Утверждены

Минздравом СССР

3 января 1985 г. N 3193-85

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПРЕПАРАТА ЭФ-34 (ГАМЕТАНА) В ЗЕРНЕ

МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны М.В. Письменной, М.А. Клисенко (ВНИИГИНТОКС).

    Краткая   характеристика   препарата.   Препарат   ЭФ-34   (гаметан)  -

O,O-диизопропилдитиофосфат калия.  Брутто-формула  C H O PS K. Молекулярная

                                                    6 4 2  2

масса  252. Препарат, обладающий гаметацидными свойствами. Т. пл. 199 - 201

°C.  Твердое  вещество,  хорошо  растворимо  в воде. Гидролизуется в кислой

среде  с  выделением сероводорода. В нейтральной среде гидролизуется слабо.

При pH 7 стабилен.

Принцип метода. Метод основан на определении гаметана реакционной газожидкостной хроматографией в виде пентафторбензилового производного после извлечения препарата из зерна (пшеница, рожь) смесью ацетон-этанол (9:1).

Метрологическая характеристика метода. Диапазон линейной зависимости величины хроматографического сигнала от количества введенного в хроматограф препарата гаметана 0,1 - 1,5 нг. Нижний предел обнаружения гаметана 0,1 нг. Нижний предел определения гаметана в зерне 0,02 мг/кг. Среднее значение определения 50,5%. Стандартное отклонение 2,2%. Доверительный интервал среднего (при p = 0,95, n = 5) с учетом коэффициента пересчета на полноту экстракции (K = 2) 42,8%.

Избирательность метода. Другие ФОП определению не мешают. При необходимости их можно идентифицировать до получения пентафторпроизводного гаметана. Относительное время удерживания пентафторбензолового производного по отношению к метафосу 0,79.

    Реактивы   и   растворы.   Гаметан  х.ч.  Ацетон  х.ч.  Этиловый  спирт

96-процентный. Фильтры  бумажные "красная лента". Сульфат  натрия безводный

ч.д.а.  Пентафторбензиловый   спирт.  Трехбромистый  фосфор  ч.  Бром  х.ч.

Четыреххлористый  углерод  х.ч. Азот особой чистоты, содержание O  не более

                                                                 2

0,003%. Водород  из  баллона  или получаемый из генератора водорода. Воздух

из баллона или нагнетаемый компрессором. Основной стандартный раствор (N 1)

гаметана (500 мкг/мл)  готовят  растворением  50 мг х.ч. пестицида в 100 мл

ацетона. Хранят в холодильнике 2 мес.

Рабочий стандартный раствор гаметана в ацетоне (5 мкг/мл) готовят из раствора N 1. Хранят в холодильнике не дольше 7 дней.

Приборы и посуда. Хроматограф марки "Цвет" или аналогичный с ТИД. Колонка хроматографическая стеклянная длиной 1 м, диаметром 3,5 мм, заполненная хроматоном N-AW-HMDS (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30. Ротационный вакуумный испаритель. Аппарат для встряхивания колб. Колбы: мерные вместимостью 25; 50 и 100 мл; конические с притертыми пробками вместимостью 50 и 250 мл; грушевидные вместимостью 50 мл. Холодильник стеклянный лабораторный. Трехгорлая колба на шлифах вместимостью 250 мл. Воронки химические. Воронки делительные вместимостью 100 и 50 мл. Пипетки на 1; 5 и 10 мл. Микрошприцы на 10 мкл.

    Подготовка  к определению. Получение пентафторбензилбромида. Прибор для

получения    пентафторбензилбромида  -  трехгорлая   колба   на   250   мл,

оборудованная  мешалкой, обратным холодильником и капельной воронкой. Колбу

охлаждают  смесью  льда  с  солью  до  0 - -5  °C,  помещают  в  нее  60 мл

высушенного над безводным сульфатом натрия четыреххлористого углерода, 2 мл

трехбромистого  фосфора  (PBr ).  (При работе с PBr  и Br  требуется особая

                             3                     3     2

осторожность.)  При  перемешивании  каплями добавляют 1,05 мл жидкого брома

(Br ).   Образуется  светло-желтый  осадок  PBr .  После  этого  также  при

   2                                           5

охлаждении  прибавляют  из  капельной  воронки  3,9  г пентафторбензилового

спирта,  растворенного в 10 мл CCl  (прибавляют в течение 1 ч). Охлажденную

                                  4

баню  снимают  и  постепенно нагревают смесь на водяной бане до температуры

кипения.  Кипячение  продолжают  в  течение  6  ч. Затем, после охлаждения,

реакционную   массу   осторожно   порциями  выливают  в  стакан  со  100  г

тонкоизмельченного  льда.  Стакан  со льдом также находится в ледяной бане.

