Утверждены

Минздравом СССР

3 января 1985 г. N 3185-85

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ХЛОРОФОСА В КАРТОФЕЛЕ МЕТОДОМ

ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны К.Ф. Новиковой, Ф.Р. Мельцер, Л.И. Лещинской (ВНИИХСЗР).

Краткая характеристика препарата приведена в Унифицированной методике. МДУ хлорофоса в картофеле 0,1 мг/кг.

Принцип метода. Метод основан на извлечении хлорофоса из картофеля ацетоном, перераспределении из водно-ацетонового раствора в хлороформ, очистке экстракта микросублимацией в вакууме с последующим определением тонкослойной хроматографией.

Метрологическая характеристика метода. Предел обнаружения в хроматографируемой пробе: при проявлении резорциновым проявителем - 1 мкг, азотно-серебряным проявителем - 2 мкг. Предел обнаружения в картофеле соответственно 0,05 и 0,1 мг/кг. Среднее значение определения стандартных количеств хлорофоса (при n = 15) 75,7%. Стандартное отклонение (при n = 15) +/- 4,2%. Доверительный интервал среднего определения (при p = 0,95 и n = 5) 75,7 +/- 5,2.

Избирательность метода. Метод селективен. ДДТ, гексахлоран, гептахлор определению не мешают.

Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. Хлороформ ч.д.а. Бензол ч.д.а. Гексан ч.д.а. Гидроксид натрия х.ч., 1 н раствор. Хлорид натрия. Сульфат натрия безводный х.ч. Резорцин х.ч., 2-процентный водный раствор. Аммиак водный (плотность 0,9 г/куб. см). Нитрат серебра ч. Глицерин ч.

    Проявляющие  реагенты:  N  1  -  растворяют  0,5  г  AgNO  в 5 мл воды,

                                                             3

добавляют  4 мл  NH OH и доводят объем раствора до 100 мл ацетоном. Раствор

                   4

хранят  в  темной  склянке  на холоде. Он стабилен в течение 5 - 7 дней. На

одно  определение  расходуют  2 - 3 мл раствора;  N 2 - перед употреблением

смешивают  равные  объемы  2-процентного раствора резорцина и 1 н  раствора

NaOH. На одно определение расходуют 2 - 3 мл проявителя.

    Хлорофос  с  содержанием  основного  вещества не менее 95%. Стандартные

растворы  хлорофоса  в  ацетоне  с содержанием 100 и 10 мкг/мл. Стандартные

растворы  хлорофоса  стабильны при хранении в холодильнике в течение 1 мес.

Пластинки "Силуфол" УФ   .

                      254

Приборы и посуда. Хроматографическая камера с притертой крышкой. Аппарат для встряхивания. Ротационный вакуумный испаритель ИР-1 или аналогичный. Лампа УФ-света, медицинская МРТУ или аналогичная. Прибор для микросублимации в вакууме. Насос высокого разряжения. Пульверизаторы стеклянные. Делительные воронки на 750 мл. Колбы: конические на 250 и 50 мл; круглодонные на 500 мл; грушевидные на 50 мл; плоскодонные на 100 и 500 мл. Мерные цилиндры на 100 мл. Пробирки с оттянутым концом на 5 мл.

Подготовка к определению. Хроматографические камеры заполняют за 1 ч до начала хроматографирования системами подвижных растворителей: гексан-ацетон (1:1) и бензол-ацетон (2:1). Подвижный растворитель в камере должен находиться не выше 0,7 - 1 см над уровнем дна камеры.

Ход анализа. Навеску (20 г) разрезанного на мелкие кусочки картофеля (с длиной граней не более 0,5 см) помещают в плоскодонную колбу вместимостью 100 мл и заливают 50 мл ацетона. Экстракцию хлорофоса проводят при помощи механического встряхивания колбы в течение 30 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку на 750 мл. Экстракцию хлорофоса проводят еще дважды тем же количеством ацетона. К объединенному в делительной воронке экстракту добавляют 10 г хлорида натрия и 50 мл хлороформа, предварительно насыщенного водой. Воронку закрывают пробкой на шлифе и ее содержимое энергично встряхивают в течение нескольких секунд. Дают слоям разделиться, нижний хлороформный слой переносят в коническую колбу на 500 мл. Эту операцию повторяют еще 4 раза.

