины для ТСХ размером 8 х 16 мм.

Эксикатор для проявления пластин в парах йода.

Сосуды для ТСХ объемом не менее 1 л с крышками.

Сосуды для препаративной ТСХ (кристаллизаторы с крышками).

Микрошприц емк. 10 мкл, МШ, ТУ 5Е.2.833.024.

2.4. Отбор проб и подготовка к определению

2.4.1. Отбор проб

Отбор проб производят в соответствии с Унифицированными правилами отбора сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды, утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979, N 2051-79.

Для анализа используют средние пробы измельченной и просеянной почвы массой 50 г, воды объемом 1 л, зерна пшеницы 50 г, зеленых листьев растений - 10 г.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция, очистка экстракта

Почва. 50 г почвы помещают в коническую колбу, заливают 150 мл диэтилового эфира и встряхивают 1 час. Раствор фильтруют через слой сульфата натрия б/в. Повторяют экстракцию дважды с 70 мл растворителя в течение 15 минут. Объединенные экстракты концентрируют на ротационном вакуумном испарителе до 1 - 2 мл при температуре 30°. Остаток количественно переносят на пластину с незакрепленным слоем окиси алюминия II ст. активности по Брокману. Толщина слоя - 2 мм. Вещество элюируют циклогексаном в сосуде для препаративной ТСХ, размещая пластину под углом 7 - 10°. Зону, соответствующую п-хлорфениловому эфиру (по сопоставлению со стандартом, который обнаруживают в аналогичных условиях при проявлении в парах йода), количественно переносят на фильтр Шотта N 3 и промывают подогретым до 40 - 50° гексаном. Фильтрат (очищенный экстракт) при необходимости концентрируют на ротационном испарителе и анализируют методами ТСХ и ГЖХ.

Вода. Пробу воды объемом 1 л помещают в делительную воронку и трижды экстрагируют гексаном порциями 150, 80 и 80 мл по 2 минуты. Органический слой отделяют, сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют при температуре не выше 40° и далее очищают и анализируют, как описано выше.

Зерно. 50 г зерна помещают в коническую колбу и экстрагируют гексаном трижды, используя последовательно 70, 30 и 30 мл растворителя в течение 60, 3 и 3 минут. Объединенный экстракт очищают и анализируют, как описано выше.

Зеленые листья растений. Навеску 10 г измельченного растительного материала помещают в коническую колбу и трижды экстрагируют гексаном порциями по 70 мл в течение 40, 10 и 10 минут. Объединенный растительный экстракт очищают и анализируют, как описано выше.

2.5.2. Идентификация и количественное определение п-хлорфенилового эфира гераниола

2.5.2.1. Метод тонкослойной хроматографии

    Для качественной идентификации п-хлорфенилового эфира гераниола в воде,

почве,   зерне   пшеницы   и  зеленых  листьях  растений  методом  ТСХ  см.

"Методические  указания  по  определению  остаточных  количеств   некоторых

аналогов ювенильного гормона: алтосида, алтозара  и р-бромфенилового  эфира

гераниола  в  растениях   картофеля  и   почве   методами   тонкослойной  и

газожидкостной   хроматографии"   (часть  XIII, 1983 г.).   Нижний   предел

обнаружения  п-хлорфенилового эфира гераниола методом ТСХ - 2 мкг или 0,002

мг/л  для  воды, 0,04 мг/кг - для почвы и проб растительного происхождения.

В таблице 3  приведены  значения  R   п-хлорфенилового  эфира  гераниола  в

                                   f

некоторых системах подвижных растворителей.

Таблица 3

               ЗНАЧЕНИЯ R  П-ХЛОРФЕНИЛОВОГО ЭФИРА ГЕРАНИОЛА

                         f

                       В НЕКОТОРЫХ СИСТЕМАХ (24 °С)

┌───────────────────────────────────┬────────────────────────────┐

│              Элюэнт               │             R              │

│                                   │              f             │

│                                   ├────────────┬───────────────┤

│                                   │на пластинах│на пластинах из│

│                                   │  Силуфол   │окиси алюминия │

├───────────────────────────────────┼────────────┼───────────────┤

│Циклогексан                        │0,10        │0,50           │

│Гексан - этилацетат, 4:1           │0,78        │-              │

│Гексан - этилацетат, 9:1           │0,57        │-              │

│Гексан - диэтиловый эфир, 9:1      │0,75        │0,90           │

└───────────────────────────────────┴────────────┴───────────────┘

2.5.2.2. Метод газожидкостной хроматографии

Носитель - Хроматон N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм).

Неподвижная фаза - 5% XE-60 либо 5% SE-30.

Расход азота - 60 мл/мин. - 40 мл/мин.

Температура испарителя - 210 °С - 230 °С.

Температура колонки - 180 °С - 205 °С.

                               -11

    Шкала электрометра - 2 х 10    А.

Линейный диапазон детектирования - 10 - 100 нг.

Минимально детектируемое количество - 10 нг.

Время удерживания - 7,58 мин. (на XE-60) и 4,11 мин. (на SE-30).

Вводимый в колонку газового хроматографа объем анализируемого экстракта - 1 - 2 мкл.

2.6. Обработка результатов

Содержание п-хлорфенилового эфира гераниола в пробе при определении методом ГЖХ рассчитывают по формуле:

                                С   х V  х h  х V

                                 ст    1    2    3

                            Х = ------------------,

                                    V  х h  х М

                                     2    1

    где:

    Х - содержание вещества в пробе, мг/кг, мг/л;

    С   - содержание вещества в стандарте, мкг/мл;

     ст

    V  - объем стандарта введенного в колонку газового хроматографа, мкл;

     1

    V  - объем   анализируемой   пробы,   введенной   в  колонку   газового

     2

хроматографа, мкл;

    V  - общий объем анализируемой пробы, мл;

     3

    h  - высота пика стандарта, мм;

     1

    h  - высота пика анализируемой пробы, мм;

     2

    М - масса пробы, взятой для анализа, г.

3. Требования техники безопасности

В процессе работы по данным Методическим указаниям нужно придерживаться правил техники безопасности, рекомендованных при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.

Методические указания подготовлены Албул И.А. - Всесоюзный научно-исследовательский институт биологических методов защиты растений, г. Кишинев.