Когда  лед  растает,  отделяют с помощью делительной воронки водный слой, а

слой  с  CCl   промывают водой несколько раз  до нейтральной реакции. Затем

            4

органический  слой (CCl ) сушат над безводным сульфатом магния в течение 16

                       4

ч,  переносят  в  пробирку  для  отгонки  растворителей и отгоняют CCl  при

                                                                      4

температуре бани 75 - 76 °C. В колбе остается пентафторбензилбромид.

Ход анализа. Экстракция. Измельченное до размера частиц 2 - 3 мм зерно пшеницы, ржи (25 г) помещают в коническую колбу со шлифом, заливают 50 мл смеси ацетона с этанолом (9:1) и экстрагируют в течение 3 ч на аппарате для встряхивания. Фильтруют растворитель через бумажный фильтр "красная лента" с насыпанным на него слоем (4 - 5 г) безводного сульфата натрия. Зерно дважды промывают смесью ацетона с этанолом (9:1) порциями по 15 мл и присоединяют смывы к экстракту. Упаривают растворитель досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани 50 - 60 °C.

Получение пентафторбензилового производного гаметана. К сухому остатку в колбе прибавляют 10 мл ацетона, 0,2 мл 1-процентного раствора в ацетоне пентафторбензилбромида и 30 мкл 30-процентного водного (промытого бензолом) раствора углекислого кальция, хорошо встряхивают и нагревают с обратным холодильником при температуре бани 65 - 70 °C в течение 20 мин. Фильтруют через бумажный фильтр, доводят объем до 10 мл ацетоном и анализируют методом ГЖХ. Для увеличения чувствительности можно упарить растворитель до объема 2 мл. Параллельно аналогичную реакцию проводят с рабочим стандартом (0,2 мл раствора с концентрацией 5 мкг/мл). Конечный объем доводят до 2 мл, т.о. готовят стандартный раствор (0,5 мкг/мл).

    Газохроматографическоское определение.  Используют хроматограф "Цвет" с

ТИД.  Колонка стеклянная спиральная длиной 1 м, диаметром 3 мм, заполненная

хроматоном   N-AW-HMDS   (0,16  -  0,20  мм)  с  5%  SE-30.  Рабочая  шкала

                      -10

электрометра  2  x  10     А. Скорость протяжки ленты 240 мм/ч. Температура

испарители  210  °C,  термостата  колонки - 190 °C. Расход газа-носителя 24

мл/мин., водорода 17 мл/мин., воздуха 400 мл/мин.

Вводят в хроматограф последовательно по 3 - 5 мкл стандартного раствора пентафторбензилового производного гаметана, содержащего 0,2 - 1 мкг/мл пестицида, а затем такой же объем пробы. Нижний предел обнаружения 0,1 нг. Время удерживания пентафторбензилового производного ЭФ-34 (гаметана) 3 мин. 48 с.

Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки по высоте или площади хроматографических пиков. Расчет содержания пестицида в пробе (X, мг/кг) проводят по формуле:

                                     2CHV

                                X = ------,

                                    H  V P

                                     ст 1

    где:

    C  -  количество  пестицида  в  хроматографируемом  объеме стандартного

раствора, нг;

    H   - высота (площадь) пика на хроматограмме стандарта, мм (кв. мм);

     ст

    H - высота (площадь) пика на хроматограмме пробы, мм (кв. мм);

    V  - объем хроматографируемой пробы, мкл;

     1

    V - общий объем анализируемого экстракта, мл;

    P - масса анализируемой пробы, г;

    2 - поправочный коэффициент на полноту экстракции.

    Требования  безопасности.  Соблюдают  общепринятые правила безопасности

при работе с органическими растворителями и токсичными веществами. С PBr  и

                                                                        3

Br  работать нужно под тягой, соблюдая осторожность.

  2