Объединенный хлороформный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (20 - 25 г) в течение нескольких минут. Экстракт фильтруют порциями через бумажный фильтр в круглодонную колбу на 50 мл и отгоняют растворитель с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 3 - 5 мл. Остаток количественно переносят в патрон сублиматора и испаряют растворитель на горячей водяной бане досуха. В патрон вставляют "палец" сублиматора и проводят сублимацию в течение 30 мин. на глицериновой бане при температуре 130 - 140 °C и давлении 40 - 80 Па (0,3 - 0,6 мм рт. ст.).

    После  охлаждения  и  снятия  разряжения  "палец" сублиматора осторожно

вынимают из патрона и смывают с него хлорофос 10 мл ацетона через воронку в

грушевидную   колбу   с   оттянутым  концом  вместимостью  50  мл.  Удаляют

растворитель  на  ротационном  вакуумном испарителе до объема 0,1 - 0,2 мл.

Оставшуюся  каплю  с помощью стеклянного капилляра количественно наносят на

хроматографическую  пластинку  "Силуфол"  УФ   ,  предварительно промытую в

                                            254

хроматографической  камере ацетоном и высушенную при комнатной температуре.

По  краям  от пробы наносят серию стандартов хлорофоса: 0,5; 1,0; 2,0; 3,0;

4,0 и 5,0 мкг.

    Серию  стандартов  готовят  следующим  образом.  В пробирку с оттянутым

концом  с  помощью пипетки вместимостью 1 мл переносят 0,05; 0,1; 0,2; 0,3;

0,4  и  0,5  мл  стандартного  раствора  хлорофоса с содержанием 10 мкг/мл.

Содержимое  пробирок концентрируют на горячей водяной бане  до объема 0,1 -

0,2  мл  и  наносят на пластинку с помощью стеклянных капилляров. Пластинку

помещают  в  камеру,  на дно которой налит бензол. Когда фронт растворителя

достигнет  края хроматографической пластинки, ее вынимают из камеры и сушат

на  воздухе.  Высушенную  пластинку помещают в хроматографическую камеру, и

развивают  хроматограмму  в  системе  подвижных  растворителей  -  гексан с

ацетоном   (1:1)   или   бензол   с   ацетоном   (2:1).   После   окончания

хроматографирования  пластинку  сушат  на  воздухе,  а  затем  обрабатывают

проявляющим  реагентом  N  1  или  N  2. При проявлении пластин проявляющим

реагентом N 1 обработанную хроматограмму помещают под лампу УФ-света на 5 -

7  мин.  Хлорофос  проявляется  на  пластинке  в  виде темно-серых пятен на

светлом  фоне  с  R   0,65  +/- 0,04. Пятна стабильны в течение длительного

                   f

времени.   Линейный  диапазон  детектирования  0,5  -  5  мкг  хлорофоса  в

хроматографируемой пробе.

    При проявлении хроматограмм проявляющим реагентом N 2 хлорофос виден на

пластинке  в  виде  оранжевых  пятен на светлом фоне с R  0,65 +/- 0,04 при

                                                        f

развитии  хроматограмм  в первой системе подвижных растворителей и 0,36 +/-

0,02 - при развитии хроматограмм во второй системе подвижных растворителей.

Пятна  стабильны 10 - 15 мин. Линейный диапазон детектирования 1 - 10 мкг в

пробе.

Обработка результатов анализа. Содержание хлорофоса в пробе определяют, сравнивая площадь и интенсивность окраски пятен рабочей пробы и серии стандартов. При большом содержании хлорофоса в рабочую пробу после упаривания растворителя пипеткой вносят известное количество ацетона и хроматографируют аликвоту раствора.

Содержание хлорофоса в анализируемой пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

                                     AV

                                 X = ---,

                                     V P

                                      a

    где:

    A - количество хлорофоса, найденное в хроматографируемой пробе, мкг;

    V - общий объем раствора, из которого отбирают аликвоту, мл;

    V   -  объем  аликвоты,  нанесенной на хроматографическую пластинку, мл

     a

(при внесении всей пробы V = V );

                              a

    P - навеска анализируемой пробы картофеля, г.

Требования безопасности. Соблюдают правила безопасности, принятые для работы с пестицидами и легковоспламеняющимися жидкостями.